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Produção e caracterização da atividade de tirosinase no extrato bruto de Pycnoporus sanguineus CCT-4518 / Production and characterization of tyrosinase activity in Pycnoporus sanguineus CCT-4518 crude extractDUARTE, Livia Teixeira 15 July 2009 (has links)
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DISSERTACAO DEFINITIVA c ficha catalografica.pdf: 2149699 bytes, checksum: ebcbff0f45d07e12d12a9708947a59eb (MD5)
Previous issue date: 2009-07-15 / Tyrosinase (E.C.1.14.18.1) is an enzyme of industrial interest that catalyses the ohydroxylation
of monophenols (monophenolase activity) and the oxidation of o-diphenols to
reactive o-quinones (diphenolase activity), both reactions using molecular oxygen.
Pycnoporus sanguineus (L. ex Fries) Murril, is a white rot fungi capable of producing
tyrosinase and widely distributed in nature. It is found in regions of mild climate and in
tropical forest. The production and characterization of tyrosinase from P. sanguineus were
investigated. The selection of inductors, determination of the luminosity influence, biomass
and culture media in the production of tyrosinase and the effect of inhibitors on enzyme
activity were determined. The fungus produced intracellular tyrosinase and the higher activity
was observed using 0.15% L-tyrosine as inducer, in the presence of light, with inoculum of 10
mycelium discs, medium malt extract broth 2%, incubation at 30°C, and constant agitation of
150 rpm, during 2 days. 6 mmol.L-1 salicylhydroxamic acid (SHAM) and 6 mmol.L-1
phenylthiourea (PTU) inhibited 100% of the tyrosinase activity. 0.1 mmol.L-1 sodium azide
inhibited 4.15% of tyrosinase activity, while no inhibition was observed after addition of 0.1
mmol.L-1 of phenylmethanesulfonyl fluoride (PMSF). Using L-dopa as substrate, the
intracellular crude extract presented optimum pH of 6,6, optimum temperature of 45°C, low
stability at 50°C, maintaining about 50% of the activity after 15 min of incubation. The
tyrosinase production was confirmed by non-denaturing polyacrylamide gel electrophoresis,
using commercial fungal tyrosinase as positive control / A tirosinase (E.C.1.14.18.1), também conhecida como polifenoloxidase ou catecolase, é uma
enzima de interesse industrial que catalisa a o-hidroxilação de monofenóis (atividade
monofenolase) e a subseqüente oxidação do o-difenol resultante em o-quinonas reativas
(atividade difenolase), usando oxigênio molecular. O Pycnoporus sanguineus (L. ex Fries)
Murril, um fungo de decomposição branca (white rot) capaz de produzir a tirosinase, é
amplamente distribuído na natureza, sendo encontrado em regiões de clima mais ameno e em
florestas tropicais. A produção e caracterização da tirosinase produzida por P. sanguineus foi
investigada. Foi realizada seleção de indutores, determinação da influência da luminosidade,
biomassa e meios de cultura na produção de tirosinase, bem como o efeito de inibidores sobre
a atividade enzimática. O extrato bruto enzimático foi caracterizado quanto ao pH ótimo,
temperatura ótima e termoestabilidade. Os resultados obtidos demonstraram que o fungo
produziu tirosinase intracelular e a mais alta atividade ocorreu com a utilização de 0,15% de
L-tirosina como indutor, na presença de luz, com inóculo de 10 discos de micélio fúngico,
meio caldo extrato de malte 2%, incubação à 30°C e agitação de 150 rpm, durante 2 dias.
