Made available in DSpace on 2015-12-06T23:04:00Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2003 / Introdução: O Herpes simples labial recorrente e um problema de Saúde publica devido a sua elevada prevalencia. Provoca absenteismo ao trabalho e a escola, podendo estigmatizar o individuo, e evoluir para formas mais graves, como a ceratite. Os tratamentos ate agora desenvolvidos baseiam-se em antivirais, que demonstram efeitos na diminuicao da sintomatologia, no entanto, nao prevenindo as recidivas. A vacina Sabin, utilizada na prevencao de poliomielite, possui a capacidade de aumentar a imunidade atraves dos anticorpos especificos por meio dos CTLs (linfocitos T citoliticos) e potencialmente poderia ser utilizada na imunoprofilaxia de herpes simples labial recorrente. Objetivos: Estabelecer a seguranca e eficacia da utilizacao da vacina Sabin na imunoprofilaxia de Herpes simples labial recorrente. Tipo de Estudo: Ensaio clinico controlado randomizado, duplo cego. Local: Ambulatorio de Dermatologia e Pronto Atendimento do Hospital São Paulo. Amostra: pacientes de ambos os sexos, maiores de 18 anos, que apresentem mais de quatro episodios ao ano, por no minimo tres anos, de herpes simples labial, excluindo gestantes e imunodeficientes. Intervencao: administracao de vacina Sabin em duas doses com intervalo de 1 mes. Tempo de seguimento: 1 ano Desfechos clinicos: 1-Diminuicao dos eventos de herpes simples labial; 2Diminuicao da intensidade das crises herpeticas. Analise de dados: O tamanho da amostra foi calculado em 100 (a,=0,05; 0=0,1) pacientes para cada grupo, considerando-se uma melhora de 10 por cento no grupo placebo e poder estatistico para detectar melhora de 30 por cento no grupo intervencao, em relacao ao placebo. A analise sera realizada por intencao de tratamento, com a utilizacao do teste de qui-quadrado e diferenca de risco absisco absovariaveis dicotomicas e teste-t para as continuas, com nivel de significancia para o erro alfa de 5 por cento, intervalo de confianca de 95 por cento / BV UNIFESP: Teses e dissertações

Trata-se de um estudo sobre o impacto da introdução da vacina contra influenza no perfil de morbimortalidade por pneumonias na população acima de 65 anos, em Porto Alegre, no período de 1995 a 2001. Associado ao estudo da série histórica, investigamos os motivos de adesão ou recusa à prática de vacinação contra influenza entre 138 idosos. Aprofundamos a análise das concepções do processo saúde-doença e das práticas preventivas em saúde com um grupo de 30 idosos usuários do sistema público de saúde. A metodologia utilizada é de caráter epidemiológico do tipo série temporal, combinando entrevistas com idosos e categorização temática das informações obtidas. Os dados de morbidade foram obtidos pela pesquisa documental estatística, a partir dos dados de internação hospitalar do Sistema Único de Saúde (Tabwin) e os dados de mortalidade foram obtidos a partir do Sistema de Informação em Mortalidade (SIM). Os resultados apontam um comportamento de tendência à queda na morbidade, através das internações hospitalares e na mortalidade por pneumonias, após a introdução regular da vacina contra influenza em nosso meio no ano de 1999. Particularizando a adesão ou recusa à prática de vacinação, os idosos demonstram que fatores culturais e sociais influenciaram suas decisões. Os idosos que participaram deste estudo também revelaram que é fundamental a manutenção de uma atividade física, intelectual ou laboral para um envelhecimento saudável. Os resultados deste estudo, acredita-se, contribuem para o aperfeiçoamento das práticas de promoção em saúde através da educação em saúde e da adoção de medidas de proteção específica como a vacinação com eficácia e credibilidade junto à população.

