Leishmania braziliensis is the main causative agent of cutaneous leishmaniasis in Brazil and despite its importance for public health, there is a lack of an experimental model that can be used for testing new therapies and vaccines. The aim of this study was to investigate the influence of parasite burden and the inoculation site in the immunopathogenesis of cutaneous leishmaniasis caused by Leishmania braziliensis in hamsters using ear dermis infection model. Groups of animals (n = 48) were infected intradermally in the ear (n = 24) or paw (n = 24) with 105 promastigotes of L. braziliensis. Afterwards, other groups of animals (n=32) were infected intradermally in the ear with 105 (n=16) or 106 (n=16) promastigotes. The lesions were measured every 5 days for 60 days. The animals were euthanized at 30, 45 and 60 d.p.i., and had their infected ears and paws, as well as lymph nodes (retromaxilar or popliteal), livers and spleens collected for evaluation of parasite burden and expression of inflammatory mediators, and analysis of histopathological changes. The lesions arose at 20 d.p.i. both paw and ear. The ear lesions ulcerated and were bigger (p< 0.0001) in contrast to paw lesions that presented themselves as small nodules without ulcers. It was observed significant parasitic burden in the ear after 30, 40 and 60 d.p.i. at the lesion and in the lymph node, with parasite burden being always bigger at the lesion. Regardless of the route of inoculation, neither liver and spleen were enlarged nor had lumps or parasites. In the retromaxillary lymph node, it was observed a greater expression of inflammatory cytokines IFN- &#611;, TNF- &#945; and IL -6 and the enzyme arginase, 30 and 60 d.p.i., and it was corroborated by histological changes observed in the ear, intenser inflammatory process and chronicity of the disease. On the contrary, the popliteal lymph node (paw) presented a combination of pro and anti-inflammatory cytokines indicating a precocious regulation of immune and inflammatory response. It was also observed that the bigger the inoculum, the more intense the inflammatory response and bigger the lesions, however, without parasite dissemination to the liver and spleen, indicating lesser systemic commitment and increased survival time of the animal. In short, the data indicates that the inoculum of 105 parasites through the ear dermis infection model could make easier the visualization of a possible protective effect of new drugs or vaccine candidates. / Leishmania braziliensis à o principal agente causador de leishmaniose cutÃnea no Brasil, e apesar de sua importÃncia para a SaÃde PÃblica, hà carÃncia de um modelo experimental que possa ser usado para testar novas terapias e vacinas. O objetivo deste estudo foi investigar a influÃncia da carga parasitÃria e do sÃtio de inoculaÃÃo na imunopatogÃnese da leishmaniose cutÃnea causada por Leishmania braziliensis em hamster no modelo de infecÃÃo na derme da orelha. Grupos de animais (n=48) foram infectados por via intradÃrmica, na orelha (n=24) ou na pata (n=24), com 105 promastigotas de L. braziliensis. Em seguida, outros grupos de animais (n=32) foram infectados por via intradÃrmica na orelha, com 105 (n=16) ou 106 (n=16) promastigotas. As lesÃes foram medidas a cada 5 dias por 60 dias. Os animais foram eutanasiados com 30, 45 e 60d.p.i, e coletados a orelha e pata infectada, linfonodos (retromaxilar ou poplÃteo), fÃgado e baÃo, para a avaliaÃÃo da carga parasitÃria, expressÃo de mediadores inflamatÃrios e anÃlise das alteraÃÃes histopatolÃgicas. As lesÃes surgiram com 20d.p.i., tanto na pata como na orelha. As lesÃes na orelha ulceraram e foram maiores (p<0,0001) ao contrÃrio das lesÃes da pata, que se apresentaram como pequenos nÃdulos, sem Ãlceras. Na orelha foi observada significante carga parasitÃria apÃs 30, 40 e 60d.p.i., tanto na lesÃo como no linfonodo, sendo a carga parasitÃria sempre maior na lesÃo. Independente da via de inoculaÃÃo, o fÃgado e baÃo nÃo estavam aumentados, nÃo apresentavam nÃdulos e nem parasitos. No linfonodo retromaxilar, observou-se uma maior expressÃo das citocinas inflamatÃrias IFN-&#611;, TNF-&#945; e IL-6 e da enzima arginase, com 30 e 60d.p.i., e isso foi corroborado com as alteraÃÃes histolÃgicas observadas na orelha, processo inflamatÃrio mais intenso e cronicidade da doenÃa. Ao contrÃrio, no linfonodo poplÃteo (pata), apresentou um misto de citocinas inflamatÃrias e anti-inflamatÃrias, sugerindo uma regulaÃÃo bem precoce da resposta imunolÃgica e inflamatÃria. Observou-se tambÃm que quanto maior o inÃculo, mais intensa a resposta inflamatÃria e maiores as lesÃes, entretanto, sem disseminaÃÃo do parasito para fÃgado e baÃo, sugerindo menor comprometimento sistÃmico e maior tempo de sobrevida para o animal. Em suma, os dados indicam que o inÃculo de 105 parasitos no modelo de infecÃÃo na orelha poderia facilitar a visualizaÃÃo de um possÃvel efeito protetor de novos fÃrmacos ou candidatos vacinais.

Conselho Nacional de Desenvolvimento CientÃfico e TecnolÃgico / At the present time, a significant increase of opportunistic fungal infections is observed, mainly in immunocompromised patients. Candidiasis has been the most documented and are often associated with the formation of biofilms. Commercially available antifungal agents are restricted to a small number of drugs when compared to antibacterial agents. These facts, associated with the increase in the resistance frequency of Candida species, demonstrate the need to search for new therapeutic strategies, where natural products stand out. Several works have already demonstrated different biological activities of &#946;-lapachone (naphthoquinone), including antifungal. Thus, the aim of the present study was to evaluate the antifungal potential of &#946;-lapachone on the growth of Candida spp. Resistant to azole derivatives, in planktonic forms and biofilm, as well as to elucidate their possible mechanisms of action. For this, the evaluation of the anti-fungal effect of &#946;-lapachone was performed on 22 strains of Candida spp. Using microdilution in broth. Subsequently, parameters such as cell viability, generation of reactive oxygen species (EROS), mitochondrial damage and phosphatidylserine externalization were evaluated by means of flow cytometric analysis and DNA damage by comet test, contributing to elucidation of the probable mechanism of &#914;-lapachone action. In addition, a protein expression profile was obtained by proteomic analysis in a representative C. albicans strain after treatment with the compound. And, finally, the cell viability of the biofilms was determined by the tetrazolium salt reduction (MTT) assay. According to the results, &#946;-lapachone presented antifungal activity against strains of Candida spp. Azole resistant, with minimal inhibitory concentration (MIC) ranging from 4 - 16 &#956;g / mL. &#914;-lapachone altered the permeability of the mitochondrial membrane, increased the intracellular levels of EROS, decreased cell viability in a dose-dependent manner, caused DNA damage and, consequently, led to cell death by apoptosis. Among the proteins identified, some are related to the translation process, energy metabolism, genetic processing and defense against reactive oxygen species. In relation to the biofilm assays, &#946;-lapachone presented an effect on biofilm formed (24 hours), with the C. albicans isolate presenting a 50% reduction in concentrations of 2x MIC, 10x MIC and 50x MIC, while C. tropicalis and C In the concentrations of 10x MIC and 50x MIC (p <0.05). The use of subinhibitory concentrations was able to significantly reduce (p <0.05) the biofilm formation of Candida spp. Therefore, we conclude that &#946;-lapachone is able to inhibit the in vitro growth of Candida spp. Resistant in both planktonic and biofilm forms suggesting that this compound molecule has the potential to act as an antifungal agent with apoptotic activity. / Nos dias atuais, observa-se um aumento significativo das infecÃÃes fÃngicas oportunistas, principalmente em pacientes imunocomprometidos. A candidÃase tem sido a mais documentada e muitas vezes estÃo associadas à formaÃÃo de biofilmes. Os agentes antifÃngicos disponÃveis no mercado sÃo restritos a um pequeno nÃmero de fÃrmacos quando comparados aos agentes antibacterianos. Esses fatos associados ao aumento da frequÃncia de resistÃncia de espÃcies de Candida, demonstram a necessidade de buscar por novas estratÃgias terapÃuticas, onde os produtos naturais se destacam. Diversos trabalhos jà demonstram diferentes atividades biolÃgicas de &#946;-lapachona (naftoquinona), incluindo antifÃngica. Assim, o objetivo do presente trabalho foi avaliar o potencial antifÃngico da &#946;-lapachona sobre o crescimento de Candida spp. resistentes a derivados azÃlicos, nas formas planctÃnicas e biofilme, bem como elucidar os seus possÃveis mecanismos de aÃÃo. Para isso, a avaliaÃÃo do efeito antifÃngico da &#946;-lapachona foi realizada em 22 cepas de Candida spp. utilizando microdiluiÃÃo em caldo. Posteriormente, parÃmetros como viabilidade celular, geraÃÃo de espÃcies reativas de oxigÃnio (EROS), danos na mitocÃndria e externalizaÃÃo de fosfatidilserina foram avaliados por meio de anÃlises de citometria de fluxo e os danos ao DNA pelo teste do cometa contribuindo para elucidaÃÃo do provÃvel mecanismo de aÃÃo da &#946;-lapachona. AlÃm disso, por meio da anÃlise proteÃmica foi obtido um perfil de expressÃo de proteÃnas em uma cepa representativa de C. albicans apÃs tratamento com o composto. E, por fim, a viabilidade celular dos biofilmes foi determinada por meio do ensaio de reduÃÃo do sal de tetrazÃlio (MTT). De acordo com os resultados obtidos, &#946;-lapachona apresentou atividade antifÃngica frente a cepas de Candida spp. resistentes a azÃlicos, com concentraÃÃo inibitÃria mÃnima (CIM) variando entre 4 - 16 &#956;g/mL. &#946;-lapachona alterou a permeabilidade da membrana mitocondrial, aumentou os nÃveis intracelulares de EROS, diminuiu a viabilidade celular de forma dose-dependente, causou danos ao DNA e, consequentemente, conduziu morte celular por apoptose. Dentre as proteÃnas identificadas, algumas estÃo relacionadas com o processo de traduÃÃo, metabolismo energÃtico, processamento genÃtico e de defesa contra espÃcies reativas de oxigÃnio. Em relaÃÃo aos ensaios de biofilmes, &#946;-lapachona apresentou efeito sobre biofilme formado (24 horas), com o isolado de C. albicans apresentando reduÃÃo de 50% nas concentraÃÃes de 2x CIM, 10x CIM e 50x CIM, enquanto C. tropicalis e C. parapsilosis nas concentraÃÃes de 10x CIM e 50x CIM (p < 0,05). O uso de concentraÃÃes subinibitÃrias foi capaz de reduzir significativamente (p < 0,05) a formaÃÃo dos biofilmes de Candida spp. Portanto, conclui-se que &#946;-lapachona à capaz de inibir o crescimento in vitro de Candida spp. resistentes a azÃlicos tanto na forma planctÃnica como em biofilme sugerindo que esta molÃcula composto tem potencial para agir como agente antifÃngico com atividade apoptÃtica.

