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Estimativa da efetividade da vacina contra coqueluche em domicílios localizados em áreas assistidas pelo Programa Nacional de Imunizações em Pernambuco, Brasil

BAPTISTA FILHO, Paulo Neves January 2005 (has links)
Made available in DSpace on 2014-06-12T18:30:40Z (GMT). No. of bitstreams: 2 arquivo8084_1.pdf: 856755 bytes, checksum: 0e7a9797a8268d91d40a99ac40d4a7b1 (MD5) license.txt: 1748 bytes, checksum: 8a4605be74aa9ea9d79846c1fba20a33 (MD5) Previous issue date: 2005 / A coqueluche é uma das principais causas de morte entre as doenças preveníveis por vacina. O objetivo dessa pesquisa foi estimar a efetividade da vacina celular contra coqueluche em domicílios localizados em área assistida pelo Programa Nacional de Imunizações, em Pernambuco, Brasil. Os 57 domicílios foram identificados através de um caso índice de coqueluche atendido no Serviço de Infectologia Pediátrica do Hospital Universitário Oswaldo Cruz em Recife. A Coqueluche como definida pelo Centro para Controle e Prevenção das Doenças - E.U.A. foi diagnosticada em 158 indivíduos. Foi observada uma tendência linear decrescente da taxa de ataque secundário (TAS) com o aumento da idade do individuo. A TAS foi de 100% das 28 crianças de até seis meses de idade, 80.85% das 21 crianças de seis meses a cinco anos, 39,74% das 78 crianças e adolescentes de cinco a 19 anos e 12,78% entre 133 adultos maiores de 19 anos de idade. A TAS diminuiu independente da situação vacinal, sugerindo uma imunidade adquirida naturalmente. A estimativa da efetividade da vacina de coqueluche em proteger crianças de seis meses a cinco anos de idade com esquema vacinal completo foi de 12,5% I.C 95% (- 5,3 - 27,3). A efetividade da vacina em reduzir a ocorrência de doença com bacteriologia positiva foi de 63.1% I.C 95% (40,7 - 77,0) e em reduzir a transmissibilidade foi de 61.6% I.C. 95% (12,8 - 83,1). Os indivíduos maiores de 11 anos e 6 meses foram a fonte de transmissão de coqueluche para 78,6% de todos os casos secundários e de 76% das 25 crianças de até seis meses de idade. Os lactentes menores de seis meses de idade podem apresentar um quadro clínico grave e necessitar hospitalização. A efetividade de vacina de coqueluche em reduzir a transmissibilidade e a ocorrência de doença com bacteriologia positiva são efeitos protetores indiretos na população. Uma baixa efetividade da vacina de coqueluche obtida neste estudo sugere que a vacina pode estar oferecendo pouca proteção e recomenda uma avaliação mais ampla e com uma metodologia mais rigorosa
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Efetividade do BCG-ID em comunicantes de pacientes com as formas multibacilares da hanseniase

Duppre, Nadia Cristina. January 1998 (has links) (PDF)
Mestre -- Escola Nacional de Saude Publica, Rio de Janeiro, 1998.