Staphylococcus aureus resistente à meticilina (SARM) é um dos principais patógenos responsáveis pela infecção nosocomial e recentemente tem sido isolada fora do ambiente hospitalar, trazendo uma grande preocupação a médicos e pesquisadores. Esta resistência à meticilina é devida à presença do gene mecA, o qual codifica a PLP2a, uma proteína ligadora de penicilina, que tem baixa afinidade pelos antibióticos β-Lactâmicos. A vancomicina, até recentemente, era o tratamento de escolha para pacientes acometidos pela SARM; porém o isolamento de cepas com resistência intermediária e S. aureus totalmente resistentes à vancomicina, gerou uma grande mobilização da comunidade científica na busca de alternativas para o tratamento destas cepas multirresistentes, através do desenvolvimento de vacinas e soroterapia. A vacina de DNA é uma técnica recente que, entre outras vantagens, não necessita da purificação do antígeno protéico para induzir uma resposta imune, diminuindo o custo de produção, quando comparada às vacinas protéicas. Neste trabalho, demonstramos que a utilização de uma vacina de DNA com um fragmento do gene mecA produz uma resposta imune humoral, com a produção de anticorpos específicos anti-PLP2a em eqüinos imunizados com esta vacina, e que estes anticorpos, após sua purificação, permanecem ativos. Como ainda não existe informação suficiente em relação à segurança do uso das vacinas de DNA diretamente em humanos, o uso desta técnica em eqüinos, com o objetivo de gerar um soro hiperimune, para utilizá-lo após sua purificação no tratamento de pacientes acometidos com infecção provocada por SARM, poderia ser uma alternativa viável e segura no combate a esta bactéria resistente a quase todos agentes antimicrobianos. / Methicillin-resistant Staphylococcus aureus (MRSA) is one of the major pathogens responsible for nosocomial infection and has been recently isolated outside the hospital environment, causing a great concern to physicians and researchers. This methicillinresistance is due to the presence of the mecA gene, which codes for PBP2a, a penicillinbinding protein, which has low affinity for β-Lactamic antibiotics. The treatment of choice for patients afflicted by MRSA was, until recently, vancomicyn; however the isolation of vancomycin-intermediate and resistant S. aureus strains generated a great mobilization of the scientific community for the search of alternatives for the treatment of these multiresistant strains, such as, for example vaccines and soroterapy. The DNA vaccine is a recent method that, among others, does not require the purification of the of the proteic antigen to induce a immune response, reducing production costs as compared to protein vaccines. In the present study we demonstrated that the use of a DNA vaccine with a fragment of the mecA gene produces an humoral immune response, with the production of anti-PBP2a specific antibodies in horses immunized with this vaccine, and these antibodies, once purified, maintain their activity. Since there is not sufficient information about the safety of DNA vaccines used directly to humans, the use of this vaccine in horses, with the intent of generating an hyperimmune serum to be used after its purification in the treatment of patients afflicted with infection caused by MRSA could be a possible and safe alternative to fight this bacteria resistant to almost all antimicrobial agents.

Submitted by Pós Imunologia (ppgimicsufba@gmail.com) on 2017-03-14T18:43:49Z No. of bitstreams: 1 Dissertação de mestrado - Camila Souza Costa.pdf: 2943001 bytes, checksum: cc096544f2a0450b2e09b6d33d5f595e (MD5) / Approved for entry into archive by Delba Rosa (delba@ufba.br) on 2017-04-24T13:03:51Z (GMT) No. of bitstreams: 1 Dissertação de mestrado - Camila Souza Costa.pdf: 2943001 bytes, checksum: cc096544f2a0450b2e09b6d33d5f595e (MD5) / Made available in DSpace on 2017-04-24T13:03:51Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Dissertação de mestrado - Camila Souza Costa.pdf: 2943001 bytes, checksum: cc096544f2a0450b2e09b6d33d5f595e (MD5) / capes / Introdução: As infecções pneumocócicas são as principais causas de mortalidade e morbidade infantil em todo o mundo. Ainda não há resultados conclusivos sobre a imunogenicidade da vacina