CoordenaÃÃo de AperfeÃoamento de Pessoal de NÃvel Superior / Sealants are materials applied to scars and fissures to prevent onset the onset of the caries process or interrupt its progression. Chlorhexidine (CLX) is a broad spectrum antimicrobial agent whose incorporation has been tested in various dental materials. The objective of this study was to evaluate the in vitro effect of the incorporation of chlorhexidine digluconate (DC) at 0.5% on the properties of a resinous sealant (SR) and a chemically activated ionomeric sealant (SI). The effect of the incorporation of CLX on the roughness of the materials was also evaluated. (BiosealÂ-control group), SRDC (Bioseal + 0.5% DC), SI (Riva ProtectÂ) and SIDC (Riva ProtectÂ) + 0.5% of DC). For an enamel caries induction, a microbiological model of S. mutans biofilm formation was used for five days, three blocks of each group for each experimental triplicate. The antimicrobial effect was evaluated by counting UFCs (colony forming units), dry weight analysis and confocal microscopy. To evaluate the demineralization, the blocks were analyzed by longitudinal microhardness of the enamel at 50 &#956;m and 100 &#956;m of the restoration margin. In addition, for each experimental group, test specimens from all groups were analyzed for their surface roughness pattern. Data were analyzed using ANOVA (two factors), with significance level of 5%. SR presented fewer CFUs when compared to SI (p = 0.004). Regarding dry weight, SR was lower than SI (p = 0.006). In the analysis of hardness at 50 &#956;m, lower demineralization was observed for groups with ionomer when compared to those with resin (p <0.001), as well as between groups with CLX when compared to groups without CLX (p = 0.026). In the distance of 100 &#956;m, the groups with ionomer showed a lower demineralization when compared to those with resin (p <0.001). The roughness in SI was superior to SR, both before (p = 0.032) and after exposure to cariogenic biofilm (p <0.001). In general, confocal laser microscopy (MCLS) data provided information consistent with the efficiency of CLX incorporation favoring the antimicrobial activity of resinous sealants when compared to ionomeric sealants. The ionomeric materials have a higher anticaryeffect, however the incorporation of DC seems to be more effective and necessary when using resinous sealants. / Os selantes sÃo materiais adesivos aplicados em cicatrÃculas e fissuras para prevenir in loco o inÃcio do processo de cÃrie ou interromper sua progressÃo. A clorexidina (CLX) à um agente antimicrobiano de amplo espectro, cuja incorporaÃÃo tem sido testada em diversos materiais odontolÃgicos. O objetivo deste estudo foi avaliar o efeito in vitro da incorporaÃÃo de digluconato de clorexidina (DC) a 0,5% sobre as propriedades anticÃrie de um selante resinoso (SR) e um selante ionomÃrico quimicamente ativado (SI). O efeito da incorporaÃÃo de CLX na rugosidade dos materiais tambÃm foi avaliado. Blocos de esmalte dentÃrio bovino (8x8x4 mm) com preparos cavitÃrios foram restaurados utilizando o selante, de acordo com os grupos: SR (BiosealÂ-grupo controle), SRDC (Bioseal + 0,5% de DC), SI (Riva Protect Â) e SIDC (Riva Protect  + 0,5% de DC). Para a induÃÃo de cÃrie em esmalte, utilizou-se um modelo microbiolÃgico de formaÃÃo de biofilme de S. mutans durante cinco dias, sendo trÃs blocos de cada grupo para cada triplicata experimental. O efeito antimicrobiano foi avaliado atravÃs da contagem de UFCs (unidades formadoras de colÃnia), anÃlise do peso seco e microscopia confocal. Para avaliar a desmineralizaÃÃo, os blocos foram analisados por microdureza longitudinal do esmalte em 50 &#956;m e 100 &#956;m da margem de restauraÃÃo. AlÃm disso, para cada grupo experimental, corpos de prova de todos os grupos foram analisados quanto ao seu padrÃo de rugosidade de superfÃcie. Os dados foram analisados utilizando ANOVA (dois fatores), com nÃvel de significÃncia de 5%. SR apresentou menos UFCs quando comparado a SI (p=0,004). Em relaÃÃo ao peso seco, SR foi menor que o SI (p=0,006). Na anÃlise de dureza à 50 Âm, menor desmineralizaÃÃo foi observada para os grupos com ionÃmero quando comparados Ãqueles com resina (p<0,001), assim como entre os grupos com CLX quando comparados aos grupos sem CLX (p=0,026). Na distÃncia de 100 Âm, os grupos com ionÃmero apresentaram uma menor desmineralizaÃÃo quando comparados Ãqueles com resina (p<0,001). A rugosidade em SI foi superior a SR, tanto antes (p=0,032) quanto apÃs a exposiÃÃo ao biofilme cariogÃnico (p<0,001). De forma geral, os dados de microscopia confocal a laser (MCLS) forneceram informaÃÃes condizentes com a eficÃcia da incorporaÃÃo de CLX favorecendo a atividade antimicrobiana dos selantes resinosos quando comparada ao selantes ionomÃricos. Os materiais ionomÃricos tÃm um maior efeito anticÃrie, no entanto a incorporaÃÃo de DC parece ser mais eficaz e necessÃria quando da utilizaÃÃo de selantes resinosos.

