Introdução: As síndromes de Li-Fraumeni (LFS) e Li-Fraumeni Like (LFL) são síndromes hereditárias de predisposição a câncer frequentemente associadas à mutações germinativas no gene TP53. Devido à importância de p53 e diversidade de processos celulares que ela regula, várias vias de sinalização podem ser afetadas pela doença. Nesse estudo discutimos o impacto da mutação p.R337H na proliferação, senescência, autofagia, população e funcionalidade mitocondrial. Métodos: As taxas de proliferação foram avaliadas pelo ensaio de Population Doubling. Os experimentos de senescência, autofagia, massa total e funcionalidade mitocondrial foram realizados por citometria de fluxo. Resultados: As células contendo a mutação proliferaram mais do que as células controle. Além disso, as células mutadas não ativaram autofagia sob tratamento de Rapamicina nem senescência sob tratamento de Doxorubicina ou Cisplatina e exibiram maior população mitocondrial, mas com funcionalidade inalterada após os tratamentos. Conclusão: os dados sugerem que a mutação p.R337H em TP53 afeta a indução de senescência realizada por p53 e suas funções pró-autofágicas, bem como seu controle. As células mutadas proliferam mais do que células sem mutação em TP53 e exibiram maior massa mitocondrial sem perda de funcionalidade após o tratamento com Doxorubicina. / Background: Li-Fraumeni (LFS) and Li-Fraumeni Like (LFL) syndromes are hereditary cancer predisposition syndromes frequently associated with germline mutation in TP53. Due to the importance of the protein p53 and its regulation of several important cellular processes, impairment in some pathways can be implicated. Here we discuss the impact of p.R337H TP53 mutation on proliferation, senescence, autophagy, mitochondrial population and functionality. Methods: Growth rates were assayed with Population Doubling assay. Senescence and autophagy were assessed through flow cytometry and functionality and total population of mitochondria were also analyzed through flow cytometry. Results: mutated cells proliferated more than control cells. TP53 mutated cells didn’t build up autophagy under Rapamycin treatmend nor senescence under Doxorubicin or Cisplatin treatments and showed more mitochondrial mass, but no alterations in mitochondrial functionality after Doxorubicin treatment. Conclusion:data suggests that p.R337H TP53 mutation affect senescence induction by p53 and pro-autophagic actions of p53. Mutated cells proliferate more than control cells and exhibited larger mitochondrial mass without effects in their functionality in response to Doxorubicin treatment.

Introdução: As síndromes de Li-Fraumeni (LFS) e Li-Fraumeni Like (LFL) são síndromes hereditárias de predisposição a câncer frequentemente associadas à mutações germinativas no gene TP53. Devido à importância de p53 e diversidade de processos celulares que ela regula, várias vias de sinalização podem ser afetadas pela doença. Nesse estudo discutimos o impacto da mutação p.R337H na proliferação, senescência, autofagia, população e funcionalidade mitocondrial. Métodos: As taxas de proliferação foram avaliadas pelo ensaio de Population Doubling. Os experimentos de senescência, autofagia, massa total e funcionalidade mitocondrial foram realizados por citometria de fluxo. Resultados: As células contendo a mutação proliferaram mais do que as células controle. Além disso, as células mutadas não ativaram autofagia sob tratamento de Rapamicina nem senescência sob tratamento de Doxorubicina ou Cisplatina e exibiram maior população mitocondrial, mas com funcionalidade inalterada após os tratamentos. Conclusão: os dados sugerem que a mutação p.R337H em TP53 afeta a indução de senescência realizada por p53 e suas funções pró-autofágicas, bem como seu controle. As células mutadas proliferam mais do que células sem mutação em TP53 e exibiram maior massa mitocondrial sem perda de funcionalidade após o tratamento com Doxorubicina. / Background: Li-Fraumeni (LFS) and Li-Fraumeni Like (LFL) syndromes are hereditary cancer predisposition syndromes frequently associated with germline mutation in TP53. Due to the importance of the protein p53 and its regulation of several important cellular processes, impairment in some pathways can be implicated. Here we discuss the impact of p.R337H TP53 mutation on proliferation, senescence, autophagy, mitochondrial population and functionality. Methods: Growth rates were assayed with Population Doubling assay. Senescence and autophagy were assessed through flow cytometry and functionality and total population of mitochondria were also analyzed through flow cytometry. Results: mutated cells proliferated more than control cells. TP53 mutated cells didn’t build up autophagy under Rapamycin treatmend nor senescence under Doxorubicin or Cisplatin treatments and showed more mitochondrial mass, but no alterations in mitochondrial functionality after Doxorubicin treatment. Conclusion:data suggests that p.R337H TP53 mutation affect senescence induction by p53 and pro-autophagic actions of p53. Mutated cells proliferate more than control cells and exhibited larger mitochondrial mass without effects in their functionality in response to Doxorubicin treatment.