pneumocócica 10-valente (PCV10), recomendada pelo Programa Nacional de Imunizações, em crianças com risco aumentado para doenças infecciosas. Objetivo: O principal objetivo deste estudo foi avaliar a resposta imune de anticorpos IgG contra os sorotipos presentes na PCV10. Materiais e Métodos: O estudo foi conduzido no Centro de Referência de Imunobiológicos Especiais (CRIE/UFBA) e no 16º Centro de Saúde. Foram incluídas, 13 crianças (Grupo 1) com diagnóstico de alguma patologia ou imunodeficiência (idade = 2,0 meses, IQR 2,0 - 2,5) e 30 crianças saudáveis (Grupo 2) (idade = 2,0 meses, IQR 2,0 - 2,0). Todas as crianças foram imunizadas com 4 doses da vacina e as amostras de sangue foram coletadas das mesmas, antes da 1ª e 4ª imunizações (T1 e T4) para medir a concentração de IgGs sorotipo-específicos. Foi realizado um ELISA indireto, utilizando a PCV10 como antígeno. Soros das crianças, controle de referência positivo (007sp) e controles negativos foram misturados com um absorvente contendo polissacarídeos capsulares C e 22F para remover os anticorpos não específicos contra antígenos bacterianos comuns. Resultados: Verificou-se que, no Grupo 1, 12/13 (92%) das crianças possuíam anticorpos IgG maiores que o ponto de corte de 1,022 ng/mL (mediana = 10,8 ng/mL, IQR = 3,0 - 18,5 ng/mL). Além disso, da 1ª para 4ª dose houve um aumento de 22 vezes na mediana (P= 0,0002). No Grupo 2, 29/30 (97%) tiveram uma resposta satisfatória acima do ponto de corte (mediana = 16,0 ng/mL, IQR = 7,3-35,6 ng/mL) e um aumento de 53 vezes na mediana (p<0,0001) da 1ª para 4ª dose. Com relação às imunoglobulinas, no Grupo 1, 38,5% (5/13) das crianças apresentaram IgM diminuída e 23% (3/13) tinham IgG inferior ao valor de referência. Todavia, no Grupo 2, 6,7% (2/30) das crianças apresentaram níveis de IgG abaixo do valor preconizado. Conclusões: Crianças portadoras de doenças crônicas e/ou imunodeficiências apresentam títulos de anticorpos contra os sorotipos vacinais favoráveis e equivalentes aos títulos de anticorpos anti-PCV10 em crianças imunocompetentes. / Introduction: Pneumococcal infections are the main causes of child mortality and morbidity worldwide. There is still no conclusive results on the immunogenicity of 10-valent pneumococcal vaccine (PCV10), recommended by the National Immunization Program, in children at increased risk for infectious diseases. Objective: The main aim of this study was to evaluate the immune response of IgG antibodies against serotypes in PCV10. Materials and Methods: The study was conducted with children enrolled in the Reference Center of Special Immunobiologicals (CRIE/UFBA) and at 16th Health Center. Were included, 13 children (Group 1) diagnosed with some disease or immunodeficiency (age = 2.0 months, IQR 2.0 - 2.5) and 30 healthy children (Group 2) (age = 2.0 months, IQR 2.0 - 2.0). All children were immunized with four doses of the vaccine and blood samples were collected from these children before the first and fourth immunization (T1 and T2) to measure serotype-specific IgG concentrations. An indirect ELISA was performed using the PCV10 as antigen. Child serum samples, positive serum (007sp) and negative reference sera were mixed before analysis with an absorbent containing C and 22F capsular polysaccharide to remove non-specific antibodies against bacterial common antigens. Results: It was found that, in Group 1, 12/13 (92%) children had higher IgG antibodies than the cutoff of 1,022 ng/mL (median = 10.8 ng/mL, IQR = 3.0 - 18.5 ng/ml). In addition, from the first to fourth dose there was an increase of 22 times in the median (p = 0.0002). In Group 2, 29/30 (97%) had a satisfactory response above the cutoff (median = 16.0 ng / mL, IQR = 7.3 - 35.6 ng/mL) and an increase of 53 times in the median (p = 0.0001) from the first to fourth dose. Regarding immunoglobulins, in Group 1, 38.5% (5/13) of the children had decreased IgM and 23% (3/13) had IgG below the reference value. However, in Group 2, 6.7% (2/30) of the children had IgG levels below the recommended value. Conclusions: Children with chronic diseases and/or immunodeficiency may have antibody titers against vaccine serotypes, favorable and equivalent to the titers of PCV10 anti-antibodies in immunocompetent children.

