Submitted by Pós Imunologia (ppgimicsufba@gmail.com) on 2017-03-14T18:43:49Z No. of bitstreams: 1 Dissertação de mestrado - Camila Souza Costa.pdf: 2943001 bytes, checksum: cc096544f2a0450b2e09b6d33d5f595e (MD5) / Approved for entry into archive by Delba Rosa (delba@ufba.br) on 2017-04-24T13:03:51Z (GMT) No. of bitstreams: 1 Dissertação de mestrado - Camila Souza Costa.pdf: 2943001 bytes, checksum: cc096544f2a0450b2e09b6d33d5f595e (MD5) / Made available in DSpace on 2017-04-24T13:03:51Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Dissertação de mestrado - Camila Souza Costa.pdf: 2943001 bytes, checksum: cc096544f2a0450b2e09b6d33d5f595e (MD5) / capes / Introdução: As infecções pneumocócicas são as principais causas de mortalidade e morbidade infantil em todo o mundo. Ainda não há resultados conclusivos sobre a imunogenicidade da vacina pneumocócica 10-valente (PCV10), recomendada pelo Programa Nacional de Imunizações, em crianças com risco aumentado para doenças infecciosas. Objetivo: O principal objetivo deste estudo foi avaliar a resposta imune de anticorpos IgG contra os sorotipos presentes na PCV10. Materiais e Métodos: O estudo foi conduzido no Centro de Referência de Imunobiológicos Especiais (CRIE/UFBA) e no 16º Centro de Saúde. Foram incluídas, 13 crianças (Grupo 1) com diagnóstico de alguma patologia ou imunodeficiência (idade = 2,0 meses, IQR 2,0 - 2,5) e 30 crianças saudáveis (Grupo 2) (idade = 2,0 meses, IQR 2,0 - 2,0). Todas as crianças foram imunizadas com 4 doses da vacina e as amostras de sangue foram coletadas das mesmas, antes da 1ª e 4ª imunizações (T1 e T4) para medir a concentração de IgGs sorotipo-específicos. Foi realizado um ELISA indireto, utilizando a PCV10 como antígeno. Soros das crianças, controle de referência positivo (007sp) e controles negativos foram misturados com um absorvente contendo polissacarídeos capsulares C e 22F para remover os anticorpos não específicos contra antígenos bacterianos comuns. Resultados: Verificou-se que, no Grupo 1, 12/13 (92%) das crianças possuíam anticorpos IgG maiores que o ponto de corte de 1,022 ng/mL (mediana = 10,8 ng/mL, IQR = 3,0 - 18,5 ng/mL). Além disso, da 1ª para 4ª dose houve um aumento de 22 vezes na mediana (P= 0,0002). No Grupo 2, 29/30 (97%) tiveram uma resposta satisfatória acima do ponto de corte (mediana = 16,0 ng/mL, IQR = 7,3-35,6 ng/mL) e um aumento de 53 vezes na mediana (p<0,0001) da 1ª para 4ª dose. Com relação às imunoglobulinas, no Grupo 1, 38,5% (5/13) das crianças apresentaram IgM diminuída e 23% (3/13) tinham IgG inferior ao valor de referência. Todavia, no Grupo 2, 6,7% (2/30) das crianças apresentaram níveis de IgG abaixo do valor preconizado. Conclusões: Crianças portadoras de doenças crônicas e/ou imunodeficiências apresentam títulos de anticorpos contra os sorotipos vacinais favoráveis e equivalentes aos títulos de anticorpos anti-PCV10 em crianças imunocompetentes. / Introduction: Pneumococcal infections are the main causes of child mortality and morbidity worldwide. There is still no conclusive results on the immunogenicity of 10-valent pneumococcal vaccine (PCV10), recommended by the National Immunization Program, in children at increased risk for infectious diseases. Objective: The main aim of this study was to evaluate the immune response of IgG antibodies against serotypes in PCV10. Materials and Methods: The study was conducted with children enrolled in the Reference Center of Special Immunobiologicals (CRIE/UFBA) and at 16th Health Center. Were included, 13 children (Group 1) diagnosed with some disease or immunodeficiency (age = 2.0 months, IQR 2.0 - 2.5) and 30 healthy children (Group 