CoordenaÃÃo de AperfeiÃoamento de Pessoal de NÃvel Superior / Conselho Nacional de Desenvolvimento CientÃfico e TecnolÃgico / O envolvimento colorretal està presente em aproximadamente 5% a 10% dos casos de endometriose infiltrativa profunda (BAILEY, 2007) e a avaliaÃÃo da extensÃo loco-regional destas lesÃes à essencial para o correto tratamento. O objetivo deste estudo foi correlacionar os achados da ultrassonografia anorretal tridimensional com os achados da videolaparoscopia em mulheres com suspeita de endometriose profunda e calcular o valor preditivo positivo, negativo, sensibilidade e especificidade da ultrassonografia anorretal tridimensional no diagnÃstico desta afecÃÃo. Este à um estudo prospectivo, observacional, transversal que avaliou 180 pacientes do sexo feminino portadoras de endometriose pÃlvica e com suspeita de acometimento intestinal, no perÃodo de abril de 2010 a agosto de 2012. Destas, 89 pacientes foram incluÃdas e participaram de todas as etapas do estudo. As pacientes foram inicialmente submetidas a US 3D e colonoscopia para avaliaÃÃo no Setor de Coloproctologia do Hospital Genesis/GastroclÃnica, Cascavel/ParanÃ. Com base no resultado da US 3D, as pacientes foram distribuÃdas em Grupo I constituÃdo por 15 mulheres com mÃdia de idade de 32,9 anos, variando de 23 a 42 anos, sem lesÃes envolvendo reto e gordura perirretal, Grupo II constituÃdo por 38 mulheres com idade mÃdia de 33,85 anos, variando de 21 a 47 anos, com lesÃes acometendo a gordura perirretal e Grupo III constituÃdo por 36 mulheres com idade mÃdia de 34,67 anos, variando de 26 a 48 anos, com imagens sugestivas de foco endometriÃtico acometendo, pelo menos, a camada muscular prÃpria do reto. ApÃs essa etapa inicial, foram encaminhadas ao procedimento cirÃrgico videolaparoscÃpico constituÃdo de uma equipe multidisciplinar. O projeto foi aprovado pelo Comità de Ãtica MÃdica do Hospital GÃnesis/CEDIMED sob a ata n 07 e todos assinaram o termo de consentimento pÃs-informado. As pacientes do G-II apresentavam como mÃdia do tamanho do foco endometriÃtico 1,97 cm e a mÃdia da distÃncia da lesÃo ao mÃsculo puborretal foi de 4,45 cm. As imagens correlacionadas com focos de endometriose estavam localizadas na gordura perirretal, sem invasÃo. Esses achados foram confirmados em 37 pacientes e os procedimentos adotados foram: laparoscopia em 1 paciente (2,8%), colotomia em 2 pacientes (5,2%), excisÃo da lesÃo retal em 32 pacientes (84,2%) e retossigmoidectomia em 3 pacientes (7,8%). No G-III, a mÃdia do tamanho do foco endometriÃtico foi de 2,34 cm e a distÃncia mÃdia da lesÃo ao mÃsculo puborretal foi de 4,31 cm. O foco infiltrava, pelo menos, a camada muscular da parede retal. Esses achados foram confirmados em 33 pacientes e os procedimentos cirÃrgicos realizados foram: laparoscopia em 1 paciente (2,8%), ressecÃÃo em cunha em 1 paciente (2,8%), colotomia em 11 pacientes (30,5%), excisÃo da lesÃo retal em 11 pacientes (30,5%) e retossigmoidectomia em 12 pacientes (33,4%). NÃo houve diferenÃa estatisticamente significativa entre os grupos em relaÃÃo ao tamanho do foco e nem em relaÃÃo à distÃncia da lesÃo ao mÃsculo puborretal (p>0,05). Foi evidenciado concordÃncia quase perfeita entre os achados do US 3D e a VLP (Kappa: 0,892; IC95%: 0,738-1,0) (p<0,001). Quanto ao diagnÃstico de infiltraÃÃo da parede retal, US 3D obteve uma sensibilidade de 98,5%, especificidade 73,6%, VPP de 93,3%, o VPN 73,6%. Os achados da ultrassonografia anorretal tridimensional quando comparados com a videolaparoscopia em mulheres com suspeita de endometriose profunda mostra-se com excelente concordÃncia. A ultrassonografia anorretal tridimensional apresentou um alto valor preditivo e boa sensibilidade no diagnÃstico da endometriose pÃlvica profunda. / O envolvimento colorretal està presente em aproximadamente 5% a 10% dos casos de endometriose infiltrativa profunda (BAILEY, 2007) e a avaliaÃÃo da extensÃo loco-regional destas lesÃes à essencial para o correto tratamento. O objetivo deste estudo foi correlacionar os achados da ultrassonografia anorretal tridimensional com os achados da videolaparoscopia em mulheres com suspeita de endometriose profunda e calcular o valor preditivo positivo, negativo, sensibilidade e especificidade da ultrassonografia anorretal tridimensional no diagnÃstico desta afecÃÃo. Este à um estudo prospectivo, observacional, transversal que avaliou 180 pacientes do sexo feminino portadoras de endometriose pÃlvica e com suspeita de acometimento intestinal, no perÃodo de abril de 2010 a agosto de 2012. Destas, 89 pacientes foram incluÃdas e participaram de todas as etapas do estudo. As pacientes foram inicialmente submetidas a US 3D e colonoscopia para avaliaÃÃo no Setor de Coloproctologia do Hospital Genesis/GastroclÃnica, Cascavel/ParanÃ. Com base no resultado da US 3D, as pacientes foram distribuÃdas em Grupo I constituÃdo por 15 mulheres com mÃdia de idade de 32,9 anos, variando de 23 a 42 anos, sem lesÃes envolvendo reto e gordura perirretal, Grupo II constituÃdo por 38 mulheres com idade mÃdia de 33,85 anos, variando de 21 a 47 anos, com lesÃes acometendo a gordura perirretal e Grupo III constituÃdo por 36 mulheres com idade mÃdia de 34,67 anos, variando de 26 a 48 anos, com imagens sugestivas de foco endometriÃtico acometendo, pelo menos, a camada muscular prÃpria do reto. ApÃs essa etapa inicial, foram encaminhadas ao procedimento cirÃrgico videolaparoscÃpico constituÃdo de uma equipe multidisciplinar. O projeto foi aprovado pelo Comità de Ãtica MÃdica do Hospital GÃnesis/CEDIMED sob a ata n 07 e todos assinaram o termo de consentimento pÃs-informado. As pacientes do G-II apresentavam como mÃdia do tamanho do foco endometriÃtico 1,97 cm e a mÃdia da distÃncia da lesÃo ao mÃsculo puborretal foi de 4,45 cm. As imagens correlacionadas com focos de endometriose estavam localizadas na gordura perirretal, sem invasÃo. Esses achados foram confirmados em 37 pacientes e os procedimentos adotados foram: laparoscopia em 1 paciente (2,8%), colotomia em 2 pacientes (5,2%), excisÃo da lesÃo retal em 32 pacientes (84,2%) e retossigmoidectomia em 3 pacientes (7,8%). No G-III, a mÃdia do tamanho do foco endometriÃtico foi de 2,34 cm e a distÃncia mÃdia da lesÃo ao mÃsculo puborretal foi de 4,31 cm. O foco infiltrava, pelo menos, a camada muscular da parede retal. Esses achados foram confirmados em 33 pacientes e os procedimentos cirÃrgicos realizados foram: laparoscopia em 1 paciente (2,8%), ressecÃÃo em cunha em 1 paciente (2,8%), colotomia em 11 pacientes (30,5%), excisÃo da lesÃo retal em 11 pacientes (30,5%) e retossigmoidectomia em 12 pacientes (33,4%). NÃo houve diferenÃa estatisticamente significativa entre os grupos em relaÃÃo ao tamanho do foco e nem em relaÃÃo à distÃncia da lesÃo ao mÃsculo puborretal (p>0,05). Foi evidenciado concordÃncia quase perfeita entre os achados do US 3D e a VLP (Kappa: 0,892; IC95%: 0,738-1,0) (p<0,001). Quanto ao diagnÃstico de infiltraÃÃo da parede retal, US 3D obteve uma sensibilidade de 98,5%, especificidade 73,6%, VPP de 93,3%, o VPN 73,6%. Os achados da ultrassonografia anorretal tridimensional quando comparados com a videolaparoscopia em mulheres com suspeita de endometriose profunda mostra-se com excelente concordÃncia. A ultrassonografia anorretal tridimensional apresentou um alto valor preditivo e boa