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Risco de desenvolver hanseníase em contatos de pacientes, segundo positividade ao teste anti PGL-I e situação vacinal (BCG) / Risk of contacts developing the disease on the basis of seropositivity of patients, second test for anti-PGL I and state immunization (BCG)

Düppre, Nádia Cristina January 2008 (has links)
Made available in DSpace on 2012-09-05T18:24:15Z (GMT). No. of bitstreams: 2 license.txt: 1748 bytes, checksum: 8a4605be74aa9ea9d79846c1fba20a33 (MD5) 317.pdf: 998814 bytes, checksum: 154a65291ffd6ad10b7949eb7e69d73f (MD5) Previous issue date: 2008 / Os contatos domiciliares dos pacientes de hanseníase apresentam um maior risco de adoecer, e o exame deste grupo é uma das atividades fundamentais para controle da doença. O Ministério da Saúde recomenda o exame dos contatos dos pacientes e a aplicação da vacina BCG como medidas preventivas. Este estudo objetivou avaliar o risco dedesenvolver hanseníase em contatos, segundo a positividade ao teste para anticorpos contra o glicolipidio fenólico I (PGL-I) do M. leprae e status vacinal (BCG). Os dados obtidos foram apresentados em três artigos. No primeiro foi avaliado o efeito protetor da vacina BCG em contatos, administrada após o diagnóstico do caso índice. Foram incluídos 5.346 contatos (3.536 vacinados e 1.810 não), durante o seguimento 122 (2,2 por cento) casos incidentes foram detectados. Desses, 28 adoeceram nos primeiros meses após o exame inicial (21 vacinados e 16 sem cicatriz de BCG). Embora o risco de desenvolver as formas tuberculóides tenha sido maior nos primeiros meses de seguimento em vacinados e semcicatriz, o mesmo diminuiu substancialmente após o primeiro ano da vacinação. A proteção global pelo BCG foi de 56 por cento. O segundo artigo avaliou risco de adoecer entre oscontatos segundo a soropositividade ao teste anti PGL-I. Entre 2.127 testados, 341 (16 por cento) foram soropositivos. Neste grupo, o risco de adoecer foi 3,5 maior do que nos soronegativos. No subgrupo de menores de 10 anos, este risco foi de 9,8. Entre os soropositivos vacinados houve predominância das formas paucibacilares (PB) e entre osnão vacinados, das formas multibacilares (MB). No terceiro artigo foram analisadas as características dos casos de hanseníase detectados na vigilância de contatos, relacionandooscom a exposição à infecção e o intervalo de tempo entre o diagnóstico do caso índice e o exame. Entre 6.158 examinados, 319 casos foram detectados no primeiro exame. / Desses, 113 (35 por cento) compareceram 12 meses após diagnóstico do caso índice. Neste subgrupo houve predominância das formas MB e grau de incapacidade igual a 2. No seguimento, 129 novoscasos foram detectados e crianças de famílias que tinham casos co-prevalentes, apresentaramum risco maior de adoecer (OR = 2,1) do que os adultos. Nossos resultados indicam que: a vacina BCG administrada após o diagnóstico do caso índice protegeu contra hanseníase. Asorologia mostrou ser um bom instrumento para detectar contatos com maior risco de adoecer. Ações de educação em saúde junto aos pacientes e as famílias, somados aocomprometimento dos profissionais com o exame de contato, foram a base para o exame de um número significativo deles, mesmo que tardiamente, em muitos casos.
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Desenvolvimento de duas plataformas biotecnológicas baseadas em Pichia pastoris e Leishmania tarentolae para produção de candidatos vacinais contra os Papilomavírus humano (HPV) e bovino (BPV)

MARIZ, Filipe Colaço 29 July 2016 (has links)
Submitted by Alice Araujo (alice.caraujo@ufpe.br) on 2018-04-26T18:48:58Z No. of bitstreams: 1 TESE Filipe Colaço Mariz.pdf: 10437063 bytes, checksum: 39022646be419996ba34ec6bd45492a1 (MD5) / Made available in DSpace on 2018-04-26T18:48:58Z (GMT). No. of bitstreams: 1 TESE Filipe Colaço Mariz.pdf: 10437063 bytes, checksum: 39022646be419996ba34ec6bd45492a1 (MD5) Previous issue date: 2016-07-29 / CAPES / O Papilomavírus (PV) é um reconhecido agente de lesões hiperproliferativas benignas que, sob determinadas circunstâncias, podem evoluir para lesões cancerosas. Em humanos, o HPV está relacionado ao desenvolvimento do câncer cervical e anogenital, enquanto o BPV é o agente de cânceres em bovinos e equinos. Atualmente, duas vacinas estão licenciadas para profilaxia contra o HPV, as quais se baseiam em partículas