2) (age = 2.0 months, IQR 2.0 - 2.0). All children were immunized with four doses of the vaccine and blood samples were collected from these children before the first and fourth immunization (T1 and T2) to measure serotype-specific IgG concentrations. An indirect ELISA was performed using the PCV10 as antigen. Child serum samples, positive serum (007sp) and negative reference sera were mixed before analysis with an absorbent containing C and 22F capsular polysaccharide to remove non-specific antibodies against bacterial common antigens. Results: It was found that, in Group 1, 12/13 (92%) children had higher IgG antibodies than the cutoff of 1,022 ng/mL (median = 10.8 ng/mL, IQR = 3.0 - 18.5 ng/ml). In addition, from the first to fourth dose there was an increase of 22 times in the median (p = 0.0002). In Group 2, 29/30 (97%) had a satisfactory response above the cutoff (median = 16.0 ng / mL, IQR = 7.3 - 35.6 ng/mL) and an increase of 53 times in the median (p = 0.0001) from the first to fourth dose. Regarding immunoglobulins, in Group 1, 38.5% (5/13) of the children had decreased IgM and 23% (3/13) had IgG below the reference value. However, in Group 2, 6.7% (2/30) of the children had IgG levels below the recommended value. Conclusions: Children with chronic diseases and/or immunodeficiency may have antibody titers against vaccine serotypes, favorable and equivalent to the titers of PCV10 anti-antibodies in immunocompetent children.

Para elucidar os mecanismos envolvidos na inibição da hipersensibilidade do tipo I em proles murinas mediada pela imunização materna com Ovalbumina (OVA), as proles foram avaliadas quanto aos linfócitos T&#947;&#948; produtores de IL-17 (CD27-). A imunização materna com OVA reduziu a expressão de CD27, o que também se refletiu nos pulmões, e a produção de IL-17 por linfócitos T&#947;&#948; das proles. A redução da expressão de CD27 também foi evidenciada em linfócitos T&#947;&#948; intratímicos das proles após a transferência passiva de anticorpos IgG alérgeno específicos para fêmeas gestantes não imunizadas e in vitro em resposta a estes mesmos anticorpos, efeito que parece envolver a expressão de receptores para IgG expressos por outras células presentes no timo. As evidências obtidas indicam que a imunização materna influi na maturação tímica de linfócitos inibindo a população que colaborara com a inflamação alérgica. Aparentemente, os anticorpos IgG maternos são responsáveis por este fenômeno e a população estudada está envolvida na inibição da inflamação alérgica observada nas proles. / To elucidate the mechanisms involved in inhibition of type I hypersensitivity in murine offsprring mediated by maternal immunization with Ovalbumin (OVA), the offspring were evaluated as IL-17-producing &#947;&#948;T cells (CD27-). Maternal immunization with OVA reduced the expression of CD27, which was also reflected in the lungs, and the production of IL-17 by &#947;&#948;T cells of offspring. Reduction of CD27 expression was also evidenced in intrathymic &#947;&#948;T cells of offspring after passive transfer of allergen-specific IgG antibodies to non-immunized pregnant females and in vitro in response to these same antibodies, effect that seems to involve the expression of IgG receptors expressed by other cells present in the thymus. Evidence obtained indicates that maternal immunization influences the thymic maturation of lymphocytes by inhibiting the population that collaborate with allergic inflammation. Apparently, maternal IgG antibodies are responsible for this phenomenon and the population studied is involved in the inhibition of allergic inflammation observed in offspring.