sensibilidade no diagnÃstico da endometriose pÃlvica profunda. / O envolvimento colorretal està presente em aproximadamente 5% a 10% dos casos de endometriose infiltrativa profunda (BAILEY, 2007) e a avaliaÃÃo da extensÃo loco-regional destas lesÃes à essencial para o correto tratamento. O objetivo deste estudo foi correlacionar os achados da ultrassonografia anorretal tridimensional com os achados da videolaparoscopia em mulheres com suspeita de endometriose profunda e calcular o valor preditivo positivo, negativo, sensibilidade e especificidade da ultrassonografia anorretal tridimensional no diagnÃstico desta afecÃÃo. Este à um estudo prospectivo, observacional, transversal que avaliou 180 pacientes do sexo feminino portadoras de endometriose pÃlvica e com suspeita de acometimento intestinal, no perÃodo de abril de 2010 a agosto de 2012. Destas, 89 pacientes foram incluÃdas e participaram de todas as etapas do estudo. As pacientes foram inicialmente submetidas a US 3D e colonoscopia para avaliaÃÃo no Setor de Coloproctologia do Hospital Genesis/GastroclÃnica, Cascavel/ParanÃ. Com base no resultado da US 3D, as pacientes foram distribuÃdas em Grupo I constituÃdo por 15 mulheres com mÃdia de idade de 32,9 anos, variando de 23 a 42 anos, sem lesÃes envolvendo reto e gordura perirretal, Grupo II constituÃdo por 38 mulheres com idade mÃdia de 33,85 anos, variando de 21 a 47 anos, com lesÃes acometendo a gordura perirretal e Grupo III constituÃdo por 36 mulheres com idade mÃdia de 34,67 anos, variando de 26 a 48 anos, com imagens sugestivas de foco endometriÃtico acometendo, pelo menos, a camada muscular prÃpria do reto. ApÃs essa etapa inicial, foram encaminhadas ao procedimento cirÃrgico videolaparoscÃpico constituÃdo de uma equipe multidisciplinar. O projeto foi aprovado pelo Comità de Ãtica MÃdica do Hospital GÃnesis/CEDIMED sob a ata n 07 e todos assinaram o termo de consentimento pÃs-informado. As pacientes do G-II apresentavam como mÃdia do tamanho do foco endometriÃtico 1,97 cm e a mÃdia da distÃncia da lesÃo ao mÃsculo puborretal foi de 4,45 cm. As imagens correlacionadas com focos de endometriose estavam localizadas na gordura perirretal, sem invasÃo. Esses achados foram confirmados em 37 pacientes e os procedimentos adotados foram: laparoscopia em 1 paciente (2,8%), colotomia em 2 pacientes (5,2%), excisÃo da lesÃo retal em 32 pacientes (84,2%) e retossigmoidectomia em 3 pacientes (7,8%). No G-III, a mÃdia do tamanho do foco endometriÃtico foi de 2,34 cm e a distÃncia mÃdia da lesÃo ao mÃsculo puborretal foi de 4,31 cm. O foco infiltrava, pelo menos, a camada muscular da parede retal. Esses achados foram confirmados em 33 pacientes e os procedimentos cirÃrgicos realizados foram: laparoscopia em 1 paciente (2,8%), ressecÃÃo em cunha em 1 paciente (2,8%), colotomia em 11 pacientes (30,5%), excisÃo da lesÃo retal em 11 pacientes (30,5%) e retossigmoidectomia em 12 pacientes (33,4%). NÃo houve diferenÃa estatisticamente significativa entre os grupos em relaÃÃo ao tamanho do foco e nem em relaÃÃo à distÃncia da lesÃo ao mÃsculo puborretal (p>0,05). Foi evidenciado concordÃncia quase perfeita entre os achados do US 3D e a VLP (Kappa: 0,892; IC95%: 0,738-1,0) (p<0,001). Quanto ao diagnÃstico de infiltraÃÃo da parede retal, US 3D obteve uma sensibilidade de 98,5%, especificidade 73,6%, VPP de 93,3%, o VPN 73,6%. Os achados da ultrassonografia anorretal tridimensional quando comparados com a videolaparoscopia em mulheres com suspeita de endometriose profunda mostra-se com excelente concordÃncia. A ultrassonografia anorretal tridimensional apresentou um alto valor preditivo e boa sensibilidade no diagnÃstico da endometriose pÃlvica profunda. / O envolvimento colorretal està presente em aproximadamente 5% a 10% dos casos de endometriose infiltrativa profunda (BAILEY, 2007) e a avaliaÃÃo da extensÃo loco-regional destas lesÃes à essencial para o correto tratamento. O objetivo deste estudo foi correlacionar os achados da ultrassonografia anorretal tridimensional com os achados da videolaparoscopia em mulheres com suspeita de endometriose profunda e calcular o valor preditivo positivo, negativo, sensibilidade e especificidade da ultrassonografia anorretal tridimensional no diagnÃstico desta afecÃÃo. Este à um estudo prospectivo, observacional, transversal que avaliou 180 pacientes do sexo feminino portadoras de endometriose pÃlvica e com suspeita de acometimento intestinal, no perÃodo de abril de 2010 a agosto de 2012. Destas, 89 pacientes foram incluÃdas e participaram de todas as etapas do estudo. As pacientes foram inicialmente submetidas a US 3D e colonoscopia para avaliaÃÃo no Setor de Coloproctologia do Hospital Genesis/GastroclÃnica, Cascavel/ParanÃ. Com base no resultado da US 3D, as pacientes foram distribuÃdas em Grupo I constituÃdo por 15 mulheres com mÃdia de idade de 32,9 anos, variando de 23 a 42 anos, sem lesÃes envolvendo reto e gordura perirretal, Grupo II constituÃdo por 38 mulheres com idade mÃdia de 33,85 anos, variando de 21 a 47 anos, com lesÃes acometendo a gordura perirretal e Grupo III constituÃdo por 36 mulheres com idade mÃdia de 34,67 anos, variando de 26 a 48 anos, com imagens sugestivas de foco endometriÃtico acometendo, pelo menos, a camada muscular prÃpria do reto. ApÃs essa etapa inicial, foram encaminhadas ao procedimento cirÃrgico videolaparoscÃpico constituÃdo de uma equipe multidisciplinar. O projeto foi aprovado pelo Comità de Ãtica MÃdica do Hospital GÃnesis/CEDIMED sob a ata n 07 e todos assinaram o termo de consentimento pÃs-informado. As pacientes do G-II apresentavam como mÃdia do tamanho do foco endometriÃtico 1,97 cm e a mÃdia da distÃncia da lesÃo ao mÃsculo puborretal foi de 4,45 cm. As imagens correlacionadas com focos de endometriose estavam localizadas na gordura perirretal, sem invasÃo. Esses achados foram confirmados em 37 pacientes e os procedimentos adotados foram: laparoscopia em 1 paciente (2,8%), colotomia em 2 pacientes (5,2%), excisÃo da lesÃo retal em 32 pacientes (84,2%) e retossigmoidectomia em 3 pacientes (7,8%). No G-III, a mÃdia do tamanho do foco endometriÃtico foi de 2,34 cm e a distÃncia mÃdia da lesÃo ao mÃsculo puborretal foi de 4,31 cm. O foco infiltrava, pelo menos, a camada muscular da parede retal. Esses achados foram confirmados em 33 pacientes e os procedimentos cirÃrgicos realizados foram: laparoscopia em 1 paciente (2,8%), ressecÃÃo em cunha em 1 paciente (2,8%), colotomia em 11 pacientes (30,5%), excisÃo da lesÃo retal em 11 pacientes (30,5%) e retossigmoidectomia em 12 pacientes (33,4%). NÃo houve diferenÃa estatisticamente significativa entre os grupos em relaÃÃo ao tamanho do foco e nem em relaÃÃo à distÃncia da lesÃo ao mÃsculo puborretal (p>0,05). Foi evidenciado concordÃncia quase perfeita entre os achados do US 3D e a VLP (Kappa: 0,892; IC95%: 0,738-1,0) (p<0,001). Quanto ao diagnÃstico de infiltraÃÃo da parede retal, US 3D obteve uma sensibilidade de 98,5%, especificidade 73,6%, VPP de 93,3%, o VPN 73,6%. Os achados da ultrassonografia anorretal tridimensional quando comparados com a videolaparoscopia em mulheres com suspeita de endometriose profunda mostra-se com excelente concordÃncia. A ultrassonografia anorretal tridimensional apresentou um alto valor preditivo e boa sensibilidade no diagnÃstico da endometriose pÃlvica profunda.