Made available in DSpace on 2014-05-29T12:18:46Z (GMT). No. of bitstreams: 4 license.txt: 1748 bytes, checksum: 8a4605be74aa9ea9d79846c1fba20a33 (MD5) 69441.pdf: 2989051 bytes, checksum: 8e1f78fb34fb10ed6a62ddab3e860e85 (MD5) 69441.pdf.txt: 252167 bytes, checksum: fa3f048c557c5ecc17e4f0b7176dacb5 (MD5) 69441.pdf.jpg: 1240 bytes, checksum: f1b121f954ab809e4e361e03e07c42ac (MD5) Previous issue date: 2014-05-07 / Fundação Oswaldo Cruz. Instituto Oswaldo Cruz. Rio de Janeiro, Brasil / O gênero Mycobacterium possui mais de 160 espécies, dentre elas importantes patógenos como M. leprae, M. tuberculosis e M. bovis. Embora muito se conheça sobre estes patógenos, poucos estudos se concentraram na caracterização detalhada de micobactérias não-tuberculosas (MNT), que apresentam distribuição ambiental variada e são oligotróficas. Embora muitas sejam consideradas saprófitas, acredita-se que a infecção sub-clínica de animais e humanos esteja subestimada. A infecção por MNT ambientais é considerada como um dos fatores que modulam a resposta protetora conferida pela vacina BCG. Neste contexto, o presente estudo tem como foco a caracterização das MNT de crescimento rápido provenientes da Coleção de Bactérias da Mata Atlântica (CBMA) do IOC/FIOCRUZ, com dois objetivos principais: (1) caracterizar espécies que possam ser utilizadas no desenvolvimento de um novo sistema de expressão de proteínas heterólogas e (2) identificar antígenos e vias metabólicas compartilhadas entre espécies patogênicas e saprófitas. Os isolados obtidos da CBMA/IOC foram cultivados em meios LB contendo Tween 80, sob agitação a 25 °C. Foram geradas curvas de crescimento a partir da leitura da DO a 600 nm de triplicatas biológicas, e determinadas características morfológicas. Diversos testes bioquímicos foram realizados para uma melhor caracterização desses isolados O perfil de secreção de proteínas ao longo do crescimento foi verificado por SDS-PAGE, a presença de proteases secretadas avaliada por zimografia e a presença e atividade de celulases foi verificada através de western blot, zimografia e ensaio enzimático. A capacidade de transformação por DNA plasmidial foi avaliada por eletroporação. Também foram propostos agrupamentos filogenéticos com base na análise de sequências de regiões dos genes 16S rRNA (rrs) e hsp65. Em paralelo, foi verificada por western blot a presença de antígenos micobacterianos comuns, já descritos como tendo papel importante na geração de resposta imune (Mpt64, Mpt70, Mpt83 e antígenos do complexo 85) ou no metabolismo e sobrevivência do M. tuberculosis (GlnA1 e HspX). O perfil de crescimento e as características morfológicas e bioquímicas dos isolados parecem confirmar o agrupamento filogenético proposto. Atividade celulásica foi observada em apenas dois isolados, apesar de todos expressarem esta proteína, e não foi encontrada atividade proteásica no filtrado de cultura nas condições testadas Todos os isolados são transformáveis, mas apresentam diferenças quanto à eficiência e integridade do vetor. As análises por western blot revelaram a presença de proteínas do complexo 85, Mpt70 e GlnA1 e ausência de reatividade para os antígenos Mpt64, Mpt83 e HspX. Desse modo, três isolados foram selecionados para prosseguir com o desenvolvimento do novo sistema de expressão de proteínas heterólogas secretadas. A presença de alguns antígenos compartilhados fornecem novos subsídios para elucidar a relação entre MNT e vacina BCG / The genus Mycobacterium has more than 160 species, among them important pathogens such as M. leprae, M. tuberculosis and M. bovis. Although much is known about these pathogens, few studies have focused on the detailed characterization of non-tuberculous mycobacteria (NTM), which present wide environmental distribution and are oligotrophic. While many are considered saprophytes, it is believed that the subclinical infection of humans and animals is underestimated. The environmental NTM infection is considered as one of the factors that modulate the protective response provided by BCG vaccine. In this context, the present study focuses on the characterization of rapidly growing MNT from the Atlantic Forest Bacterial Collection (CBMA - Coleção de Bactérias da Mata Atlântica, IOC / FIOCRUZ), with two main objectives: (1) characterize species which may be used to develop a new system for heterologous protein expression and (2) to identify antigens and metabolic pathways shared between pathogenic species and saprophytes. The isolates obtained from CBMA/IOC were grown in LB media containing Tween 80, under agitation, at 25 °C. Growth curves were generated from the reading of the OD at 600 nm of biological triplicates, and certain morphological characteristics were determined. Several biochemical tests were performed to better characterize these isolates. The profile of secreted proteins was verified by SDS-PAGE along the growth curves, the presence of secreted proteases evaluated by zymography and the presence and activity of cellulases was verified by western blot, enzymatic assay and zymography. The transformation capacity of the individual isolates was evaluated by electroporation of plasmid DNA. Phylogenetic groupings were also proposed based on sequencing of regions from the 16S rRNA (rrs) and hsp65 genes. In parallel, the presence of shared mycobacterial antigens described as playing important roles in generating immune responses (Mpt64, Mpt70, Mpt83 and antigen 85 complex) or in metabolism and survival of M. tuberculosis, was verified by western blot. The growth profile and the morphological and biochemical characteristics of the isolates appear to confirm the phylogenetic grouping proposed. Cellulase activity was observed in only two strains, although all express this protein; protease activity was not found in the culture filtrate under the conditions tested. All isolates are transformable, but differ as to the efficiency and integrity of the vector. Western blot analysis revealed the presence of Ag85 complex, Mpt70 and GlnA1 and absence of reactivity for the Mpt64 and Mpt83 antigens as well as HspX. Thus, three isolates were selected to proceed with the development of a new heterologous protein expression system. The presence of some shared antigens provide new information to elucidate the relationship between NTM and BCG vaccine.