As espécies Klebsiella pneumoniae, Escherichia coli e Pseudomonas aeruginosa são responsáveis por infecções neonatais hospitalares. Lipopolissacarídeo (LPS) é o principal indutor de respostas inflamatórias. Os objetivos foram avaliar a transferência placentária de IgG reativa ao LPS de K. pneumoniae, E. coli O111, O26 e O6 e P. aeruginosa empregando ELISA para dosar IgG em soro materno e de cordão de 29 neonatos pré-termos e 32 a termo; analisar IgM total e específica no soro materno; e investigar a influência das patologias apresentadas pelas mães na transferência placentária. Concentrações de IgG total foram reduzidas em pré-termos como esperado, porem índices de transferência placentária de IgG total e IgG anti-LPS foram sistematicamente reduzidos quando comparados aos neonatos a termo. Níveis de IgM total e anti-LPS foram equivalentes em mães de ambos os grupos. As patologias das mães influenciaram os níveis de IgM no grupo de mães de pré-termos. Estes resultados indicam uma imunidade adquirida deficiente pelo grupo pré-termo aumentando os riscos de infecção. / Klebsiella pneumoniae, Escherichia coli and Pseudomonas aeruginosa species are responsible for neonatal nosocomial infections. Bacterial lipopolysaccharide (LPS) is the major inducer of the inflammatory responses. The aims were to evaluate the placental transfer of IgG reactive to LPS present in K. pneumoniae, in E. coli O111, O26 and O6 and in P. aeruginosa employing ELISA to detect IgG in maternal and cord sera from 29 preterm and 32 term neonates; to analyze total and specific IgM on the mothers sera; and to investigate the influence of the pathologies presented by some mothers in the placental transfer. Total IgG concentrations were reduced in preterm neonates as expected, but placental transfer indexes of total and anti-LPS IgG were systematically reduced when compared with term neonates. Total and anti-LPS IgM levels were equivalent on mothers of both groups. The mothers pathologies influenced only the IgM levels in the preterm mothers group. These results indicate a deficient acquired immunity by the preterm group increasing the risk of infection.

Para elucidar os mecanismos envolvidos na inibição da hipersensibilidade do tipo I em proles murinas mediada pela imunização materna com Ovalbumina (OVA), as proles foram avaliadas quanto aos linfócitos T&#947;&#948; produtores de IL-17 (CD27-). A imunização materna com OVA reduziu a expressão de CD27, o que também se refletiu nos pulmões, e a produção de IL-17 por linfócitos T&#947;&#948; das proles. A redução da expressão de CD27 também foi evidenciada em linfócitos T&#947;&#948; intratímicos das proles após a transferência passiva de anticorpos IgG alérgeno específicos para fêmeas gestantes não imunizadas e in vitro em resposta a estes mesmos anticorpos, efeito que parece envolver a expressão de receptores para IgG expressos por outras células presentes no timo. As evidências obtidas indicam que a imunização materna influi na maturação tímica de linfócitos inibindo a população que colaborara com a inflamação alérgica. Aparentemente, os anticorpos IgG maternos são responsáveis por este fenômeno e a população estudada está envolvida na inibição da inflamação alérgica observada nas proles. / To elucidate the mechanisms involved in inhibition of type I hypersensitivity in murine offsprring mediated by maternal immunization with Ovalbumin (OVA), the offspring were evaluated as IL-17-producing &#947;&#948;T cells (CD27-). Maternal immunization with OVA reduced the expression of CD27, which was also reflected in the lungs, and the production of IL-17 by &#947;&#948;T cells of offspring. Reduction of CD27 expression was also evidenced in intrathymic &#947;&#948;T cells of offspring after passive transfer of allergen-specific IgG antibodies to non-immunized pregnant females and in vitro in response to these same antibodies, effect that seems to involve the expression of IgG receptors expressed by other cells present in the thymus. Evidence obtained indicates that maternal immunization influences the thymic maturation of lymphocytes by inhibiting the population that collaborate with allergic inflammation. Apparently, maternal IgG antibodies are responsible for this phenomenon and the population studied is involved in the inhibition of allergic inflammation observed in offspring.