Introdução: As síndromes de Li-Fraumeni (LFS) e Li-Fraumeni Like (LFL) são síndromes hereditárias de predisposição a câncer frequentemente associadas à mutações germinativas no gene TP53. Devido à importância de p53 e diversidade de processos celulares que ela regula, várias vias de sinalização podem ser afetadas pela doença. Nesse estudo discutimos o impacto da mutação p.R337H na proliferação, senescência, autofagia, população e funcionalidade mitocondrial. Métodos: As taxas de proliferação foram avaliadas pelo ensaio de Population Doubling. Os experimentos de senescência, autofagia, massa total e funcionalidade mitocondrial foram realizados por citometria de fluxo. Resultados: As células contendo a mutação proliferaram mais do que as células controle. Além disso, as células mutadas não ativaram autofagia sob tratamento de Rapamicina nem senescência sob tratamento de Doxorubicina ou Cisplatina e exibiram maior população mitocondrial, mas com funcionalidade inalterada após os tratamentos. Conclusão: os dados sugerem que a mutação p.R337H em TP53 afeta a indução de senescência realizada por p53 e suas funções pró-autofágicas, bem como seu controle. As células mutadas proliferam mais do que células sem mutação em TP53 e exibiram maior massa mitocondrial sem perda de funcionalidade após o tratamento com Doxorubicina. / Background: Li-Fraumeni (LFS) and Li-Fraumeni Like (LFL) syndromes are hereditary cancer predisposition syndromes frequently associated with germline mutation in TP53. Due to the importance of the protein p53 and its regulation of several important cellular processes, impairment in some pathways can be implicated. Here we discuss the impact of p.R337H TP53 mutation on proliferation, senescence, autophagy, mitochondrial population and functionality. Methods: Growth rates were assayed with Population Doubling assay. Senescence and autophagy were assessed through flow cytometry and functionality and total population of mitochondria were also analyzed through flow cytometry. Results: mutated cells proliferated more than control cells. TP53 mutated cells didn’t build up autophagy under Rapamycin treatmend nor senescence under Doxorubicin or Cisplatin treatments and showed more mitochondrial mass, but no alterations in mitochondrial functionality after Doxorubicin treatment. Conclusion:data suggests that p.R337H TP53 mutation affect senescence induction by p53 and pro-autophagic actions of p53. Mutated cells proliferate more than control cells and exhibited larger mitochondrial mass without effects in their functionality in response to Doxorubicin treatment.

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A síndrome de Li-Fraumeni (SLF) é uma síndrome rara de predisposição a câncer associada a mutações germinativas no gene supressor tumoral TP53. As vias de sinalização da proteína p53 estão envolvidas na regulação da apoptose, das paradas do ciclo celular, da senescência e do reparo de danos no DNA. As mutações em p53 mais comumente encontradas em tumores estão distribuídas ao longo do domínio de ligação ao DNA, incluindo a mutação G245S associada à SLF. No entanto, a mutação mais frequentemente associada à SLF nas regiões Sul e Sudeste do Brasil é a mutação R337H, que afeta o domínio de oligomerização de p53. Assim, o objetivo deste estudo foi analisar os efeitos em células de p53 mutantes associadas à síndrome de SLF na viabilidade em condições basais e na sobrevivência celular sob estresse genotóxico. Células p53 null da linhagem NCI-H1299 foram transfectadas com vetores para a expressão de p53 wt e das mutantes G245S e R337H, e ensaios celulares foram realizados. A mutante R337H inibiu a formação de colônias e diminuiu a viabilidade celular de forma similar ao observado para células com expressão p53 wt, enquanto G245S demonstrou menor influência sobre a viabilidade e sobre a proliferação das células. Após submetidas a estresse genotóxico induzido por meio de exposições à radiação UVC, células com expressão de R337H mostraram-se mais sensíveis à morte celular mesmo quando expostas à baixa dose de UVC. Já as células com a expressão de G245S apresentaram aumento nas taxas de apoptose tardia somente quando submetidas a altas doses de radiação de UVC, assim como nas células com expressão de p53 wt. Dessa forma, foram observadas atividades funcionais similares entre R337H e p53 wt quanto à influência sobre a viabilidade e sobre a proliferação celular, enquanto células com expressão de G245S apresentaram fenótipo celular mais próximo ao p53-null. Todavia, G245S demonstrou atividade próxima a de p53 wt ao conferir proteção às células contra morte induzida pela radiação UVC, e a mutante R337H gerou maior sensibilidade para morte celular em condições de estresse genotóxico. / Li-Fraumeni syndrome (LFS) is a hereditary cancer predisposition disorder associated with germline mutations in the TP53 tumor suppressor gene. The p53 signaling pathways are involved in the regulation of apoptosis, cell cycle arrest, senescence and DNA repair. The p53 mutations found in tumors are commonly distributed along the DNA binding domain, including the G245S mutation associated with LFS. However, the most frequent p53 mutation associated with LFS in Southeast