Ácido salicilhidroxâmico (SHAM) 6 mmol.L-1 e feniltiouréia (PTU) 6 mmol.L-1 inibiram
100% da atividade de tirosinase. Azida sódica 0,1 mmol.L-1 inibiu 4,15% da atividade de
tirosinase, enquanto nenhuma inibição foi observada após adição de fluoreto de
fenilmetanosulfonil (PMSF) 0,1 mmol.L-1. Utilizando a L-dopa como substrato, o extrato
bruto intracelular apresentou pH ótimo de 6,6, temperatura ótima de 45°C, baixa estabilidade
à temperatura de 50°C, mantendo apenas cerca de 50% de atividade após 15 minutos de
incubação. A produção da tirosinase foi comprovada através de eletroforese em gel de
poliacrilamida não desnaturante, tendo como controle positivo tirosinase fúngica comercial
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Estudo do potencial de remoção de substâncias húmicas na água com aplicação de enzimas fúngicas / Study of potential removal of humic substances in the water with application fungal enzymesCAMPOS, Rykelly Faria 02 September 2011 (has links)
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Previous issue date: 2011-09-02 / The humic substance (SHs), organic matter in different stages of degradation are formed
during the decomposition of plant and animal residues in the environment, it is
important to remove them, as they can give undesirable characteristics to the water
distributed. The use of microorganisms such as fungi, for this removal are extremely
important, since their role in sanitation is to act on processing organic waste, where they
function as recyclers of matter in different ecosystems. This work aimed to study the
production of phenol oxidase enzymes, peroxidases white decomposition by fungi
(Trametes villosa and Pycnoporus sanguineus) for the removal of HSs in the water. The
work was divided into parts: extracted, purified and characterized the humic and fulvic
acids, was placed just after the HSs in water and we used the fungal enzymes for their
removal, tests were also performed in the Jar Test. Analysis of the composition of HSs
(characterization) and verification of degradation was performed by spectrophotometry
in the ultraviolet and visible region, and infrared spectroscopy, by determining the
enzyme production. The extraction method used was effective in the separation of
humic and fulvic acids, the spectra of extracted humic acids showed carboxylic groups,
alkyl, aromatic, alcohol, phenol and carbohydrates. The predominant enzyme in all
fungal species used was laccase (Lcc); analyzed samples of Trametes villosa showed the
largest decrease in absorbance at several wavelengths in the ultraviolet / visible (UVVis)
spectra, an indirect measure of degradation. The samples containing the fungus
Trametes villosa were also those that had a higher laccase enzyme production in most
trials, reaching a production of 3.48 mL-1 with humic acid from Sigma-Aldrich® brand
and 2.61 U.mL-1 for humic acid extracted and getting a percentage rate of removal of
56% and 42% respectively of these acids. In tests with fulvic acid and fungi at different
pHs (3.0, 5.0 and 7.0), all has decreased range of UV/Vis with percentage removal rates
of 92%. T villosa showed the higher rates of adsorption evidenced byUV-Vis spectrum,
albeit to a lesser extent than those treated withenzymes, their highest percentage
of adsorption was 86%. Fungi in this study have great potential for degradation and
adsorption of humic substances present in water. / As substâncias húmicas (SHs), matéria orgânica em diferentes estágios de degradação
são formadas, durante o processo de decomposição de resíduos vegetais e animais
presentes no ambiente, sendo importante a sua remoção já que elas podem conferir
características indesejáveis à água distribuída. A utilização de microrganismos como os
fungos, para essa remoção é de extrema importância, pois estes exercem papel
importante dentro do saneamento atuando nos processos de transformação dos resíduos
orgânicos, onde funcionam como recicladores de matéria nos diversos ecossistemas. O
trabalho teve o objetivo de estudar a produção de enzimas fenoloxidases e peroxidases
por fungos de decomposição branca (Trametes villosa e Pycnosporus sanguineus) para
a remoção das SHs na água. O trabalho foi divido em partes: extraiu, purificou e