As espécies Klebsiella pneumoniae, Escherichia coli e Pseudomonas aeruginosa são responsáveis por infecções neonatais hospitalares. Lipopolissacarídeo (LPS) é o principal indutor de respostas inflamatórias. Os objetivos foram avaliar a transferência placentária de IgG reativa ao LPS de K. pneumoniae, E. coli O111, O26 e O6 e P. aeruginosa empregando ELISA para dosar IgG em soro materno e de cordão de 29 neonatos pré-termos e 32 a termo; analisar IgM total e específica no soro materno; e investigar a influência das patologias apresentadas pelas mães na transferência placentária. Concentrações de IgG total foram reduzidas em pré-termos como esperado, porem índices de transferência placentária de IgG total e IgG anti-LPS foram sistematicamente reduzidos quando comparados aos neonatos a termo. Níveis de IgM total e anti-LPS foram equivalentes em mães de ambos os grupos. As patologias das mães influenciaram os níveis de IgM no grupo de mães de pré-termos. Estes resultados indicam uma imunidade adquirida deficiente pelo grupo pré-termo aumentando os riscos de infecção. / Klebsiella pneumoniae, Escherichia coli and Pseudomonas aeruginosa species are responsible for neonatal nosocomial infections. Bacterial lipopolysaccharide (LPS) is the major inducer of the inflammatory responses. The aims were to evaluate the placental transfer of IgG reactive to LPS present in K. pneumoniae, in E. coli O111, O26 and O6 and in P. aeruginosa employing ELISA to detect IgG in maternal and cord sera from 29 preterm and 32 term neonates; to analyze total and specific IgM on the mothers sera; and to investigate the influence of the pathologies presented by some mothers in the placental transfer. Total IgG concentrations were reduced in preterm neonates as expected, but placental transfer indexes of total and anti-LPS IgG were systematically reduced when compared with term neonates. Total and anti-LPS IgM levels were equivalent on mothers of both groups. The mothers pathologies influenced only the IgM levels in the preterm mothers group. These results indicate a deficient acquired immunity by the preterm group increasing the risk of infection.

Submitted by Carla Ferreira (carlaferreira66@gmail.com) on 2014-07-31T12:23:26Z No. of bitstreams: 2 license_rdf: 23148 bytes, checksum: 9da0b6dfac957114c6a7714714b86306 (MD5) HerminioSobrinho-2008 (1).PDF: 811492 bytes, checksum: 63a0aabcbb6458adb1051bc054066d08 (MD5) / Made available in DSpace on 2014-07-31T12:23:26Z (GMT). No. of bitstreams: 2 license_rdf: 23148 bytes, checksum: 9da0b6dfac957114c6a7714714b86306 (MD5) HerminioSobrinho-2008 (1).PDF: 811492 bytes, checksum: 63a0aabcbb6458adb1051bc054066d08 (MD5) Previous issue date: 2008 / Rheumatoid Arthritis (RA) and Systemic Lupus Erythematosus (SLE) are autoimmune diseases of unknown etiology. Some species of mycoplasmas cause arthritis in animals and humans, and their lipid-associated membrane proteins (LAMPs) and Mycoplasma arthritidis mitogen (MAM superantigen) are potent stimulators of the immune system. Thus, it has been proposed that mycoplasma can be involved in autoimmune-disease etiology. The objective of the present work was to detect antibodies to MAM and LAMPs of M. hominis and M. fermentans in the patient sera, and to characterize the profile of IgG antibodies reactivity with LAMPs in order to identify the major immunogenic mycoplasmal lipoproteins that could be involved in the etiopathogenesis of these autoimmune diseases. Serum samples were obtained from peripheral blood of female patients at the same age of healthy controls. Recombinant MAM (from M. arthrititidis), LAMPs of