Trata-se de um estudo sobre o impacto da introdução da vacina contra influenza no perfil de morbimortalidade por pneumonias na população acima de 65 anos, em Porto Alegre, no período de 1995 a 2001. Associado ao estudo da série histórica, investigamos os motivos de adesão ou recusa à prática de vacinação contra influenza entre 138 idosos. Aprofundamos a análise das concepções do processo saúde-doença e das práticas preventivas em saúde com um grupo de 30 idosos usuários do sistema público de saúde. A metodologia utilizada é de caráter epidemiológico do tipo série temporal, combinando entrevistas com idosos e categorização temática das informações obtidas. Os dados de morbidade foram obtidos pela pesquisa documental estatística, a partir dos dados de internação hospitalar do Sistema Único de Saúde (Tabwin) e os dados de mortalidade foram obtidos a partir do Sistema de Informação em Mortalidade (SIM). Os resultados apontam um comportamento de tendência à queda na morbidade, através das internações hospitalares e na mortalidade por pneumonias, após a introdução regular da vacina contra influenza em nosso meio no ano de 1999. Particularizando a adesão ou recusa à prática de vacinação, os idosos demonstram que fatores culturais e sociais influenciaram suas decisões. Os idosos que participaram deste estudo também revelaram que é fundamental a manutenção de uma atividade física, intelectual ou laboral para um envelhecimento saudável. Os resultados deste estudo, acredita-se, contribuem para o aperfeiçoamento das práticas de promoção em saúde através da educação em saúde e da adoção de medidas de proteção específica como a vacinação com eficácia e credibilidade junto à população.

Submitted by Ana Maria Fiscina Sampaio (fiscina@bahia.fiocruz.br) on 2012-05-31T19:55:30Z No. of bitstreams: 1 Adenizar Chagas Júnior. O Imprint como método para detecção de Leptospira SSP. 2009.pdf: 396164 bytes, checksum: 8f423288d4f795e861df22e9de3acb59 (MD5) / Made available in DSpace on 2012-05-31T19:55:30Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Adenizar Chagas Júnior. O Imprint como método para detecção de Leptospira SSP. 2009.pdf: 396164 bytes, checksum: 8f423288d4f795e861df22e9de3acb59 (MD5) Previous issue date: 2009 / Fundação Oswaldo Cruz. Centro de Pesquisas Gonçalo Moniz. Salvador, Bahia, Brasil / Na determinação da eficácia de novas candidatas à vacina para leptospirose, o marcador primário considerado é a mortalidade, e um marcador secundário importante é a indução de uma imunidade estéril. Entretanto, a avaliação da imunidade estéril é dificultada pelo tempo demandado e pela complexidade de métodos como o isolamento pela cultura. Neste estudo, foi avaliado o uso do método do imprint (ou touch preparation) na detecção da presença de leptospiras em tecidos de hamsters infectados com L. interrogans sorovar Copenhageni. Comparado com a cultura, o imprint demonstrou igual ou melhor detecção de leptospiras em amostras de rim, fígado, pulmão e sangue coletadas após a infecção obtendo uma concordância geral boa (κ = 0.61). Além disso, na avaliação de hamsters imunizados com uma proteína recombinante de Leptospira candidata à vacina e subsequente desafio com leptospiras patogênicas, a concordância entre a cultura e o imprint foi alta (κ = 0.84). Estes achados indicam que o imprint é um método rápido para a observação direta de Leptospira spp. e que pode ser facilmente aplicado na avaliação de animais infectados experimentalmente com leptospiras e na determinação de imunidade esterilizante durante avaliações de potenciais candidatas à vacina. / In determining the efficacy of new vaccine candidates for leptospirosis the primary endpoint is death and an important secondary endpoint is sterilizing immunity. However, evaluation of this endpoint is often hampered by the time consuming demands and complexity of methods such as culture isolation (CI). In this study, we evaluated the use of an imprint (or touch preparation) method (IM) in detecting the presence of leptospires in tissues of hamsters infected with L. interrogans serovar Copenhageni. Compared to CI, the IM exhibited equal or improved detection of leptospires in kidney, liver, lung and blood samples collected post-infection and the overall concordance was good (κ = 0.61). Furthermore, in an evaluation of hamsters immunized with a recombinant Leptospira protein-based vaccine candidate and subsequently challenged with leptospires, the agreement between the CI and IM was very good (κ = 0.84). These finding indicate that the IM is a rapid method for the direct observation of Leptospira spp. that can be readily applied to evaluating Leptospira infection in experimental animals and determining sterilizing immunity when screening potential vaccine candidates.