caracterizou-se os ácidos húmicos e fúlvicos. Em seguida, colocou-se as SHs em água e
utilizou-se as enzimas fúngicas para a sua remoção, também foram realizados ensaios
em reator estático (Jar Test). A análise da composição das SHs (caracterização) e
verificação de degradação foi realizada por espectrofotometria na região do ultravioleta
e visível, e espectroscopia de infravermelho e através da determinação da produção
enzimática. O método de extração utilizado foi eficaz nas separações dos ácidos
húmicos e fúlvicos; os espectros dos ácidos húmicos extraídos apresentaram grupos
carboxílicos, alquílicos, aromáticos, alcoólicos, fenólicos e carboidratos. A enzima
predominante em todas as espécies fúngicas utilizadas foi a lacase (Lcc); as amostras
analisadas de Trametes villosa foram as que apresentaram maior diminuição nas
absorbâncias em vários comprimentos de ondas nos espectros de ultravioleta/visível
(UV-Vis), medida indireta de degradação. As amostras contendo o fungo de Trametes
villosa também foram as que obtiveram uma maior produção enzimática de lacase, na
maioria dos ensaios, chegando a uma produção de 3,48 U.mL-1 com ácido húmico da
marca Sigma-Aldrich® e 2,61 U.mL-1 para o ácido húmico extraído e obtendo um
índice percentual de remoção de 56% e 42% destes ácidos respectivamente. Nos ensaios
com ácido fúlvico e fungos em diferentes pHs (3,0, 5,0 e 7,0), todos apresentaram
diminuição do espectro de UV/Vis com índices percentuais de remoção de 92%. T.
villosa foi o que apresentou índices maiores de adsorção comprovados por espectro no
UV-Vis, ainda que em menor proporção que os tratados com enzimas, seu maior índice
percentual de adsorção foi de 86%. Os fungos do presente estudo apresentam grande
potencial de remoção e de adsorção das substâncias húmicas presentes na água.
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Remoção de hormônios sexuais sintéticos por carbonização hidrotermal e por fungos de decomposição branca / Removal of synthetic sex hormones by hydrothermal carbonization and fungal decomposition whiteMorais, Ruiter Lima 29 August 2012 (has links)
Submitted by Luanna Matias (lua_matias@yahoo.com.br) on 2015-03-09T12:02:45Z
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Previous issue date: 2012-08-29 / Contaminations of water and wastewater with endocrine disrupters from domestic and
industrial discharges have been proven in several regions of the planet. Among the endocrine
disruptors, the synthetic sex hormones cause great concern because the presence of phenolic
rings in their structures makes them stable and recalcitrant in the environment. In Goiás, the
presence of synthetic sex hormone concentrations of ethinylestradiol in mg.L-1 in the Meia
Ponte River, which goes accross the metropolitan area of Goiânia, was recently confirmed.
Studies have shown that concentrations of ng.L-1 can affect sexual differentiation and cause
serious damage to the reproductive system in fish and humans. Further, there are few
techniques that are proven of being effective on removing this type of substance. The aim of
this study was to evaluate the removal of synthetic sex hormones ethinylestradiol, gestodene,
and cyproterone acetate by the hydrothermal carbonization process and biological treatment
with fungi decomposing white Pycnoporus sanguineus and Trametes villosa. For this
purpose, solutions were prepared, individually and in combination with a concentration of 1,0
μg.mL-1 and pH correction into the range of 2-3 with solutions of phosphoric acid or citric
acid for treatment with hydrothermal carbonization. For the treatment with the fungus in
liquid culture medium and under the condition of stirring, a solution was prepared containing
all three hormones (ethinyl estradiol, cyproterone acetate and gestodene) in concentrations of
0,333 μg.mL-1. The carbonization treatments by the process of hydrothermal three hormones
with pH correction made with phosphoric acid and reaction time of 90 minutes showed
satisfactory removal of Ethinylestradiol and Gestodene, above 90%. Already in the individual
treatments, removal achieved was higher than 99% for all three hormones. The biological
treatment with Pycnoporus sanguineus and Trametes villosa show significant removal of
