Leishmania braziliensis is the main causative agent of cutaneous leishmaniasis in Brazil and despite its importance for public health, there is a lack of an experimental model that can be used for testing new therapies and vaccines. The aim of this study was to investigate the influence of parasite burden and the inoculation site in the immunopathogenesis of cutaneous leishmaniasis caused by Leishmania braziliensis in hamsters using ear dermis infection model. Groups of animals (n = 48) were infected intradermally in the ear (n = 24) or paw (n = 24) with 105 promastigotes of L. braziliensis. Afterwards, other groups of animals (n=32) were infected intradermally in the ear with 105 (n=16) or 106 (n=16) promastigotes. The lesions were measured every 5 days for 60 days. The animals were euthanized at 30, 45 and 60 d.p.i., and had their infected ears and paws, as well as lymph nodes (retromaxilar or popliteal), livers and spleens collected for evaluation of parasite burden and expression of inflammatory mediators, and analysis of histopathological changes. The lesions arose at 20 d.p.i. both paw and ear. The ear lesions ulcerated and were bigger (p< 0.0001) in contrast to paw lesions that presented themselves as small nodules without ulcers. It was observed significant parasitic burden in the ear after 30, 40 and 60 d.p.i. at the lesion and in the lymph node, with parasite burden being always bigger at the lesion. Regardless of the route of inoculation, neither liver and spleen were enlarged nor had lumps or parasites. In the retromaxillary lymph node, it was observed a greater expression of inflammatory cytokines IFN- ɣ, TNF- α and IL -6 and the enzyme arginase, 30 and 60 d.p.i., and it was corroborated by histological changes observed in the ear, intenser inflammatory process and chronicity of the disease. On the contrary, the popliteal lymph node (paw) presented a combination of pro and anti-inflammatory cytokines indicating a precocious regulation of immune and inflammatory response. It was also observed that the bigger the inoculum, the more intense the inflammatory response and bigger the lesions, however, without parasite dissemination to the liver and spleen, indicating lesser systemic commitment and increased survival time of the animal. In short, the data indicates that the inoculum of 105 parasites through the ear dermis infection model could make easier the visualization of a possible protective effect of new drugs or vaccine candidates. / Leishmania braziliensis à o principal agente causador de leishmaniose cutÃnea no Brasil, e apesar de sua importÃncia para a SaÃde PÃblica, hà carÃncia de um modelo experimental que possa ser usado para testar novas terapias e vacinas. O objetivo deste estudo foi investigar a influÃncia da carga parasitÃria e do sÃtio de inoculaÃÃo na imunopatogÃnese da leishmaniose cutÃnea causada por Leishmania braziliensis em hamster no modelo de infecÃÃo na derme da orelha. Grupos de animais (n=48) foram infectados por via intradÃrmica, na orelha (n=24) ou na pata (n=24), com 105 promastigotas de L. braziliensis. Em seguida, outros grupos de animais (n=32) foram infectados por via intradÃrmica na orelha, com 105 (n=16) ou 106 (n=16) promastigotas. As lesÃes foram medidas a cada 5 dias por 60 dias. Os animais foram eutanasiados com 30, 45 e 60d.p.i, e coletados a orelha e pata infectada, linfonodos (retromaxilar ou poplÃteo), fÃgado e baÃo, para a avaliaÃÃo da carga parasitÃria, expressÃo de mediadores inflamatÃrios e anÃlise das alteraÃÃes histopatolÃgicas. As lesÃes surgiram com 20d.p.i., tanto na pata como na orelha. As lesÃes na orelha ulceraram e foram maiores (p<0,0001) ao contrÃrio das lesÃes da pata, que se apresentaram como pequenos nÃdulos, sem Ãlceras. Na orelha foi observada significante carga parasitÃria apÃs 30, 40 e 60d.p.i., tanto na lesÃo como no linfonodo, sendo a carga parasitÃria sempre maior na lesÃo. Independente da via de inoculaÃÃo, o fÃgado e baÃo nÃo estavam aumentados, nÃo apresentavam nÃdulos e nem parasitos. No linfonodo retromaxilar, observou-se uma maior expressÃo das citocinas inflamatÃrias IFN-ɣ, TNF-α e IL-6 e da enzima arginase, com 30 e 60d.p.i., e isso foi corroborado com as alteraÃÃes histolÃgicas observadas na orelha, processo inflamatÃrio mais intenso e cronicidade da doenÃa. Ao contrÃrio, no linfonodo poplÃteo (pata), apresentou um misto de citocinas inflamatÃrias e anti-inflamatÃrias, sugerindo uma regulaÃÃo bem precoce da resposta imunolÃgica e inflamatÃria. Observou-se tambÃm que quanto maior o inÃculo, mais intensa a resposta inflamatÃria e maiores as lesÃes, entretanto, sem disseminaÃÃo do parasito para fÃgado e baÃo, sugerindo menor comprometimento sistÃmico e maior tempo de sobrevida para o animal. Em suma, os dados indicam que o inÃculo de 105 parasitos no modelo de infecÃÃo na orelha poderia facilitar a visualizaÃÃo de um possÃvel efeito protetor de novos fÃrmacos ou candidatos vacinais.
| Identifer | oai:union.ndltd.org:IBICT/oai:www.teses.ufc.br:10705 |
| Date | 22 February 2016 |
| Creators | Francisco Rafael Marciano Fonseca |
| Contributors | Maria Jania Teixeira, Josà Ajax Nogueira Queiroz, Eddie William de Pinho Santana, Ãrika Freitas Mota |
| Publisher | Universidade Federal do CearÃ, Programa de PÃs-GraduaÃÃo em Patologia, UFC, BR |
| Source Sets | IBICT Brazilian ETDs |
| Language | Portuguese |
| Detected Language | English |
| Type | info:eu-repo/semantics/publishedVersion, info:eu-repo/semantics/masterThesis |
| Format | application/pdf |
| Source | reponame:Biblioteca Digital de Teses e Dissertações da UFC, instname:Universidade Federal do Ceará, instacron:UFC |
| Rights | info:eu-repo/semantics/openAccess |
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