M. hominis PG21 and M. fermentans PG18 were used in Western blotting assays. Antibodies to MAM were detected in the patient and control sera (RA: 27.5% vs 18.8%; SLE: 21.7% vs 20.0%). At least 23 LAMPs were found in the preparations of M. hominis PG21 and of M. fermentans PG18 with molecular masses between 20 and 192 KDa. The sera of RA patients recognized a larger number of LAMPs of M. hominis PG21 and M. fermentans PG18 than the control sera (RA: 11 ± 4 vs controls: 7 ± 3, n = 35; p &lt; 0,05). Most of the sera of RA patients presented strong reactivity with LAMPs of M. hominis PG21 (RA: 65.7% vs controls: 20%, p &lt; 0.05). LAMPs of M. hominis PG21 with molecular masses &lt; 49 and ? 20 KDa and LAMPs of M. fermentans PG18 &lt; 102 and ? 58 were mainly recognized by IgG antibodies of RA patients. When comparing sera from SLE patients and controls there was detected no significant differences between the profiles of IgG reactivity. Therefore, M. hominis PG21 LAMPs (&lt; 49 and ? 20 KDa) and M. fermentans PG18 LAMPs (&lt; 102 and ? 58 KDa) are high immunogenic mycoplasmal antigens that can induce antibody cross reactivity with self antigen, contributing with the RA pathogenesis. / A artrite reumatóide (AR) e o lúpus eritematoso sistêmico (LES) são doenças autoimunes de etiologia desconhecida. Algumas espécies de micoplasmas causam artrite séptica em seres humanos, sendo estas bactérias fortes candidatos à etiopatogênese destas doenças. O superantígeno MAM é uma proteína secretada por Mycoplasma arthritidis, que juntamente com lipoproteínas (LAMPs) de M. hominis e M. fermentans, ativam as células do sistema imune e podem estar envolvidos na etiopatogenia da AR e do LES. O objetivo do presente trabalho foi detectar e caracterizar a resposta de anticorpos IgG contra superantígeno MAM e LAMPs de M. fermentans e M. hominis em soros de pacientes com AR ou LES, a fim de detectar as LAMPs mais imunogênicas candidatas a antígenos envolvidos na etiopatogenia destas doenças. Os pacientes com AR ou LES e os controles saudáveis eram indivíduos do sexo feminino e da mesma faixa etária. Foi usado MAM recombinante e LAMPs de M. hominis PG21 e M. fermentans PG18 extraídas com detergente Triton X-114, para avaliar o perfil de anticorpos IgG por meio da técnica de Western blotting. Anticorpos IgG anti-MAM foram detectados tanto nos soros de pacientes quanto nos dos controles (AR: 27,5% vs 18,8%; LES: 21,7% vs 20,0%). Foram detectadas pelo menos 23 LAMPs nas preparações de M. hominis PG21 e de M. fermentans PG18 com massas moleculares entre 20 e 192 KDa. Os soros de pacientes com AR reconheceram um maior número de LAMPs de M. hominis PG21 e de M. fermentans PG18 do que os soros controles (AR: 11 ± 4 vs controles: 7 ± 3, n = 35; p &lt; 0,05). A maioria dos soros dos pacientes com AR apresentou forte reatividade com LAMPs de M. hominis PG21 (AR: 65,7% vs controles: 20%, p &lt; 0,05). As LAMPs de M. hominis PG21 com massas moleculares &lt;49 e ³ 20 KDa e de M. fermentans PG18 &lt; 102 e ? 58 foram mais frequentemente reconhecidas por anticorpos IgG de soros de pacientes com AR do que por anticorpos dos soros controles. Não foram atestadas diferenças significantes entre os perfis de reatividade dos soros de pacientes com LES e controles, nem com relação ao número de LAMPs reconhecidas, nem com as diferentes faixas de massas moleculares das LAMPs. Portanto, as LAMPs de M. hominis (&lt;49 e ³ 20 KDa) e M. fermentans (&lt; 102 e ? 58) podem ser antígenos que induzem a produção de anticorpos que reagem cruzadamente com antígenos próprios, contribuindo para o processo da patogênese da AR.