hormones and cyproterone acetate Ethinylestradiol above 99% and 78.9% for Gestodene for
both fungi. It was possible to notice that the presence of hormones increased the enzymatic
production of laccase, with peak production anticipated for the fungus Pycnoporus
sanguineus. The toxicity test with Artemia salina was observed that the solution with the
three hormones after carbonization hydrothermal treatment had fewer dead larvae of Artemia
salina, than the solution with hormones without treatment. In test germination of Allium cepa,
the solution treated with hormones hydrothermal carbonization showed the same germination
rate of the control group, however, less vigor of the shoots. As the control group, the solution
to the three hormones before treatment and after biological treatment, the 9.09%
concentration, showed no mortality of larvae of Artemia salina. These results show that both
the hydrothermal carbonization process as with the fungus Pycnoporus sanguineus and
Trametes villosa, show potential for future applications of synthetic sex hormones removal of
contaminated waters and effluents. / A contaminação de águas e esgotos com interferentes endócrinos proveniente de lançamentos
domésticos e industriais tem sido comprovada em diversas regiões do planeta. Entre os
interferentes endócrinos, os hormônios sexuais sintéticos causam grande preocupação, pois a
presença de anéis fenólicos nas suas estruturas, os tornam estáveis e recalcitrantes no meio
ambiente. Em Goiás, a presença do hormônio sexual sintético Etinilestradiol em
concentrações de μg.L-1 no Rio Meia Ponte, que corta a região metropolitana de Goiânia, foi
confirmada recentemente. Estudos mostraram que concentrações de ng.L-1 podem afetar a
diferenciação sexual e causar sérios danos ao sistema reprodutor em peixes e humanos.
Existem, ainda, poucas técnicas comprovadamente eficazes na remoção desse tipo de
substância. O objetivo desta pesquisa foi avaliar a remoção dos hormônios sexuais sintéticos
Etinilestradiol, Gestodeno e Acetato de Ciproterona através do processo de carbonização
hidrotermal e por enzimas oxidativas produzidas pelos fungos de decomposição branca
Pycnoporus sanguineus e Trametes villosa. Para tanto, foram preparadas soluções, individuais
e em mistura, com concentração de 1,0 μg.mL-1 e correção de pH para a faixa de 2-3, com
soluções de ácido fosfórico ou ácido cítrico, para o tratamento com carbonização hidrotermal.
Para o tratamento com os fungos, em meio de cultura líquido e sob a condição de agitação, foi
preparada uma solução contendo os três hormônios (Etinilestradiol, Acetato de Ciproterona e
Gestodeno) em concentração de 0,333 μg.mL-1. O tratamento pelo processo de carbonização
hidrotermal dos três hormônios com correção de pH feita com ácido fosfórico e tempo de
reação de 90 minutos apresentou resultados satisfatórios de remoção do Etinilestradiol e do
Gestodeno, acima de 90%. Já nos tratamentos individuais, a remoção alcançada foi maior que
99% para os três hormônios. O tratamento biológico com Pycnoporus sanguineus e Trametes
villosa apresentou resultados significativos de remoção dos hormônios Etinilestradiol e
Acetato de Ciproterona, acima de 99% e 78,9% para o Gestodeno, para ambos os fungos. Foi
possível notar ainda que a presença dos hormônios aumentou a produção enzimática de
Lacase, com pico de produção antecipado para o fungo Pycnoporus sanguineus. No teste de
toxicidade com Artemia salina observou-se que a solução com os três hormônios após o
tratamento com carbonização hidrotermal apresentou menor número de larvas mortas de
Artemia salina, do que a solução com os hormônios sem tratamento. No teste de germinação
de sementes de Allium cepa, a solução de hormônios tratada com carbonização hidrotermal
apresentou a mesma taxa de germinação do Grupo Controle, no entanto, menor vigor dos
brotos. Assim como o Grupo Controle, a solução com os três hormônios do antes do
tratamento e que após o tratamento biológico, a 9,09% de concentração, não apresentaram
mortalidade de larvas de Artemia salina. Esses resultados mostram que tanto o processo de
carbonização hidrotermal quanto o fúngico com Pycnoporus sanguineus e Trametes villosa,
apresentam potencial para futuras aplicações de remoção de hormônios sexuais sintéticos de
águas e efluentes contaminados.