Made available in DSpace on 2012-09-05T18:24:02Z (GMT). No. of bitstreams: 2 license.txt: 1748 bytes, checksum: 8a4605be74aa9ea9d79846c1fba20a33 (MD5) 76.pdf: 4173481 bytes, checksum: 699ca3750b8427fb6e2992dce60cf6c6 (MD5) Previous issue date: 2001 / A tuberculose permanece como grave problema de saúde pública no Brasil. Atinge níveis preocupantes em certos segmentos sociais, como é o caso dos povos indígenas. O objetivo é desenvolver um estudo sobre a epidemiologia da tuberculose entre a populaçäo Pakaánova, de Rondônia. Para tanto, contou com duas abordagens principais: primeiramente, a análise epidemiológica dos registros constantes do banco de dados do Programa Estadual de Controle da Tuberculose em Rondônia, buscando resgatar o perfil da doença entre grupos indígenas, os quais säo socialmente mais vulneráveis e exibem problemáticas distintas quanto ao controle da doença. Foram conduzidas análises estatísticas descritivas e multivariada multinominal dos casos notificados em 1992 e entre 1994 e 1998, buscando identificar fatores relacionados à ocorrência de óbito, abandono do tratamento e ausência de informaçäo. Foram identificadas associaçöes entre variáveis relativas à doença, ao serviço de saúde e aos resultados do tratamento. Há indícios de que as populaçöes indígenas de Rondônia apresentam riscos de adoecer e morrer superiores aos dos demais habitantes do Estado. Chama-se a atençäo para a necessidade de implementaçäo de medidas de prevençäo e controle voltados especificamente para a realidade dos povos indígenas. Em segundo lugar, foi desenvolvida investigaçäo em três aldeias Pakaánova, quando foram avaliadas as condiçöes gerais de saúde e nutriçäo, realizada vacinaçäo BCG e desenvolvido inquérito tuberculínico. Através da análise das notificaçöes de casos feitas ao PCT-RO e de registros existentes na Casa de Saúde do Indio de Guajará Mirim e nos postos de saúde das aldeias estudadas foi identificada a incidência da doença e suas relaçöes com procedimentos de controle, especialmente os relacionados com a vacinaçäo BCG, tendo sido identificado efeito protetor entre BCG e tuberculose, em especial nas crianças. Quanto à vacinaçäo, foi analisada a cobertura vacinal obtida pelos serviços de saúde entre a populaçäo das aldeias estudadas, próximas a 100 por cento. Além disto, através da realizaçäo de teste tuberculínico, buscou-se identificar que características da populaçäo estudada säo determinantes para que determinados indivíduos reajam ao PPD. Conclui-se que o PPD, mesmo diante de altas coberturas vacinais com BCG, é uma ferramenta importante na identificaçäo de casos de doenças entre os Pakaánova.

