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Desenvolvimento de antígeno vacinal para Staphylococcus spp na prevenção da piodermite canina / Development of vaccinal antigen to Staphylococcus spp in the canine pyoderma prevention

Matiole, Mary Ellen 28 August 2014 (has links)
A piodermite bacteriana afeta cães de todas as idades, podendo ser recorrente por toda a vida. O principal agente etiológico é o Staphylococcus pseudintermedius, que é um micro-organismo saprófita da pele, agindo como oportunista frente a alguma fragilidade na barreira imunológica. A imunização dos cães através de uma vacina eficaz tem sido um desafio, pois a vacina comercial atualmente utilizada em clínicas veterinárias é de uso terapêutico e não tem caráter preventivo. Um dos problemas da vacina de uso terapêutico para piodermite é a dependência de um bom diagnóstico diferencial em relação a outras doenças de pele ou sistêmicas que tem como sequelas a erupção cutânea. Os animais que recebem a vacina terapêutica e não a preventiva são os que já apresentam problemas de pele reincidentes e são tratados concomitantemente com antibióticos. O objetivo do presente trabalho é desenvolver um antígeno vacinal com possibilidade de aplicação por via intradérmica de modo a tratar preventivamente a piodermite canina causada por Staphylococcus spp:. A via de administração intradérmica tem como finalidade estimular uma resposta imune sistêmica, principalmente por ativação das células dendríticas da derme, de modo a estimular estas células apresentadoras de antígeno no local onde ocorrem as infecções piodérmicas. Os resultados apresentados neste trabalho demonstraram que a inoculação intradérmica foram estatisticamente igual, quando comparada com a inoculação intraperitoneal, no que se refere à inibição por anticorpos: da atividade hemolítica, da atividade da catalase, da atividade da coagulase e da atividade citotóxica, bem como na reação antígeno-anticorpo determinado por ensaio imunoenzimático. Este trabalho também demonstra que a melhor formulação do antígeno estafilocóccico foi preparado a partir de sobrenadante de cultura diafiltrado por filtração tangencial com \"cut off\" de 5.000 Da. Outras preparações utilizando somente células bacterianas ou associação de sobrenadante com células bacterianas, apesar de produzirem antigenicidade, apresentaram títulos inferiores do que quando empregado somente sobrenadante de cultura diafiltrado. / The bacterial pyoderma affects dogs of all ages and can be recurrent for a lifetime. The main etiologic agent is Staphylococcus pseudintermedius, which is a saprophytic organism of the skin, acting as an opportunistic opposite to some weakness in the immune barrier. The immunization of dogs through an effective vaccine has been a challenge, since currently it has been used commercially in veterinary clinics is therapeutic and has a preventive character. One of the problems of the therapeutic use of the vaccine for pyoderma is dependent on a good differential diagnosis in relation to other skin diseases or systemic consequences which is the rash, so treatment often does not reach its goal. Animals receiving this vaccine are those who already have skin problems again and are receiving concomitant antibiotics. The objective of this study is to develop a vaccine antigen with the possibility of implementing a preventive treatment for canine pyoderma caused by Staphylococcus spp: through pre-clinical studies, for use in young and adults, preferably before they develop any type of skin disorder primary or secondary. The administration route is intradermal, stimulating an immune response primarily by dendritic cells to become a barrier to microorganisms, as well as systemic, by the production of antibodies, to last for at least one year until needed in the body booster vaccination. The results presented here demonstrated that the intradermal inoculation was statistically equivalent when compared to intraperitoneal inoculation with regard to inhibition by antibody: of the hemolytic activity, catalase activity, the coagulase activity and cytotoxic activity, as well as antigen-antibody reaction determined by enzyme immunoassay. This work also demonstrates that the best estafilococcico antigen formulation was prepared from the culture supernatant diafiltered by tangential filtration with \"cut off\" of 5,000 Da. Other preparations using only the bacterial cells or the association of supernatant with bacterial cells, although producing antigenicity, showed lower titles than when used dialyzed culture supernatant alone.
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Desenvolvimento de antígeno vacinal para Staphylococcus spp na prevenção da piodermite canina / Development of vaccinal antigen to Staphylococcus spp in the canine pyoderma prevention