A distensÃo retal induz o relaxamento transitÃrio do esfÃncter esofÃgico inferior (RTEEI) em cÃes, tal relaxamento gera uma queda na pressÃo do esfÃncter esofÃgico inferior (EEI) no nÃvel da pressÃo intragÃstrica, evento inclusive considerado o principal fator para ocorrÃncia do refluxo gastroesofÃgico. O objetivo deste estudo foi avaliar a participaÃÃo da via nitrÃrgica na elevaÃÃo da taxa de RTEEI decorrente da distensÃo retal em cÃes. Foram utilizados cÃes (n=21), sem raÃa definida, machos, pesando entre 10-15 Kg. Os animais foram submetidos ao jejum de 12h com Ãgua ad libitum. No dia seguinte, os cÃes foram anestesiados com (cetamina 10 mg.Kg-1 + xilazina 20 mg.Kg-1). Posteriormente, foi iniciado o protocolo de avaliaÃÃo da motilidade esofÃgica. Em seguida, os animais foram aleatoriamente prÃ-tratados com soluÃÃo salina 0.15 M (1 ml.Kg-1, i.v.), L-NAME (3 mg.Kg-1), L-NAME (3 mg.Kg-1, i.v.) + L-Arginina (200 mg.Kg-1, i.v.), glibenclamida (1 mg.Kg-1, i.v.) ou azul de metileno (3 mg.Kg-1, i.v.). Decorridos 45 min, o reto foi distendido (5 ml.Kg-1) com um balÃo de lÃtex e as variaÃÃes da motilidade esofÃgica foram registradas ao longo dos 45 min seguintes. Os dados foram analisados utilizando-se ANOVA seguida do teste Student-Newman-Keuls. Em relaÃÃo aos respectivos animais controles (5,8 Â 0,34 RTEEI/h) o prÃ-tratamento com L-NAME (2,3Â0,52 RTEEI/h) reduziu (p<0.05) a taxa de RTEEI provenientes da distensÃo retal, evento que foi revertido no grupo que recebeu a adiÃÃo de L-Arginina (6,5 Â 0,6 RTEEI/h, p<0,05). AlÃm disso, o prÃ-tratamento com azul de metileno (1,56 Â 0,5 RTEEI/h) tambÃm preveniu o aumento da taxa de RTEEI decorrente da distensÃo retal. Entretanto, nos animais prÃ-tratados com glibenclamida (5,3 Â 0,3 RTEEI/h) a distensÃo retal nÃo demonstrou alteraÃÃo no nÃmero de RTEEI em relaÃÃo ao grupo controle. O Ãxido nÃtrico participa da elevaÃÃo da taxa de RTEEI decorrente da distensÃo retal em cÃes atravÃs do segundo mensageiro GMPc. / The rectal distension (RD) induces transitory relaxation of lower esophageal sphincter (TLERs) in dogs, this relaxation generates a drop in pressure of lower esophageal sphincter (LES) similar a intragastric pressure values event even considered the main factor for the occurrence of gastroesophageal reflux. The aim of this study was evaluate the participation of the nitrergic pathway in the increased rate of TLERs induced by rectal distension in dogs. Mongrel male dogs (n = 21) weighing 10-15 kg. The animals were fasted for 12 hours with water ad libitum. The next day, the dogs were anesthetized (ketamine 10 mg.Kg-1 + xylazine 20 mg.Kg-1). The animals were subjected to the evaluation protocol of esophageal motility during 120 min. Considering the first 30 minutes as basal period, the animals were randomly intravenous treated whit: Saline 0.15M (1ml.Kg-1, i.v.), L-NAME (3 mg.Kg-1, i.v.), L-NAME (3 mg.Kg-1, i.v.) + L-Arginine (200 mg.Kg-1, i.v.), glibenclamide (1 mg.Kg-1, i.v.) or methylene blue (3 mg.Kg-1, i.v.). After 45 min, the rectum was distended (5 ml.Kg-1, i.v.) with a latex balloon and changes in esophageal motility were recorded last 45 min. Data were analyzed using ANOVA followed by Student Newman-Keuls test. In comparison to their control animals (5,8 Â 0,34 TLESRs/h), pre-treatment with L-NAME (2,3Â0,52 TLESRs/h) decreased (p <0.05) rate the TRLES induced by DR, this phenomena was reversed by L-NAME plus L-Arginine (6,5 Â 0,6 TLESRs/h, p<0,05). Moreover, the pre-treatment with methylene blue (1,56 Â 0,5 TLESRs/h) also prevent increase rate the TLESRs induced by RD. However, in animals pretreated with glibenclamide (5,3 Â 0,3 TLESRs/h) RD the showed no change in the number of TLESRs in comparison the control. Nitric oxide participates in the rising rate of TLESRs resulting from rectal distension in dogs through the cGMP second messenger

Oxaliplatin is a third-generation platinum compound and the first-line treatment for colorectal cancer. The main limiting factor in oxaliplatin treatment is painful neuropathy that is difficult to treat. This side effect has been studied for several years, but its full mechanism is still inconclusive, and effective treatment does not exist. Data suggest that oxaliplatinâs initial neurotoxic effect is peripheral and oxidative stress-dependent. A spinal target is also suggested in its mechanism of action. The flavonoids rutin and quercetin have been described as cell-protecting agents because of their antioxidant, antinociceptive, and anti-inflammatory actions. We proposed a preventive effect of these agents on oxaliplatin-induced painful peripheral neuropathy based on their antioxidant properties. Methods: Oxaliplatin (1 mg/kg, i.v.) was injected in male Swiss mice, twice per week for 4 weeks. The development of sensory alterations, such as thermal allodynia and mechanical hypernociception, was evaluated using the tail immersion test in cold water (10ÂC) and the von Frey test. Rutin and quercetin (25-100 mg/kg, i.p.) were injected 30 min before each oxaliplatin injection. The animalsâ spinal cords were removed for histopathological and immunohistochemical evaluation and malondialdehyde and non-protein sulfhydryl group assays. Results: Oxaliplatin significantly reduced thermal and mechanical nociceptive thresholds, effects prevented by quercetin and rutin at all doses. Fos immunostaining in the dorsal horn of the spinal cord confirmed these results. The oxidative stress assays mainly showed that oxaliplatin induced peroxidation in the spinal cord and that rutin and quercetin decreased this effect. The flavonoids also decreased inducible nitric oxide synthase and nitrotyrosine immunostaining in the dorsal horn of the spinal cord. These results suggest that nitric oxide and peroxynitrite are also involved in the neurotoxic effect of oxaliplatin and that rutin and quercetin can inhibit their effect in the spinal cord. We also observed the preservation of dorsal horn structure using histopathological analyses. Conclusions: Oxaliplatin induced painful peripheral neuropathy in mice, an effect that was prevented by rutin and quercetin. The mechanism of action of oxaliplatin appears to be at least partially oxidative stress-induced damage in dorsal horn neurons, with the involvement of lipid peroxidation and protein nitrosylation. / Oxaliplatina (OXL) à um agente antineoplÃsico de terceira geraÃÃo, com potente atividade citotÃxica em vÃrios tipos de cÃncer, mas apresenta um efeito neurotÃxico importante que causa uma severa e dolorosa neuropatia perifÃrica. Dados da literatura tambÃm sugerem que o efeito neurotÃxico inicial da OXL seria dependente do estresse oxidativo, nos tecidos perifÃricos. Os flavonÃides Rutina (RT) e Quercetina (QC) foram descritos como agentes protetores celulares por sua aÃÃo antioxidante, assim como por seus efeitos antiinflamatÃrios e antinociceptivos. O objetivo deste estudo à investigar o efeito do tratamento com RT e QC na neuropatia sensitiva perifÃrica (NSP) induzida pela OXL em camundongos. O estudo foi aprovado pelo Comità de Ãtica em Pesquisa Animal da Universidade Federal do Cearà (n 36/2011). A neuropatia sensitiva foi induzida em camundongos Swiss machos (25-30 g), atravÃs de duas injeÃÃes por semana de OXL (1 mg/kg, e.v.) durante 4,5 semanas, no total de nove injeÃÃes, juntamente com a avaliaÃÃo de testes nociceptivos semanais. AlodÃnia tÃrmica foi avaliada pelo teste de imersÃo da cauda em Ãgua fria (10 ÂC), e hipernocicepÃÃo mecÃnica plantar pelo teste eletrÃnico de Von Frey. Os animais tratados com OXL foram divididos nos grupos: grupo controle (prÃ-tratado com salina), e trÃs grupos prÃ-tratados com RT ou QC (25, 50 e 100 mg/kg, i.p), 30 min antes de cada injeÃÃo de OXL. No final dos experimentos, as medulas espinhais foram removidas e processadas para avaliaÃÃo histopatolÃgica e imunohistoquÃmica. Em outros experimentos a medula espinha tambÃm foi retirada para testes bioquÃmicos (MDA e NP-SH). Nossos resultados mostraram que a OXL reduziu significativamente (p < 0,05) tanto o limiar nociceptivo tÃrmico como mecÃnico. O tratamento com QC, preveniu esses efeitos (p< 0,05) em todas as doses (efeito mÃximo na dose de 50 mg/kg), aumentando o limiar em 68,6 % para alodÃnia tÃrmica e em 47,6 % para hipernocicepÃÃo mecÃnica. O tratamento com RT tambÃm preveniu esses efeitos (p < 0,05) em todas as doses (efeito mÃximo na dose de 50 mg/kg) aumentando o limiar em 448 % para alodÃnia tÃrmica e em 25,5 % para hipernocicepÃÃo mecÃnica. A imunohistoquÃmica mostrou que a RT e QC diminuÃram a imunoexpressÃo para c-fos, NOSi (oxido nÃtrico sintase induzida) e nitrotirosina, no corno posterior da medula espinhal, quando comparada ao grupo controle. OXL aumentou significativamente os nÃveis de MDA, mas nÃo de NP-SH com inibiÃÃo pelo tratamento com RT e QC. Nossos resultados mostraram que RT e QC tem efeito antinociceptivo em ambos os testes, tÃrmico e mecÃnico, juntamente com a inibiÃÃo da imunoexpressÃo para c-fos pela QC na neuropatia sensitiva perifÃrica da OXL. AlÃm disso, a QC foi capaz de inibir a imunoexpressÃo para nitrotirosina e para NOSi no corno posterior da medula espinhal, indicando um possÃvel mecanismo envolvendo NO e estresse oxidativo. Os dados sugerem que RT e QC podem ter um efeito neuroprotetor, vindo a ser uma alternativa promissora na prevenÃÃo a neuropatia sensitiva perifÃrica causada pela OXL na quimioterapia do CÃncer.