and Southern Brazil is the R337H mutation, which affects the oligomerization domain of p53. Thus, the aim of this study is to analyze the effects of mutant p53 associated with LFS on cell viability at basal conditions and on cell survival in genotoxic stress. Null-p53 NCI-H1299 cell line were transfected with vectors for the expression of wild-type, G245S and R337H p53, and cell assays were performed. The R337H mutant inhibited the colony formation and decreased the cell viability similar to that observed in cells with wt p53 expression, while G245S demonstrated less influence on cell viability. After undergoing genotoxic stress induced by UVC radiation exposures, cells with R337H expression were more sensitive to cell death when exposed to low UVC dose. Cells with G245S expression showed an increase in late apoptosis rates only when subjected to high doses of UVC radiation, as well as cells with wt p53 expression. Thus, similar and functional activities were observed between R337H and wt p53 concerning influence on cell viability and proliferation, with the expression of G245S presented cellular phenotype closer to p53-null. However, G245S demonstrated to confer protection for cell death as seen for wt p53, whereas R337H generated increased of sensitivity to cell death under conditions of genotoxic stress.

A síndrome de Li-Fraumeni (SLF) é uma síndrome rara de predisposição a câncer associada a mutações germinativas no gene supressor tumoral TP53. As vias de sinalização da proteína p53 estão envolvidas na regulação da apoptose, das paradas do ciclo celular, da senescência e do reparo de danos no DNA. As mutações em p53 mais comumente encontradas em tumores estão distribuídas ao longo do domínio de ligação ao DNA, incluindo a mutação G245S associada à SLF. No entanto, a mutação mais frequentemente associada à SLF nas regiões Sul e Sudeste do Brasil é a mutação R337H, que afeta o domínio de oligomerização de p53. Assim, o objetivo deste estudo foi analisar os efeitos em células de p53 mutantes associadas à síndrome de SLF na viabilidade em condições basais e na sobrevivência celular sob estresse genotóxico. Células p53 null da linhagem NCI-H1299 foram transfectadas com vetores para a expressão de p53 wt e das mutantes G245S e R337H, e ensaios celulares foram realizados. A mutante R337H inibiu a formação de colônias e diminuiu a viabilidade celular de forma similar ao observado para células com expressão p53 wt, enquanto G245S demonstrou menor influência sobre a viabilidade e sobre a proliferação das células. Após submetidas a estresse genotóxico induzido por meio de exposições à radiação UVC, células com expressão de R337H mostraram-se mais sensíveis à morte celular mesmo quando expostas à baixa dose de UVC. Já as células com a expressão de G245S apresentaram aumento nas taxas de apoptose tardia somente quando submetidas a altas doses de radiação de UVC, assim como nas células com expressão de p53 wt. Dessa forma, foram observadas atividades funcionais similares entre R337H e p53 wt quanto à influência sobre a viabilidade e sobre a proliferação celular, enquanto células com expressão de G245S apresentaram fenótipo celular mais próximo ao p53-null. Todavia, G245S demonstrou atividade próxima a de p53 wt ao conferir proteção às células contra morte induzida pela radiação UVC, e a mutante R337H gerou maior sensibilidade para morte celular em condições de estresse genotóxico. / Li-Fraumeni syndrome (LFS) is a hereditary cancer predisposition disorder associated with germline mutations in the TP53 tumor suppressor gene. The p53 signaling pathways are involved in the regulation of apoptosis, cell cycle arrest, senescence and DNA repair. The p53 mutations found in tumors are commonly distributed along the DNA binding domain, including the G245S mutation associated with LFS. However, the most frequent p53 mutation associated with LFS in Southeast and Southern Brazil is the R337H mutation, which affects the oligomerization domain of p53. Thus, the aim of this study is to analyze the effects of mutant p53 associated with LFS on cell viability at basal conditions and on cell survival in genotoxic stress. Null-p53 NCI-H1299 cell line were transfected with vectors for the expression of wild-type, G245S and R337H p53, and cell assays were performed. The R337H mutant inhibited the colony formation and decreased the cell viability similar to that observed in cells with wt p53 expression, while G245S demonstrated less influence on cell viability. After undergoing genotoxic stress induced by UVC radiation exposures, cells with R337H expression were more sensitive to cell death when exposed to low UVC dose. Cells with G245S expression showed an increase in late apoptosis rates only when subjected to high doses of UVC radiation, as well as cells with wt p53 expression. Thus, similar and functional activities were observed between R337H and wt p53 concerning influence on cell viability and proliferation, with the expression of G245S presented cellular phenotype closer to p53-null. However, G245S demonstrated to confer protection for cell death as seen for wt p53, whereas R337H generated increased of sensitivity to cell death under conditions of genotoxic stress.