semelhantes ao vírus (VLPs, virus-like particles) obtidas a partir da produção da proteína L1 em sistemas de expressão heteróloga. Apesar de comprovadamente eficazes, ambas as vacinas apresentam importantes limitações relacionadas ao baixo espectro de proteção e elevado custo, o que impede sua implementação sobretudo nos países em desenvolvimento. Neste trabalho, apresentamos o desenvolvimento de duas plataformas biotecnológicas para produção de candidatos vacinais contra o HPV e BPV. Uma das plataformas emprega um sistema genético baseado no promotor constitutivo do gene PGK1 da levedura Pichia pastoris para expressão intracelular da proteína L1 de HPV16. Em paralelo, diferentes candidatos vacinais do HPV e BPV foram desenvolvidos para expressão em Leishmania tarentolae através do emprego de distintos sistemas genéticos. As análises de expressão por dot blotting e western blotting com anticorpos monoclonais demonstram a presença dos candidatos vacinais no lisado das leveduras recombinantes, enquanto evidências obtidas por microscopia eletrônica de transmissão sugerem a formação de VLPs no citoplasma dos clones cultivados. Em contrapartida, as análises por ultracentrifugação e purificação com resina de heparina-sepharose evidenciaram a formação de capsômeros e VLPs quiméricas a partir dos candidatos vacinais produzidos em L. tarentolae. Interessantemente, nossos ensaios apresentam evidências de uma modificação pós-traducional ainda não revelada em espécies de Leishmania, denominada SUMOilação. Demonstramos por diferentes abordagens que tal modificação, ao ser realizada na proteína L2, ocorre através de um padrão semelhante ao descrito em células de mamíferos. Futuros ensaios focarão na determinação dos níveis de produção a partir de cultivos em biorreator e na imunogenicidade de candidatos vacinais desenvolvidos. Esses resultados demonstram a viabilidade do emprego de P. pastoris e L. tarentolae como plataforma vacinal para o desenvolvimento de abordagens potencialmente mais econômicas e de largo espectro contra a papilomatose humana e animal. / Infection by Papillomavirus (PV) is a well-known cause for the establishment of hyperproliferative and benign lesions (warts) that can evolve to carcinoma under specific circumstances. In human, HPV is related to cervical and other anogenital cancer, while BPV is the causal agent of different types of cancer in cattle. The current HPV vaccines licensed for prophylaxis against cervical cancer are based on virus-like particles (VLPs) obtained through the expression of major capsid L1 protein in heterologous expression systems. Although highly effective, both vaccines present important limitations related to their low spectrum of protection and high cost, which compromises their implementation worldwide, mainly in developing countries. Herein, we present the development of two biotechnologic platforms for production of vaccine candidates against HPV and BPV. The first one employs a genetic system based on the Pichia pastoris PGK1 constitutive promoter for intracellular expression of HPV16 L1 protein. In parallel, we designed different HPV16 and BPV1 vaccine candidates for expression in the protozoan Leishmania tarentolae through distinct genetic systems. Expression analysis by dot blotting and western blotting using monoclonal antibodies demonstrated the detection of L1 protein in the total protein lysate of recombinant yeasts, in addition to the electron microscopy evidences suggesting VLP assembling within the cytosol of the clones. In the other hand, ultracentrifugation and purification on heparin-sepharose resin evidenced the assembling of capsomeres and VLP by expressing of L1-based candidates in L. tarentolae. Interestingly, our set of data indicates the occurrence of a post-translational modification by small ubiquitine-like modifier (SUMO) still not revealed in Leishmania species. For the first time, we demonstrate that such modification (SUMOylation), when presented in the L. tarentolae-expressed HPV16 L2 protein, takes place in a mammalian-like pattern. Future studies will focus on immunogenicity assays with the vaccine candidates developed here. The data presented here demonstrated the feasibility of P. pastoris PGK1-based system and L. tarentolae as platforms for the developing of low cost and large spectrum vaccine strategies against human and animal papillomatosis.