CoordenaÃÃo de AperfeiÃoamento de Pessoal de NÃvel Superior / Quercetin is a plant-derived flavonoid widely known by its anti-oxidant and antiinflammatory properties. Acute pancreatitis (AP) is a disease with a high morbidity and mortality and a complex pathophysiology, with variable involvement of regional tissues or organ systems. Despite of extensive investigations into this disease entity, to date there exists no specific medical treatment for AP. In this study, quercetin was investigated for its effect on the severity of cerulein-induced acute pancreatitis in mice. Male Swiss mice were treated with quercetin (25, 50 and 100 mg/kg, p.o.), vehicle (2% DMSO in distilled water, 10 ml/kg) or thalidomide (200 mg/kg, p.o.), 1 h before administration of cerulein (5 x 50 &#956;g/kg, 1 h apart). A group treated with saline (0.9% NaCl) was also included. The effects of treatments on pancreatic edema, serum amylase and lipase enzymes and cytokines (TNF-, IL-6, IL-1 and IL-10), myeloperoxidase activity (pancreas and lung), pancreatic thiobarbituric acid reactive substances (TBARS), non-protein-sulfidryl groups (NP-SH), histopathology of pancreas and lung and immunostaining for TNF- expression in pancreas were analysed. Cerulein significantly increased pancreatic edema and serum levels of amylase, lipase, TNF-, IL-6 and IL-1 and decreased IL-10 levels. Histopathologic evaluation revealed the presence of edema, neutrophil infiltration, hemorrhage, acinar vacuolization and necrosis of the pancreas and lung hemorrhage. Besides, we observed a marked increase in the expression of TNF- in immunohistochemical analysis. The pre-treatment with quercetin (25, 50 and 100 mg/kg, p.o.) or thalidomide (200 mg/kg, p.o.) significantly attenuated the severity of acute pancreatitis induced by cerulein, as evidenced by significant reductions in pancreatic serum enzymes lipase and amylase and the pancreatic inflammation, evidenced by suppression of neutrophil infiltration, TNF-a, IL-1b and IL-6 cytokine production and the TNF-a expression. Further, it enhanced the IL-10 cytokine production and demonstrated an antioxidant action through a decrease in the levels of TBARS and restoration of pancreatic NP-SH. Quercetin could also attenuate the systemic repercussion in the lung evidenced by suppression of neutrophil infiltration (MPO) and decrease of lung hemorrhage (histology). In conclusion, this study provides the first evidence to show that quercetin attenuates the development of cerulein-induced acute pancreatitis through the anti-inflammatory and antioxidant mechanisms. / A quercetina à um flavonÃide derivado de plantas amplamente conhecido por suas propriedades antiinflamatÃrias e antioxidantes. A pancreatite aguda (PA) à uma doenÃa com alta morbi/mortalidade e fisiopatologia complexa, com envolvimento variÃvel de tecidos locais ou ÃrgÃos sistÃmicos. Apesar das amplas investigaÃÃes, atà o momento, nÃo existe nenhum tratamento mÃdico especÃfico para PA. Neste estudo, foram investigados os efeitos da quercetina sobre a gravidade da pancreatite aguda induzida por ceruleÃna em camundongos. Camundongos Swiss machos foram tratados com quercetina (25, 50 e 100 mg/kg, v.o.) ou veÃculo (2% DMSO em Ãgua destilada, 10ml/kg) ou talidomida (200mg/kg, v.o.) 1 h antes da administraÃÃo de ceruleÃna (5 x 50 &#956;g/kg, com intervalo de 1 h entre as doses). Foi incluÃdo no estudo um grupo de animais tratados com salina (0.9%). NÃs analisamos o edema pancreÃtico, os nÃveis sÃricos de amilase, lipase e citocinas (TNF-, IL-6, IL-1 e IL-10), mieloperoxidase (MPO) pancreÃtica e pulmonar, substÃncias reativas ao Ãcido tiobarbitÃrico (TBARS), grupos sulfidrÃlicos nÃo-proteicos (NP-SH), avaliaÃÃo histolÃgica do pÃncreas e pulmÃo e imunohistoquÃmica pancreÃtica (TNF-). CeruleÃna aumentou significativamente o edema pancreÃtico e os nÃveis sÃricos de amilase, lipase, TNF-, IL-6, IL-1 e dimiuiu os nÃveis de IL-10. A avaliaÃÃo histolÃgica revelou edema, infiltraÃÃo de neutrÃfilos, hemorragia, vacuolizaÃÃo e necrose acinar no pÃncreas, alÃm de hemorragia pulmonar. NÃs tambÃm observamos um marcado aumento na expressÃo de TNF- na avaliaÃÃo imunohistoquÃmica. O prÃ-tratamento com quercetina (25, 50 e 100 mg/kg, v.o.) ou talidomida (200mg/kg, v.o.) atenuou significativamente a gravidade da pancreatite aguda induzida por ceruleÃna, o que foi evidenciado pela reduÃÃo dos nÃveis sÃricos das enzimas amilase e lipase, reduÃÃo da inflamaÃÃo pancreÃtica atravÃs da supressÃo da infiltraÃÃo de neutrÃfilos e dos nÃveis sÃricos das citocinas TNF-a, IL-1b e IL-6, expressÃo de TNF-a. AlÃm disso, aumentou a produÃÃo de nÃveis da citocina IL-10 e demonstrou uma aÃÃo atioxidante atravÃs da diminuiÃÃo nos nÃveis de TBARS e restauraÃÃo de NP-SH pancreÃticos. Quercetina tambÃm atenuou a repercussÃo sistÃmica nos pulmÃes evidenciada atravÃs da supressÃo da infiltraÃÃo de neutrÃfilos (MPO) e diminuiÃÃo da hemorragia pulmonar demonstrada na avaliaÃÃo histolÃgica. Em conclusÃo, o estudo fornece a primeira evidÃncia de que a quercetina atenua o desenvolvimento da pancreatite aguda induzida por ceruleÃna em camundongos, atravÃs de mecanismos antiinflamatÃrios e antioxidantes.