A síndrome de Li-Fraumeni (SLF) é uma síndrome rara de predisposição a câncer associada a mutações germinativas no gene supressor tumoral TP53. As vias de sinalização da proteína p53 estão envolvidas na regulação da apoptose, das paradas do ciclo celular, da senescência e do reparo de danos no DNA. As mutações em p53 mais comumente encontradas em tumores estão distribuídas ao longo do domínio de ligação ao DNA, incluindo a mutação G245S associada à SLF. No entanto, a mutação mais frequentemente associada à SLF nas regiões Sul e Sudeste do Brasil é a mutação R337H, que afeta o domínio de oligomerização de p53. Assim, o objetivo deste estudo foi analisar os efeitos em células de p53 mutantes associadas à síndrome de SLF na viabilidade em condições basais e na sobrevivência celular sob estresse genotóxico. Células p53 null da linhagem NCI-H1299 foram transfectadas com vetores para a expressão de p53 wt e das mutantes G245S e R337H, e ensaios celulares foram realizados. A mutante R337H inibiu a formação de colônias e diminuiu a viabilidade celular de forma similar ao observado para células com expressão p53 wt, enquanto G245S demonstrou menor influência sobre a viabilidade e sobre a proliferação das células. Após submetidas a estresse genotóxico induzido por meio de exposições à radiação UVC, células com expressão de R337H mostraram-se mais sensíveis à morte celular mesmo quando expostas à baixa dose de UVC. Já as células com a expressão de G245S apresentaram aumento nas taxas de apoptose tardia somente quando submetidas a altas doses de radiação de UVC, assim como nas células com expressão de p53 wt. Dessa forma, foram observadas atividades funcionais similares entre R337H e p53 wt quanto à influência sobre a viabilidade e sobre a proliferação celular, enquanto células com expressão de G245S apresentaram fenótipo celular mais próximo ao p53-null. Todavia, G245S demonstrou atividade próxima a de p53 wt ao conferir proteção às células contra morte induzida pela radiação UVC, e a mutante R337H gerou maior sensibilidade para morte celular em condições de estresse genotóxico. / Li-Fraumeni syndrome (LFS) is a hereditary cancer predisposition disorder associated with germline mutations in the TP53 tumor suppressor gene. The p53 signaling pathways are involved in the regulation of apoptosis, cell cycle arrest, senescence and DNA repair. The p53 mutations found in tumors are commonly distributed along the DNA binding domain, including the G245S mutation associated with LFS. However, the most frequent p53 mutation associated with LFS in Southeast and Southern Brazil is the R337H mutation, which affects the oligomerization domain of p53. Thus, the aim of this study is to analyze the effects of mutant p53 associated with LFS on cell viability at basal conditions and on cell survival in genotoxic stress. Null-p53 NCI-H1299 cell line were transfected with vectors for the expression of wild-type, G245S and R337H p53, and cell assays were performed. The R337H mutant inhibited the colony formation and decreased the cell viability similar to that observed in cells with wt p53 expression, while G245S demonstrated less influence on cell viability. After undergoing genotoxic stress induced by UVC radiation exposures, cells with R337H expression were more sensitive to cell death when exposed to low UVC dose. Cells with G245S expression showed an increase in late apoptosis rates only when subjected to high doses of UVC radiation, as well as cells with wt p53 expression. Thus, similar and functional activities were observed between R337H and wt p53 concerning influence on cell viability and proliferation, with the expression of G245S presented cellular phenotype closer to p53-null. However, G245S demonstrated to confer protection for cell death as seen for wt p53, whereas R337H generated increased of sensitivity to cell death under conditions of genotoxic stress.