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Expressão de proteínas quiméricas contendo epítopos NS1 do vírus da dengue para fins diagnósticos e vacinais

PURIFICAÇÃO JUNIOR, Antonio Fernando da 24 February 2017 (has links)
Submitted by Fernanda Rodrigues de Lima (fernanda.rlima@ufpe.br) on 2018-07-11T22:42:19Z No. of bitstreams: 2 license_rdf: 811 bytes, checksum: e39d27027a6cc9cb039ad269a5db8e34 (MD5) DISSERTAÇÃO Antonio Fernando da Purificação Júnior.pdf: 2087937 bytes, checksum: e1ada69a4a283be1ebcf72e615345586 (MD5) / Approved for entry into archive by Alice Araujo (alice.caraujo@ufpe.br) on 2018-07-18T17:51:01Z (GMT) No. of bitstreams: 2 license_rdf: 811 bytes, checksum: e39d27027a6cc9cb039ad269a5db8e34 (MD5) DISSERTAÇÃO Antonio Fernando da Purificação Júnior.pdf: 2087937 bytes, checksum: e1ada69a4a283be1ebcf72e615345586 (MD5) / Made available in DSpace on 2018-07-18T17:51:01Z (GMT). No. of bitstreams: 2 license_rdf: 811 bytes, checksum: e39d27027a6cc9cb039ad269a5db8e34 (MD5) DISSERTAÇÃO Antonio Fernando da Purificação Júnior.pdf: 2087937 bytes, checksum: e1ada69a4a283be1ebcf72e615345586 (MD5) Previous issue date: 2017-02-24 / CNPQ / A dengue é uma importante doença de aspecto emergente e um grande desafio para a saúde pública mundial. No mercado, existe apenas uma vacina licenciada que não é totalmente eficaz na prevenção da doença. Também existem dificuldades para se expressar antígenos virais em sistemas procarióticos para uso no diagnóstico sorológico. O presente estudo, por meio da engenharia de proteínas, propõe moléculas alternativas de interesse diagnóstico e/ou vacinal para a dengue. Com o uso de ferramentas computacionais seguindo a estratégia “epitope-scaffolding”, elementos estruturais da NS1 de dengue (epitope) foram transplantados para a TOP7 (scaffold). Os genes sintéticos para as variantes dessa proteína, levando em consideração os 4 sorotipos de dengue, totalizando 4 proteínas recombinantes, foram otimizados, sintetizados comercialmente e clonados em vetor de expressão. As proteínas recombinantes tiveram sua expressão confirmada por ensaios de imunoblot e purificadas por cromatografia de afinidade, apresentando alto rendimento e solubilidade. Foram realizados ELISAs, com soros de pacientes infectados com DENV-3, para avaliação imunológica das proteínas quiméricas expressas. Os sinais detectados para as quimeras sugerem que elas são potencialmente imunogênicas. / Dengue is an important emerging disease and a major public health challenge worldwide. Currently, there is only one licensed vaccine that is not fully effective in preventing the disease. There are also difficulties in expressing viral antigens in prokaryotic systems for use in serological diagnosis. The present study, through the engineering of proteins, proposes alternative molecules to be employed in strategies for diagnostics and/or vaccines for dengue. With the use of computational tools following the epitope-scaffolding approach, structural elements of dengue NS1 (epitopes) were transplanted to the TOP7 protein (scaffold). Synthetic genes for 4 recombinant proteins, taking into account the 4 serotypes of dengue, were optimized, commercially synthesized and cloned into expression vector. The cells of Escherichia coli BL21 were transformed with the respective plasmid constructs. Proteins were confirmed by immunoblot assays and purified by affinity chromatography, exhibiting high yield and solubility. ELISAs, with sera from patients infected by DENV-3, were performed for the immunological evaluation of expressed chimeric proteins. Signals detected for the chimeras suggest that they are potentially immunogenic.
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AVALIAÇÃO do Papel do Agonista de Tlr1/2 (pam3csk4) na Potencialização do Efeito Protetor da Vacina Laag Administrada Por Via Intranasal Contra a Leishmaniose Visceral Murina.