Made available in DSpace on 2016-03-28T12:41:00Z (GMT). No. of bitstreams: 2 diego_cambuy_ioc_mest_2014.pdf: 2689625 bytes, checksum: 9a0d86cf1fe73771c946b0bd687aec4b (MD5) license.txt: 1748 bytes, checksum: 8a4605be74aa9ea9d79846c1fba20a33 (MD5) Previous issue date: 2015-04-14 / Fundação Oswaldo Cruz. Instituto Oswaldo Cruz. Rio de Janeiro, RJ, Brasil / A coqueluche, ou pertússis, é uma doença do trato respiratório causada principalmente pela bactéria Bordetella pertussis. Após 50 anos de vacinação, pertussis reemergiu, passando a ser a doença imunoprevinível mais frequente mesmo em países desenvolvidos. Várias são as hipóteses para a reemergência de pertússis, uma delas é a adaptação do patógeno frente à vacinação. Linhagens contemporâneas de B. pertussis diferem de linhagens do período pré-vacinal, especialmente em genes codificadores de proteínas usadas na produção de vacinas acelular. Esta re-emergência também tem sido observada no Brasil, assim, realizamos a caracterização genética por MLST baseado nesses genes, de 26 isolados B. pertussis de surtos de três regiões brasileiras (Norte, Sul e Nordeste). Foram identificados dois perfis alélicos, em 24 isolados: prn2-ptxS1A-fim3B-ptxP3, de surtos (2008-2013) de Alagoas, Pernambuco e Rio Grande do Sul - e o perfil prn2-ptxS1A-fim3A-ptxP3 , em dois isolados de Pará/2004. Análises filogenéticas agruparam esses perfis com isolados do período pós vacinal de outras partes do globo. Deste conjunto, três do perfil mais frequente e um do perfil menos frequente, tiveram seus genomas sequenciados na plataforma GS 454 Junior. A comparação desses genomas com outros genomas de B. pertussis disponíveis em dados públicos não identificou SNPs ou genes únicos que caracterizassem os isolados do Brasil Este estudo desenvolveu uma metodologia que permitiu definir a posição da IS481 nos genomas, e uma delas corresponde a um gene relacionado a regulação da transcrição da família MarR, Análise filogenômica, baseada em 826 SNPs, demonstrou que os isolados recentes do Brasil da linhagem pandêmica que presente em todos os continentes, exceto a África. Foi observado também que as relações filogenéticas inferidas pelo MLST são semelhantes àquelas inferidas quando se utiliza o genoma completo, isso denota a pressão seletiva sobre esses genes. Sendo assim, a cepa utilizada na produção da vacina no Brasil, que apresenta o perfil alélico prn1-ptxS1D - fim3A-ptxP2, pode não ser capaz de gerar uma resposta imune protetora frente às linhagens circulantes no país. Este estudo traz, pela primeira vez, informações genéticas e genômicas de isolados de B. pertussis do Brasil, país que apresenta cobertura vacinal bastante heterogênea, que utiliza, oficialmente, a vacina celular, mas que, também, aplica a vacina acelular. As informações reveladas neste estudo podem auxiliar a tomada de ações para o controle de pertússis no Brasil, além do conhecimento sobre epidemiologia e evolução de B. pertussis / Pertussis more commonly referred as whooping cough is respiratory tract disease mainly caused by the bacteria B. pertussis. After 50 years of vaccination pert ussis remerged, becoming the most frequent vaccine preventable disease in developed countries. Many hypotheses have been proposed for the re - emergence of pertussis, one being the pathogen adaptation in a vaccinated environment. Current pertussis strains ar e different than those from the prevaccination era, especially in genes that code for proteins used in acelluar pertussis vaccines. This re - emergence is also observed in Brazil, therefore we characterized 26 isolates from 3 regions of Brazil (North,South,N ortheast) using an MLST approach based on these genes. We identified two allelic profiles, 24 isolates from the states of Rio Grande do Sul (2008 - 2009), Alagoas (2008 - 2009), Pernambuco (2013) and Pará (2004) presented the prn2 - ptxS1A - fim3B - ptxP3 allelic pr ofile, while 2 isolates from Pará (2004) presented the prn2 - ptxS1A - fim3A - ptxP3 allelic profile. Phylogenetic analysis branch these two allelic profiles along with other post vaccination isolates around the globe. Four isolates, three from the dominant prof ile and one from the less frequent profile, had their genomes completed sequenced on the GS 454 Junior Platform. We compared these genomes with others available in public databases and no SNP or unique genes were identified in the Brazilian genomes. This s tudy also developed a methodology that identifies the location of the repetitive region IS481, and what genes it interrupted. One of them was the MarR transcriptional regulator gene. Phylogenomic analysis based on 826 SNPs revealed that Brazilian B. pertus sis lineages are part of the current pandemic linage present in all continents, except Africa. We also observed that phylogenomic relationships are similar to MLST’s. Therefore, strain used for pertussis vaccine in Brazil, that presents the prn1 - ptxS1D - f im3A - ptxP2 allelic profile, might not be able to induce immune response to the current linage circulating in the country. This is the first study with genetic and genomic informations of B. pertussis isolates in Brazil, which is a country with heterogeneou s vaccine coverage and mixed and has both cellular and acellular vaccine administrated to the population. Information brought with this study can help the decision making on the control of pertussis in Brazil and gives new insights on the epidemiology and evolution of B. pertussis