Abstract In the present study, mutations in BRCA1 and BRCA2, the two major genes predisposing individuals to hereditary breast and ovarian cancer, were screened in Finnish and Turkish cancer families. Germline BRCA1 mutations were found in 7% (6/88) and BRCA2 mutations in 6% (5/88) of the Finnish families studied in Oulu. Two distinct BRCA1 (3745delT, 4216nt-2A→G) and three BRCA2 (999delTCAAA, 6503delTT, 9346nt-2A→G) mutations were identified, all of which are recurrently found in Finland. In the 15 Turkish cancer families studied, 5382insC and 5622C→T were detected in BRCA1, and 3414delTCAG in BRCA2. The novel 3414del4 mutation was found in a family with a case of male breast cancer. In order to determine their ages and origin, 9 recurrent Finnish BRCA1 and BRCA2 mutations were studied further as regards haplotype conservation. Common origins approximately 18–80 generations (400–1600 years) ago were demonstrated for all studied mutations by partial haplotype sharing. The majority of the mutations showed geographical clustering, supporting the theory of regional founder effects. Four of the nine mutations are unique for Finland, whereas five have also been seen elsewhere. Mutations in the 5' end of BRCA1 tend to predispose individuals to ovarian cancer and those found in the 3' end to breast cancer. The age of ovarian cancer onset was significantly lower for BRCA1 (51 years) than for BRCA2 mutation carriers (61 years). Germline TP53 mutations were sought in the Finnish breast cancer families found to be negative after BRCA1 and BRCA2 screening but who exhibited some phenotypic features of the Li-Fraumeni syndrome. The Asn235Ser was found in a family displaying Li-Fraumeni syndrome phenotype and the Tyr220Cys in a family with a milder Li-Fraumeni-like phenotype. The nature of both mutations as cancer-predisposing alterations was supported by means of loss of heterozygosity (LOH) and p53 immunohistochemistry studies. Regional clustering of BRCA1 and BRCA2 founder mutations enables targeted genetic tests including especially those mutations characteristic of the birthplace of each patient. Additional genes are likely to explain a large proportion of the inherited susceptibility to breast cancer in particular. Germline TP53 mutations are expected to be found in the breast cancer families with other clinical features seen in the Li-Fraumeni syndrome.

Li-Fraumeni Syndrome (LFS) is a rare cancer predisposition syndrome, typically involving germline mutations in the TP53 gene. Despite the high penetrance of TP53 mutations, LFS patients display striking phenotypic differences, suggesting the presence of secondary risk loci. To date, all genetic modifiers in LFS have been shown to map to either TP53 or its principal negative regulator, Mdm2. Given this strong association, we set out to interrogate the contribution of a recently-described miRNA regulator of the p53-MDM2 loop, called miR-605. We hypothesized that, if functional, the miR-605 gene and its variant (rs2043556) could impact cancer risk in TP53 mutation carriers. Consistent with this proposition, the variant allele of miR-605 was associated with a significant acceleration in tumor onset and caused a decrease in the processing efficiency of its host miRNA. We also demonstrate that miR-605 overexpression activates the MAPK pathway and leads to tumor suppression in TP53 mutant cell lines.

Li-Fraumeni Syndrome (LFS) is a rare cancer predisposition syndrome, typically involving germline mutations in the TP53 gene. Despite the high penetrance of TP53 mutations, LFS patients display striking phenotypic differences, suggesting the presence of secondary risk loci. To date, all genetic modifiers in LFS have been shown to map to either TP53 or its principal negative regulator, Mdm2. Given this strong association, we set out to interrogate the contribution of a recently-described miRNA regulator of the p53-MDM2 loop, called miR-605. We hypothesized that, if functional, the miR-605 gene and its variant (rs2043556) could impact cancer risk in TP53 mutation carriers. Consistent with this proposition, the variant allele of miR-605 was associated with a significant acceleration in tumor onset and caused a decrease in the processing efficiency of its host miRNA. We also demonstrate that miR-605 overexpression activates the MAPK pathway and leads to tumor suppression in TP53 mutant cell lines.