DIAS, E. L. 05 September 2016 (has links)
Made available in DSpace on 2018-08-01T21:34:59Z (GMT). No. of bitstreams: 1 tese_10421_Dissertação_Emmanoel Loss Dias.pdf: 1989385 bytes, checksum: 17589b2593a44ffae93864b2f8f67fe7 (MD5) Previous issue date: 2016-09-05 / PAM3CSK4 (PAM) é um agonista sintético de TLR1/2 composto por um lipopeptídeo triaciletado que imita a lipoproteína de bactérias e que apresenta uma potente capacidade em induzir atividade pró-inflamatória mediada por ativação de NF-kB. No presente estudo, foi investigada a capacidade da imunização intranasal com antígenos totais de promastigotas de L. amazonensis (LaAg) associados ao adjuvante PAM em potencializar a resposta imune imunogênica antígeno em camundongos. Assim, camundongos BALB/c foram imunizados por via intranasal (instilação nasal) com 20 μg de LaAg associados com 20 μg do adjuvante PAM em doses intervaladas por 7 dias. PBS, LaAg ou PAM sozinhos foram utilizados como controle. A dosagem das transaminases e da creatinina no soro animais demonstraram a biocompatibilidade e segurança da combinação LaAg/PAM. Os camundongos vacinados com LaAg/PAM demostraram maior reação de hipersensibilidade cutânea tardia (DTH) 24 e 48 horas, respectivamente, após a injeção de 20 μg de LaAg na pata traseira, quando comparado ao grupo controle. Além disso, em comparação aos outros grupos, os esplenócitos de animais vacinados com LaAg/PAM produziram mais IFN-γ, TNF-α e IL-4 depois do reestimulo in vitro com o antígeno LaAg (50 μg/mL). Células analisadas ex vivo, demonstraram que a combinação LaAg/PAM não alterou a frequência das populações de células CD4+ e CD8+ de memória e totais no baço. A vacinação com LaAg/PAM foi capaz de induzir a redução no parasitismo do fígado, em comparação com o grupo não tratado. Os animais vacinados com LaAg/PAM demostraram um aumento significativo na produção de IFN-γ e a diminuição na produção de IL-4 nos sobrenadantes do baço. Além disso, observou-se um aumento significativo na produção de NO nos sobrenadantes do fígados dos animais vacinados com LaAg/PAM. Em conjunto, nossos dados demonstram, pela primeira vez a possibilidade de imunização intranasal com os antígenos totais de L. amazonensis (LaAg) associados com PAM como um mecanismo eficaz de indução de imunogenicidade.
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Estudo da imogenicidade de uma vacina contra carcinoma renal humano

Verinaud, Liana Maria Cardoso, 1959- 11 April 1991 (has links)
Orientador: Fanzi Ahmed Monstafa Dawood / Dissertação (mestrado) - Universidade Estadual de Campinas, Instituto de Biologia / Made available in DSpace on 2018-07-13T22:33:18Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Verinaud_LianaMariaCardoso_M.pdf: 4405746 bytes, checksum: 4066d7fdd6cc967a560566e9249c3747 (MD5) Previous issue date: 1991 / Resumo: A partir de massa tumoral, obtida através de remoção cirúrgica, de um Adenocarcinoma Renal estágio IV obeteve-se vários fragmentos que foram submetidos a um processo de extração e polimerização de proteínas associada à membrana. Esse extrato foi denominado de PATT. Uma amostra de tecido renal normal também foi submetida a este processo, recebendo a denominação de PATN. Para efeito de analise comparativa as duas frações, PATT e PATN, foram submetidas: 1 Análise imunoquímica, através de imunodifusão dupla e imunoeletroforese. 2 À análise eletroforética em gel de policacrilamida, na presença de SDS. 3 A uma gel filtração em Sephadex G-100. Através da análise por imunodifusão e imunoeletroforese não foi possível detectar diferenças entre as frações PATT e PATN. Entretanto, análise eletroforética em gel de poliacrilamida na presença de SDS demonstrou a existência de um componente na fração PATT praticamente ausente na fração PATN. ... Observação: O resumo, na íntegra, poderá ser visualizado no texto completo da tese digital / Abstract: Not informed. / Mestrado / Imunologia / Mestre em Ciências Biológicas
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Avaliação do potencial vacinal de três peptídeos sintéticos, conservados e tetravalentes derivados dos domínios I e II da proteína do envelope do dengue virus.