Mary Ellen Matiole 28 August 2014 (has links)
A piodermite bacteriana afeta cães de todas as idades, podendo ser recorrente por toda a vida. O principal agente etiológico é o Staphylococcus pseudintermedius, que é um micro-organismo saprófita da pele, agindo como oportunista frente a alguma fragilidade na barreira imunológica. A imunização dos cães através de uma vacina eficaz tem sido um desafio, pois a vacina comercial atualmente utilizada em clínicas veterinárias é de uso terapêutico e não tem caráter preventivo. Um dos problemas da vacina de uso terapêutico para piodermite é a dependência de um bom diagnóstico diferencial em relação a outras doenças de pele ou sistêmicas que tem como sequelas a erupção cutânea. Os animais que recebem a vacina terapêutica e não a preventiva são os que já apresentam problemas de pele reincidentes e são tratados concomitantemente com antibióticos. O objetivo do presente trabalho é desenvolver um antígeno vacinal com possibilidade de aplicação por via intradérmica de modo a tratar preventivamente a piodermite canina causada por Staphylococcus spp:. A via de administração intradérmica tem como finalidade estimular uma resposta imune sistêmica, principalmente por ativação das células dendríticas da derme, de modo a estimular estas células apresentadoras de antígeno no local onde ocorrem as infecções piodérmicas. Os resultados apresentados neste trabalho demonstraram que a inoculação intradérmica foram estatisticamente igual, quando comparada com a inoculação intraperitoneal, no que se refere à inibição por anticorpos: da atividade hemolítica, da atividade da catalase, da atividade da coagulase e da atividade citotóxica, bem como na reação antígeno-anticorpo determinado por ensaio imunoenzimático. Este trabalho também demonstra que a melhor formulação do antígeno estafilocóccico foi preparado a partir de sobrenadante de cultura diafiltrado por filtração tangencial com \"cut off\" de 5.000 Da. Outras preparações utilizando somente células bacterianas ou associação de sobrenadante com células bacterianas, apesar de produzirem antigenicidade, apresentaram títulos inferiores do que quando empregado somente sobrenadante de cultura diafiltrado. / The bacterial pyoderma affects dogs of all ages and can be recurrent for a lifetime. The main etiologic agent is Staphylococcus pseudintermedius, which is a saprophytic organism of the skin, acting as an opportunistic opposite to some weakness in the immune barrier. The immunization of dogs through an effective vaccine has been a challenge, since currently it has been used commercially in veterinary clinics is therapeutic and has a preventive character. One of the problems of the therapeutic use of the vaccine for pyoderma is dependent on a good differential diagnosis in relation to other skin diseases or systemic consequences which is the rash, so treatment often does not reach its goal. Animals receiving this vaccine are those who already have skin problems again and are receiving concomitant antibiotics. The objective of this study is to develop a vaccine antigen with the possibility of implementing a preventive treatment for canine pyoderma caused by Staphylococcus spp: through pre-clinical studies, for use in young and adults, preferably before they develop any type of skin disorder primary or secondary. The administration route is intradermal, stimulating an immune response primarily by dendritic cells to become a barrier to microorganisms, as well as systemic, by the production of antibodies, to last for at least one year until needed in the body booster vaccination. The results presented here demonstrated that the intradermal inoculation was statistically equivalent when compared to intraperitoneal inoculation with regard to inhibition by antibody: of the hemolytic activity, catalase activity, the coagulase activity and cytotoxic activity, as well as antigen-antibody reaction determined by enzyme immunoassay. This work also demonstrates that the best estafilococcico antigen formulation was prepared from the culture supernatant diafiltered by tangential filtration with \"cut off\" of 5,000 Da. Other preparations using only the bacterial cells or the association of supernatant with bacterial cells, although producing antigenicity, showed lower titles than when used dialyzed culture supernatant alone.

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