CoordenaÃÃo de AperfeiÃoamento de Pessoal de NÃvel Superior / O uso clÃnico de indometacina, embora eficaz na supressÃo da dor, febre e inflamaÃÃo, à frequentemente associado a efeitos deletÃrios sobre o sistema gastrointestinal, hematolÃgico e renal, que limitam o seu uso terapÃutico. Este estudo analisou se a talidomida poderia reduzir a letalidade induzida pela indometacina e as alteraÃÃes hematolÃgicas e bioquÃmicas no sangue, os danos intestinais, alÃm do efeito da talidomida sobre o epitÃlio intestinal e o aumento nos nÃveis de fibrinogÃnio plasmÃtico induzido pela indometacina em ratos. Os ratos foram tratados com indometacina (5,0 mg/kg), talidomida 100,0 mg/kg e 200,0 mg/kg, e ampicilina (200,0 mg/kg), via oral, num perÃodo de cinco dias. Os animais foram submetidos à coleta de sangue no quinto dia de tratamento, mediante a punÃÃo do plexo-orbital do olho. Os parÃmetros estudados foram: eritrograma, contagem de leucÃcitos, tempo de protrombina (TP), tempo de tromboplastina parcial ativada (TTPA), fibrinogÃnio, contagem de plaquetas, cultura do lavado peritoneal e dosagem de mieloperoxidase (MPO) nesse lavado, avaliaÃÃo hepÃtica (ALT, AST, FA, GGT) e glicose. Os resultados do TP, TTPA, antitrombina, contagem de plaquetas, mantiveram-se normais em relaÃÃo ao grupo controle. Nos animais tratados com indometacina, observamos um aumento (p <0,001) nos nÃveis de fibrinogÃnio (637,50Â13,19 mg/dL) sendo o mesmo revertido pelo tratamento com talidomida 100,0 mg/kg e 200,0 mg/kg, (381,80  50,79 mg/dL; 389,30 65,13 mg/dL) respectivamente. Os animais que receberam indometacina apresentaram positividade em 100% das culturas realizadas para enterobactÃrias, demonstrando assim a presenÃa de bactÃrias do trato gastrintestinal na cavidade peritoneal. A atividade da MPO no lÃquido peritoneal dos ratos que receberam indometacina (5,0 mg/kg, v.o, 5d) foi significativamente maior (1217  341,4 U/mL) quando comparada com o grupo-controle (3,33  3,33 U/mL). O tratamento com talidomida (100 e 200 mg / kg, v.o, 5d) reduziu significativamente (p <0,05) este aumento (375,8  149,1 U/ mL), sendo a inibiÃÃo de 69,2%. Os resultados demonstram que a lesÃo intestinal inflamatÃria induzida pela indometacina foi revertida parcialmente pelo tratamento com a talidomida. AlÃm disso, os dados obtidos evidenciam o efeito hepatoprotetor da talidomida contra a indometacina, provavelmente por sua atividade antiinflamatÃria diminuindo ou minimizando o aumento do fibrinogÃnio e recrutamento leucocitÃrio no ambiente hepÃtico. / The clinical use of indomethacin, although effective in suppressing pain, fever and inflammation is often associated with deleterious effects for the gastrointestinal system, and hematological and renal functions, which limit its therapeutic use. This study examined in rats whether thalidomide could reduced the lethality induced by indomethacin and hematological, biochemical, blood, and intestinal damage. This study analyzed the effect of thalidomide on the intestinal epithelium and increased levels of plasma fibrinogen induced by indomethacin in rats. The rats were treated with indomethacin (5.0 mg / kg), thalidomide 100.0 mg / kg or 200.0 mg / kg, and ampicillin (200.0 mg / kg) orally over a period of 5 days. The animals were submitted to blood collection on the fifth day of treatment by puncturing the orbital plexus of the eye, after being anesthetized with ether. The blood was placed in tubes containing anticoagulant, EDTA, sodium citrate and 3.8% in tubes without anticoagulant. The parameters studied were: erythrogram, leukocyte count, prothrombin time (PT), activated partial thromboplastin time (APTT), fibrinogen, platelet count, and culture of peritoneal lavage, measurement of MPO and evaluation of liver function (ALT, AST, FA, GGT and glucose). The results of the PT, APTT, antithrombin, platelet counts remained normal in the control group. In animals treated with indomethacin, we observed a significant increase (p <0.001) in fibrinogen levels (637.50  13.19 mg / dL) and this increase reversed by treatment with thalidomide 100.0 mg / kg or 200.0 mg / kg, (381.80  50.79 mg / dL, 389.30  65.13 mg / dL, respectively). Animals that received indomethacin were positive in 100% of the cultures performed for enterobacteria, thus demonstrating the presence of bacteria in the gastrointestinal tract into the peritoneal cavity, probably due to a drug-induced intestinal perforation. The MPO activity in peritoneal fluid of rats given indomethacin (5.0 mg / kg, po, 5d) was significantly higher (1217  341.4 U / mL) compared with the control group (3.33  3, 33 U / mL). Treatment with thalidomide (100 or 200 mg / kg, vo, 5d) significantly reversed this effect (p <0.05), (375.8  149.1 U / mL). As inhibition of 69.2%. The results showed that inflammatory intestinal injury in rats induced by indomethacin was partially reversed by treatment with thalidomide. In addition, the data showed a hepatoprotective effect of thalidomide against indomethacin, by its anti-inflammatory activity that might prevent the increase of fibrinogen and leukocyte recruitment in the liver environment.

CoordenaÃÃo de AperfeiÃoamento de NÃvel Superior / Clostridium difficile à a maior causa de colite associada ao uso de antibiÃticos, com significante morbidade e mortalidade. Glutamina (Gln), um aminoÃcido nÃo-essencial, à a maior fonte combustÃvel para a dinÃmica das cÃlulas intestinais. Alanil-glutamina (Ala-Gln) à um dipeptÃdeo, altamente solÃvel e bem tolerado. O objetivo deste estudo foi analisar as alteraÃÃes induzidas pela toxina A (TcdA) do Clostridium difficile na morfologia e elementos do citoesqueleto das cÃlulas epiteliais intestinais e o efeito do tratamento com Gln e Ala-Gln, utilizando tÃcnicas avanÃadas de microscopia. Placas de cultura de cÃlulas com doze poÃos, previamente acrescidas de lamÃnulas de vidro, com diÃmetro de 13mm, IEC-6, 5x105 foram semeadas e cultivadas por 24 horas em meio DMEM. Depois, as cÃlulas foram incubadas por 24h de acordo com os seguintes grupos: Controle, TcdA (10 ng / mL), TcdA + Gln (10 mM) e TcdA + Ala-Gln (10 mM). As cÃlulas foram fixados em formol a 4% por 14h, depois foram examinados na microscopia de forÃa atÃmica (AFM), microscopia eletrÃnica de varredura (SEM), microscopia confocal e fluorescente. Para o SEM as amostras foram fixadas em porta amostras fita adesiva de carbono e cobertos com uma pelÃcula de ouro 15 mm para adquirir condutividade por pulverizaÃÃo catÃdica. Para microscopia de fluorescÃncia e o confocal, as cÃlulas foram permeabilizadas com PBS/Triton depois foram marcados com RhoA- FITC, Faloidina âRodamina e DAPI e as imagens capturadas atravÃs de um microscÃpio invertido de fluorescÃncia ou confocal. Um immunoblotting foi realizado com os mesmos grupos. A membrana PVDF foi incubada com o anticorpo RhoA overnight, em seguida ativado pelo kit Amershan. O controle protÃico foi feito por &#945;-tubulina. TambÃm realizarmos experimentos de proliferaÃÃo celular e estresse oxidativo. Observou-se que a TcdA causa intenso encolhimento celular restando mÃltiplas extensÃes filamentosas. Esta alteraÃÃo na forma foi associada ao colapso do citoesqueleto de F-actina demonstrada na microscopia de fluorescÃncia. Um aumento da produÃÃo RhoA foi detectada no grupo tratado com Gln e Ala-Gln. Demonstramos que a morfologia das cÃlulas intestinais e organizaÃÃo do citoesqueleto foram dramaticamente alteradas pela TcdA e que a suplementaÃÃo com Ala-Gln e Gln impediu o dano celular epitelial intestinal induzida pela TcdA provavelmente por aumentar a expressÃo RhoA. A TcdA induziu uma reduÃÃo de 8,4% na proliferaÃÃo celular, enquanto o Ala-Gln e Gln aumentou 13,2% e 12,7%, respectivamente. A TcdA induziu as cÃlulas ao dano oxidativo, que foi revertido com o uso de Gln e Ala-Gln. Nossos resultados fornecem justificativa para o uso potencial de Ala-Gln e Gln como terapia adjuvante na doenÃa causada pelo Clostridium difficile. InvestigaÃÃo de alteraÃÃes morfolÃgicas e citoesqueleto usando avanÃadas tÃcnicas de microscopia pode auxiliar na avaliaÃÃo da atividade de proteÃÃo ou terapÃutica de drogas contra os efeitos TcdA. / Clostridium difficile is the major cause of antibiotic-associated colitis, a disease with significant morbidity and mortality. Glutamine (Gln), a non-essential aminoacid, is a major fuel for the dynamic intestinal cell population. Alanyl-glutamine (Ala-Gln) is a dipeptide that is highly soluble and well tolerated. The aim of this study was to analyze the changes induced by Clostridium difficile toxin A (TcdA) in intestinal epithelial cell morphology and cytoskeletal element and the effect of Gln and Ala-Gln treatment, using advanced microscopic techniques. Twelve well cell culture plates, with 13 mm diameter glass coverlids, were seeded with 5x105 IEC-6 cells and grown for 24h in DMEM media. Afterwards, the wells were incubated for 24h as follow: control, TcdA (10 ng/mL), TcdA + Gln (10 mM) and TcdA + Ala-Gln (10 mM). The cells were than fixed in 4% formaldehyde for 14 h and afterwards they were examined by atomic force microscopy (AFM), scanning electronic microscopy (SEM) and Fluorescent microscopy. For the SEM the samples were fixed to samples holders with carbon adhesive tape and covered with a 15 mm gold film for conductivity by sputter. To fluorescent microscopy the cells were permeabilizided with PBS/Triton after that they were marked with stained with FITC-RhoA, Rodhamine-phallodin and DAPI performed using an inverted fluorescence microscope. An immunoblotting was realized with the same groups. The PVDF membrane was incubated with RhoA antibody overnight and afterwards activated by Amershan kit. The proteic control was made by &#945;- tubulin. Also performed experiments of cellular proliferation and oxidative stress. As observed by AFM, SEM and Fluorescent microscopy TcdA caused intense cell shrinkage with multiple extensions. This change in shape was associated with collapse of the F-actin cytoskeleton demonstrated by fluorescent microscopy. An increase of RhoA production was detected in the groups treated with Gln e Ala-Gln. We demonstrated that TcdA dramatically altered the intestinal cell morphology and cytoskeleton organization and that Ala-Gln and Gln supplementation consistently prevented the intestinal epithelial cell damage induced by TcdA probably by increasing RhoA expression. The TcdA induced a reduction of 8.4% in cell proliferation while the Ala-Gln and Gln increased by 13.2% and 12.7%, respectively. The TcdA induced cells to oxidative damage, which was reversed by the use of Gln and Ala-Gln.. Our findings provide rationale for the potential use of Ala-Gln and Gln as adjuvant therapy in Clostridium difficile disease. Investigation of morphological and cytoskeleton changes using advanced microscopic techniques may aid in the evaluation of the protective or therapeutic activity of drugs against TcdA effects.