O carrapato Rhipicephalus microplus é um ectoparasito hematófago de grande importância para a pecuária por ser responsável por perdas massivas na produção animal, de forma que o seu controle é economicamente relevante. Este carrapato, além dos danos que causa por si só, é também um importante vetor para a transmissão de microorganismos patogênicos, entre eles o hemoprotozoário intraeritrocítico Babesia bovis. O presente trabalho descreve o desenvolvimento de uma linhagem de B. bovis capaz de expressar um antígeno protetor, uma glutationa S-transferase do carrapato Haemaphysalis longicornis (HlGST), e o teste desta linhagem como uma vacina de vetor vivo para o controle do carrapato R. microplus. B. bovis, em cultivo, da linhagem S74-T3B foram eletroporados em presença de plasmídeo contendo o promotor bidirecional de B. bovis Ef-1 aresponsável pela expressão independente de dois genes: o repórter fusionado ao agente para seleção (GFP-BSD) e HlGST fusionada à sequência codificadora do peptídeo sinal de MSA-1 (merozoite surface antigen-1). Após a eletroporação, foi feita a seleção com blasticidina para obtenção da linhagem nomeada HlGST. A linhagem HlGST é composta por parasitos contendo diferentes padrões de inserção dos genes exógenos, tanto dentro quanto fora do locus Ef-1. Uma linhagem clonal denominada HlGST-Cln expressando HlGST e GFP-BSD foi obtida a partir da linhagem HlGST. Dois ensaios, independentes, de imunização de bovinos com os parasitos clonais foram realizados, sendo usado como controle uma linhagem clonal previamente caracterizada denominada GFP-Cln. Todos os animais inoculados desenvolveram uma forma branda de babesiose, indicando que ambas as linhagens clonais são atenuadas, mas apenas os animais imunizados com a linhagem HlGST-Cln foram capazes de produzir anticorpos anti-HlGST. O segundo procedimento de imunização foi seguido por um desafio com larvas de R. microplus. O desenvolvimento dessas larvas no hospedeiro levou a fêmeas adultas de menor peso e fertilidade. Coletivamente, esses dados mostram a possibilidade de uso de linhagens transfectadas de B. bovis como vacinas de vetor vivo. / The tick Rhipicephalus microplus is a notorious blood-feeding ectoparasite of cattle, responsible for massive losses in animal production. It is the main vector of pathogenic microorganisms, including Babesia bovis, an intraerythrocytic apicomplexan protozoan parasite responsible for bovine babesiosis. This study describes the development and testing of a live B. bovis vaccine expressing the protective tick antigen glutathione S-transferase from Haemaphysalis longicornis (HlGST). The B. bovis S74- T3B parasites were electroporated with a plasmid containing the bidirectional Ef-1 promoter of B. bovis controlling expression of two independent genes, the selectable marker GFP-BSD, and HlGST fused to the MSA-1 (merozoite surface antigen-1) signal peptide from B. bovis. Electroporation followed by blasticidin selection resulted in the emergence of a mixed B. bovis transfected line (termed HlGST) in in vitro cultures, containing parasites with distinct patterns of insertion of both exogenous genes, either in or outside the Ef-1 a locus. A B. bovis clonal line termed HlGST-Cln expressing HlGST and GFP-BSD was then derived from the mixed parasite line HlGST. Two independent calf immunization trials were performed via intravenous inoculation of the HlGST-Cln and a control consisting of an irrelevant transfected clonal line of B. bovis designated GFP-Cln. The control GFP-Cln line contains a copy of the GFP-BSD gene inserted into the Ef-1 locus of B. bovis in an identical fashion as the HIGST-Cln parasites. All animals inoculated with the HlGST-Cln and GFP-Cln transfected parasites developed mild babesiosis indicating that both transfected cloned parasite lines are attenuated. All animals immunized with HlGST-Cln produced detectable anti-glutathione-S-transferase antibodies. After immunization with HlGST-Cln, calves were challenged with R. microplus larva. Development of these larva produce fully engorged female tick with reduced weight and fertility. Collectively, these data show that transfected B. bovis parasites can be used as vectors in live vectored vaccines.