ROCHA, Raissa Prado 03 August 2015 (has links)
A dengue é uma arbovirose que tem se destacado nos últimos anos como um grave problema de saúde pública no Brasil. O Dengue virus (DENV) pertence à família Flaviviridae, gênero Flavivirus e seu genoma é composto de uma fita RNA, com polaridade positiva. Atualmente são conhecidos cinco sorotipos de DENV, os quais são geneticamente e antigenicamente distintos. O desenvolvimento de uma vacina que confira imunidade simultânea, eficiente e duradoura, contra os cinco sorotipos do DENV é considerado prioritário diante a magnitude do problema. Desta forma, neste estudo foi avaliado o potencial vacinal de três peptídeos (PEP01, PEP02 e PEP03) tetravalentes, sintéticos e conservados derivados da proteína do envelope do DENV. Um ensaio de ELISA indireto revelou a reatividade de amostras de soros humanos IgM/IgG positivos para dengue contra os peptídeos sintéticos. Ensaios de imunização em modelo murino mostraram que estes peptídeos foram capazes de induzir a produção de anticorpos específicos. Entretanto, os ensaios de neutralização mostraram ausência ou um baixo título de anticorpos neutralizantes. As células do baço derivadas de camundongos imunizados com os peptídeos mostraram uma alta produção de IL-10 e uma redução da produção do TNF-α e IFN-γ após a infecção com todos os sorotipos DENV quando comparado ao controle positivo. Em adição, células provenientes de camundongos imunizados com os peptídeos PEP02 e PEP03 apresentaram in vitro uma redução significativa da viabilidade celular após a infecção com os quatro sorotipos de DENV. A fim de se buscar um candidato vacinal para a dengue, foi expressa em sistema procarioto uma proteína recombinante (PEPDENV) que contém as sequências de PEP01, PEP02 e PEP03 fusionadas a uma sequência específica capaz de induzir de anticorpos neutralizantes. A imunização com a proteína PEPDENV revelou a imunogenicidade desta proteína ao induzir alta produção de anticorpos IgG1 em modelo murino, porém os soros não apresentaram atividade de neutralização da partícula viral. Ensaios imunoenzimáticos utilizando os peptídeos como substratos mostraram que os soros dos animais imunizados com PEPDENV tem capacidade de reconhecer os peptídeos, apresentando especialmente uma alta reatividade com o PEP03. Esses resultados sugerem que a ausência de atividade neutralizante dos anticorpos ocorreu pelo fato de que a resposta imune à proteína PEPDENV está mais direcionada para PEP03 do que para outras regiões da molécula, confirmando a imunogenicidade deste peptídeo. No entanto, mais estudos que visam modificar a sequência peptídica serão necessários para induzirem a produção de uma resposta imune eficaz contra todos os quatro sorotipos de DENV e também para melhorar a imunogenicidade deste canditatos vacinais. / Dengue is an arbovirus that has distinguished itself in recent years as a serious public health problem in Brazil. The Dengue virus (DENV) belongs to the family Flaviviridae, genus Flavivirus and its genome is composed of a single stranded RNA with positive polarity. Currently, there are five serotypes of DENV, which are genetically and antigenically distinct. The development of a vaccine that confers simultaneous, efficient and lasting immunity against the five serotypes of DENV is a priority given the magnitude of the problem. In this study, we evaluated the vaccine potential of three synthetic, conserved and tetravalent peptides (PEP01, PEP02 and PEP03) derived from the envelope protein. An indirect ELISA assay showed the reactivity of Dengue IgM/IgG human positive serum samples against the synthetic peptides. Immunization assays in mice have shown that these peptides were able to induce the production of specific antibodies. However, the neutralization assays showed absence or lower titers of neutralizing antibodies. The spleen cells derived from mice immunized with the peptides showed a high IL-10 expression and reduced expression of TNF-α and IFN-γ after infection for all DENV serotypes when compared with the positive control. In addition, cells from mice immunized with the PEP02 and PEP03 peptides present, in