Conselho Nacional de Desenvolvimento CientÃfico e TecnolÃgico / Previamente, alteraÃÃes circadianas na doenÃa pulmonar obstrutiva crÃnica (DPOC) foram insuficientemente investigadas. Neste trabalho, que consiste em trÃs estudos, foram avaliadas as alteraÃÃes no ritmo vigÃlia-sono; a variaÃÃo circadiana da temperatura oral; a secreÃÃo noturna de melatonina e a concentraÃÃo de cortisol matinal na DPOC estÃvel. Inicialmente, 26 pacientes com DPOC moderada a muito grave (idade mÃdiaÂDP=66,9Â8,5 anos) e 15 controles (idade=63,0Â10,7 anos) foram avaliados por actimetria durante 5-7 dias. Dispneia, funÃÃo pulmonar (espirometria), qualidade do sono (Ãndice de Qualidade do Sono de Pittsburgh, IQSP) e sonolÃncia diurna (Escala de SonolÃncia de Epworth, ESE) foram mensurados. IndivÃduos com DPOC apresentaram maior latÃncia para o sono (p=0.003), atividade noturna (p=0.003) e tempo acordado apÃs inÃcio do sono (p=0.003) e menor tempo total de sono (TTS; p=0.024) e eficiÃncia do sono (p=0.001). Nos pacientes, a dispneia correlacionou-se com atividade no sono (r=0,41; p=0.04) e TTS (r=-0,46; p=0.02). A qualidade do sono foi pior na DPOC (p=0.043). No segundo estudo, a temperatura oral foi medida a cada duas horas, das 4 Ãs 22 horas, em 31 pacientes com DPOC moderada a muito grave (idade=66,3Â6,5anos) e 19 controles (idade=63,6Â5,4anos). Dispneia, qualidade do sono (IQSP), sonolÃncia diurna (ESE), sintomas depressivos (InventÃrio DepressÃo de Beck, BDI-II), fadiga (Escala de Gravidade de Fadiga, EGF), cronotipo (QuestionÃrio de Matutinidade-Vespertinidade, MEQ) e risco de apneia obstrutiva do sono (QuestionÃrio de Berlim) foram avaliados. Pacientes com DPOC apresentaram pior escore do IQSP (p<0.001), do BDI-II (p=0.02) e do EGF (p<0.001). Os valores de temperatura Ãs 4 e 6 horas foram maiores nos pacientes do que nos controles (p=0.001 e p=0.02, respectivamente). Na DPOC, a temperatura Ãs 6 horas correlacionou-se com o IQSP global (p=0.015). No terceiro estudo, 11 pacientes com DPOC moderada a grave (idade=64,4Â8,8 anos) foram avaliados com polissonografia e determinaÃÃo do grau de dispneia, funÃÃo pulmonar, comorbidades (Indice de Comorbidades de Charlson, ICC) e dosagem de cortisol matinal (6 horas). Em sete casos, foi medida a concentraÃÃo de melatonina Ãs 18, 19, 20, 21, 22, 23, 00, 2, 4 e 6 horas. Observou-se prolongamento da latÃncia para o sono REM (118,1Â86,3 min), baixa eficiÃncia do sono (82,9Â11,6%) e elevado Ãndice de despertares (16,3Â8,5/hora). As curvas de secreÃÃo de melatonina mostraram grande variabilidade. Em mÃdia, o pico de melatonina (82,28Â49,4pg/mL) ocorreu Ãs 22 horas. A eficiÃncia do sono correlacionou-se com a concentraÃÃo de melatonina Ãs 20 (p=0.05) e 23 horas (p=0.04) e o TTS com a concentraÃÃo de melatonina Ãs 22 horas (p=0.05). A concentraÃÃo de cortisol Ãs 6 horas (22,08Â5,8 mg /dl) correlacionou-se inversamente com o Ãndice de despertares (p=0.04). Em conclusÃo, pacientes com DPOC estÃvel apresentam alteraÃÃes do sono avaliados por actimetria, associada ao grau de dispneia. O ritmo da temperatura oral na DPOC està alterado, com temperaturas mais elevadas no inÃcio da manhÃ, o que pode estar relacionado a alteraÃÃes do sono. O padrÃo de secreÃÃo de melatonina na DPOC à bastante variÃvel. Os nÃveis de cortisol matinal e a concentraÃÃo de melatonina Ãs 20, 22 e 23 horas associam-se a alteraÃÃes do sono nestes pacientes. / Previously, circadian alterations in chronic obstructive pulmonary disease (COPD) have been insufficiently investigated. In this work, consisting of three studies, we evaluated the impairments in sleep-wake rhythm, the circadian variation of oral temperature, the nocturnal melatonin secretion and morning cortisol concentration in patients with stable COPD. Initially, 26 patients with moderate to very severe COPD (mean age  SD = 66.9  8.5 years) and 15 controls (age = 63.0  10.7 years) were evaluated by actigraphy for 5-7 days. Dyspnea, lung function (spirometry), sleep quality (Pittsburgh Sleep Quality Index, PSQI) and daytime sleepiness (Epworth Sleepiness Scale, ESS) were measured. Individuals with COPD showed increased sleep latency (p = 0.003), mean nocturnal activity (p = 0.003), and wake after sleep onset (p = 0.003). Furthermore, they presented reduced total sleep time (TST, p = 0.024) and lower sleep efficiency (p = 0.001). In patients, severity of dyspnea was correlated with activity levels during sleep (r = 0.41, p = 0.04) and with TST (r = -0.46, p = 0.02). Subjective sleep quality was poorer in patients than controls (p = 0.043). In the second study, oral temperature was measured every two hours, from 4:00 a.m to 10:00 p.m, in 31 patients with moderate to very severe COPD (age = 66.3  6.5 years) as well as in 19 controls (age = 63.6  5.4 years). Dyspnea, sleep quality (PSQI), daytime sleepiness (ESS), depressive symptoms (Beck Depression Inventory, BDI-II), fatigue (Fatigue Severity Scale, FSS), chronotype (morningness-eveningness Questionnaire, MEQ) and risk of sleep apnea (Berlin Questionnaire) were evaluated. COPD patients showed worse PSQI global score (p<0.001), BDI-II (p = 0.02) and FSS (p <0.001). Mean temperature at 4:00 a.m and 6:00 a.m were higher in patients than in controls (p = 0.001 and p = 0.02, respectively). In the COPD group, the temperature at 6:00 a.m was correlated with the PSQI global score (p = 0.015). In the third study, 11 patients with moderate or severe COPD (age = 64.4  8.8 years) were evaluated with polysomnography, dyspnea, pulmonary function and comorbidities (Charlson Comorbidity Index, CCI) and they had the cortisol levels measured in the morning at 6:00 a.m. The concentration of melatonin was measured at 6:00, 7:00, 8:00, 9:00, 10:00, 11:00 p.m and, 0:00, 2:00, 4:00 and 6:00 a.m in seven cases. It was observed prolongation of REM sleep latency (118.1  86.3 min), lower sleep efficiency (82.9  11.6%) and elevated arousal index (16.3  8.5 / h). The curves of melatonin secretion showed great variability. On average, the peak of melatonin (82.28  49.4 pg / ml) occurred at 10:00 p.m. Sleep efficiency was correlated with the concentration of melatonin at 8:00 p.m (p = 0.05) and 11:00 p.m (p = 0.04) and the TST with melatonin concentration at 10:00 p.m (p = 0.05). The cortisol concentration at 6:00 a.m (22.08  5.8 mg /dl) were correlated inversely with the arousal index (p = 0.04). In conclusion, clinically stable COPD patients presented sleep alterations assessed by actigraphy, associated with the degree of dyspnea. The rhythm of oral temperature was altered in COPD, with higher temperatures in the early morning, and this may be related to sleep disturbances. The pattern of melatonin secretion in COPD is variable. Cortisol morning levels and melatonin concentration measured at 8:00, 10:00 and 11:00 p.m are associated with changes in the sleep pattern of these patients.