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Remoção do corante FD&C azul nº 2 Indigotina em água com uso de fungos de decomposição branca e processo de filtração lenta: avaliação em escala piloto / Remove the dye FD & C Blue No. 2 indigo in water use fungal decay and white slow filtration process: evaluation in pilot scaleLOPES, Maria Margareth Gonçalves 04 August 2008 (has links)
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maria margareth goncalves.pdf: 3073051 bytes, checksum: a405b4aae069912b1212db181d1858f8 (MD5)
Previous issue date: 2008-08-04 / Industrial activities are constantly producing wastes such as dyes which are usually
found in the industrial effluents and constitutes a environmental problem due its toxicity
and inadequate disposal. The use of fungi, in particular the white-rot fungus, have been
found to be efficient for biodegrading these compounds. In addition, slow sand filtration
have been reported to be the most efficient unit filtration processes to improve the
physical, biological and chemical quality of potable water. The objective of this work
was to investigate the removal efficiency of the dye FD&C azul Nº 2 Indigotina, by the
use of the Trametes versicolor fungus combined with slow sand filtration. Two
laboratory-scale filter columns of 0.08 m diameter and 0.90 m sand media depth were
used to investigate the process performance. One slow sand filter, FLA, was applied in
combination with the Trametes versicolor fungus, while the FLB was used as control.
Three methodologies for the fungi growth were used. The results showed that the slow
sand filtration is a prominent process for the removal of the dye FD&C azul nº 2
Indigotina when used in combination with the Trametes versicolor fungus. A maximum
removal of 95% was found when the filter was inoculated with fungi grown on Petri
dish. The average dye removal when the increased fungi biomass was inoculated to the
filter was 70%. This result suggests that the filter performance increased when the
fungus was inoculated with fungi grown on Petri dish. In addition, head loss was found
to be higher in the FLA filter than in the FLA (control), indicating that the fungi
biomass contributes to the head loss development. / Nas atividades industriais geradoras de resíduos os corantes são amplamente
encontrados nos efluentes, quase sempre, constituindo um problema de ordem
ambiental devido à sua toxicidade. O uso de fungos na degradação de corantes vem
sendo estudado em diversos trabalhos científicos enquanto as vantagens econômicas e
ambientais do uso de filtros lentos na produção de água bacteriologicamente segura há
muito tempo já está descrita por diversos autores. Este trabalho teve por objetivo
investigar a eficiência da remoção de corante artificial FD&C azul nº2 Indigotina, com
uso do fungo de degradação branca Trametes versicolor em combinação com a filtração
lenta. Para isso, foram instalados dois protótipos de filtros lentos denominados FL-A e
FL-B em escala laboratorial, sendo que o filtro FL-A, foi inoculado com o fungo e o
filtro FL-B, utilizado como controle, não foi inoculado com fungo. Três procedimentos
foram empregados para o cultivo do fungo. Os resultados mostraram que a filtração
lenta tem grande potencial para remoção eficiente de cor quando empregada em
conjunto com o fungo Trametes versicolor. O melhor percentual de remoção do corante
FD&C azul nº2 indigotina pelo fungo Trametes versicolor em combinação com a
filtração lenta foi de 95% na metodologia com adição da biomassa de cultivo do fungo
correspondente a duas placas de Petri. A média de descoramento da metodologia com
adição de biomassa aumentada do fungo foi de 70%. Em todas as carreiras de filtração
as perdas de cargas no FL-A, inoculado com fungo, foram superiores às do FL-B de
controle. Este resultado indica que a biomassa gerada pelos fungos contribue para o
aumento da perda de carga nos filtros lentos.
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