vitro, a significant reduction of cell viability after infection with the four DENV serotypes. To continue the evaluation of this vaccine candidate for dengue, it was expressed in prokaryote system a recombinant protein (PEPDENV) containing sequences of the PEP01, PEP02 and PEP03 fused to a specific sequence able to induce neutralizing antibodies. Immunization with PEPDENV protein showed the immunogenicity of this protein in inducing high production of IgG1 antibodies in mice, however the sera of immunized animals showed no neutralizing activity of the viral particle. Immunoenzymatics assay using the peptides as the substrates showed that the sera of immunized animals with PEPDENV were able to recognize the peptides, with a high reactivity to PEP03. These results suggest that the lack of neutralizing activity of the antibodies may be due to an immune response more directed to the PEP03 than to the other regions of the molecule, confirming the immunogenicity of this peptide. However, further studies aimed at modifying the peptide sequence will be required to induce the production of an effective immune response against all four serotypes of DENV and also to enhance the immunogenicity of these vaccine candidates. / Fundação de Amparo à Pesquisa do Estado de Minas Gerais - FAPEMIG
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Interaction of the immune response to BCG and to environmental Mycobacteria infection

Cunha, Joana Castro Feijó Barbosa da January 2005 (has links)
No description available.
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Obtenção e avaliação da proteína BYC (Boophilus Yolk pro-Cathepsin) recombinante em uma vacina contra o carrapato Boophilus microplus

Leal, Alexandre Trindade January 2006 (has links)
O carrapato Boophilus microplus é um ectoparasita hematófago que infesta os rebanhos bovinos de regiões tropicais e subtropicais, causando grande prejuízo à pecuária. O principal método de controle deste parasita baseia-se no uso de acaricidas, entretanto, o uso de vacinas tem sido estudado como um método de controle promissor. A Boophilus Yolk pro-Cathepsin (BYC) é uma aspártico proteinase presente no ovo do carrapato e envolvida na embriogênese que foi anteriormente testada como imunógeno vacinal. Neste estudo, o cDNA da BYC foi amplificado por PCR e clonado em dois vetores de expressão para produção de duas formas da proteína recombinante com cauda de histidina, rBYC e rBYC-Trx (fusionada com tioredoxina). As duas formas foram expressas em Escherichia coli na forma de corpúsculos de inclusão (CI) e comparadas quanto ao nível de expressão, solubilidade e rendimento na purificacão. Três agentes desnaturantes (N-lauroil sarcosina, hidrocloreto de guanidina e uréia) foram testados para solubilização dos CIs. Sarcosina foi o agente mais eficiente, solubilizando mais de 90 % de rBYC-Trx e rBYC. As duas proteínas recombinantes foram purificadas em cromatografia de afinidade por metal (Ni2+), sob condições desnaturantes. O rendimento na purificação da proteína solúvel foi de 84 % para r-BYC-Trx e 6 % para rBYC. As duas formas foram reconhecidas por soro de coelhos, camundongos e bovinos previamente imunizados com BYC nativa, demonstrando a existência de epítopos comuns entre a BYC nativa e as formas recombinantes expressas em E. coli. Para verificar o potencial vacinal da proteína recombinante, um grupo de bovinos Hereford foi imunizado com rBYC e desafiado com 20.000 larvas de B. microplus por animal. Os soros dos bovinos imunizados reconheceram a BYC nativa em ELISA e “Western blot”, com títulos entre 500 e 4.000. Os resultados do desafio mostraram uma proteção parcial contra a infestação, com 25 % de proteção global. O perfil de expressão de citocinas (IL-2, IL-4, IL-10, IFN-γ) foi verificado por RT-PCR, porém os resultados não permitiram identificar a polarização da resposta imune em Th1 ou Th2. Os resultados de imunoproteção obtidos com a BYC recombinante foram similares aos obtidos na imunização de bovinos com BYC nativa, indicando a possibilidade de uso da forma recombinante como imunógeno vacinal.

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