Intimina é uma adesina de natureza protéica das bactérias diarreiogênicas Escherichia coli enteropatogenica (EPEC) e enterohemorrágica (EHEC), capazes de induzir a lesão \'attaching e effacing\' em enterócitos. Os principais subtipos de intiminas de EPEC e EHEC prevalentes no Brasil são &#945;, &#946; e &#947;. Nosso objetivo foi investigar a transferência de anticorpos maternos anti-intiminas aos recém-nascidos de mães saudáveis de São Paulo, Brasil. Foram pesquisados anticorpos SIgA no colostro e IgG no soro de 50 mulheres saudáveis e no soro de cordão umbilical de seus recém-nascidos, por ELISA utilizando como antígeno proteínas recombinantes purificadas das regiões conservadas e variáveis de intiminas &#945;, &#946; e &#947;. As concentrações de anticorpos no colostro foram superiores quando comparadas com as concentrações do soro para todos os tipos de intiminas. Não se observaram diferenças estatísticas entre as concentrações de anticorpos reativos com as diferentes intiminas nas amostras de colostro. As concentrações de anticorpos reativos com a região conservada da intimina foram significativamente mais elevadas em comparação com as regiões variáveis no soro dos grupos de mães e de recém-nascidos. Houve alta correlação entre todos os anticorpos anti-intiminas nas amostras de colostro. Comparando-se as concentrações de anticorpos séricos, os coeficientes foram maiores entre anti-&#945; e anti-&#946; que entre os outros pares. Nossos resultados confirmam a transferência de anticorpos maternos para o recém-nascido pela placenta e pelo aleitamento materno e reforça o efeito protetor da amamentação contra infecção por EPEC. / Intimin is a proteic adhesin of enteropatogenic (EPEC) and enterohemorragic (EHEC) Escherichia coli, capable of inducing attachment and effacement lesion in enterocytes. The main subtypes of intimins of EPEC and EHEC prevalent in Brazil are &#945;, &#946; and &#947;. Our aim is to investigate the transference of maternal anti-intimin antibodies to the newborns of healthy mothers from Sao Paulo, Brazil. IgG and SIgA antibodies were determined in sera and colostrum from 50 healthy women and cord sera from their newborns, by ELISA using as antigens purified recombinant proteins, conserved and variable regions of &#945;, &#946; and &#947; intimins. The IgA antibody concentrations of colostrum are higher than IgG antibodies in serum for all intimins and there were no statistical differences between them in colostrum samples. The concentrations of antibodies reactive with the conserved region of intimin are significantly higher compared to the variable regions in the sera groups, mothers and newborns. There were high correlation coefficients between all the anti-intimins antibodies in colostrum samples. In the comparison of the seric antibody concentrations, the coefficients were higher between anti-&#945; and anti-&#946; than all the other pairs. Our results confirm the transference of maternal antibodies to the newborns by placenta and breastfeeding and reinforce the high protection effect of breastfeeding against EPEC infection.

Intimina é uma adesina de natureza protéica das bactérias diarreiogênicas Escherichia coli enteropatogenica (EPEC) e enterohemorrágica (EHEC), capazes de induzir a lesão \'attaching e effacing\' em enterócitos. Os principais subtipos de intiminas de EPEC e EHEC prevalentes no Brasil são &#945;, &#946; e &#947;. Nosso objetivo foi investigar a transferência de anticorpos maternos anti-intiminas aos recém-nascidos de mães saudáveis de São Paulo, Brasil. Foram pesquisados anticorpos SIgA no colostro e IgG no soro de 50 mulheres saudáveis e no soro de cordão umbilical de seus recém-nascidos, por ELISA utilizando como antígeno proteínas recombinantes purificadas das regiões conservadas e variáveis de intiminas &#945;, &#946; e &#947;. As concentrações de anticorpos no colostro foram superiores quando comparadas com as concentrações do soro para todos os tipos de intiminas. Não se observaram diferenças estatísticas entre as concentrações de anticorpos reativos com as diferentes intiminas nas amostras de colostro. As concentrações de anticorpos reativos com a região conservada da intimina foram significativamente mais elevadas em comparação com as regiões variáveis no soro dos grupos de mães e de recém-nascidos. Houve alta correlação entre todos os anticorpos anti-intiminas nas amostras de colostro. Comparando-se as concentrações de anticorpos séricos, os coeficientes foram maiores entre anti-&#945; e anti-&#946; que entre os outros pares. Nossos resultados confirmam a transferência de anticorpos maternos para o recém-nascido pela placenta e pelo aleitamento materno e reforça o efeito protetor da amamentação contra infecção por EPEC. / Intimin is a proteic adhesin of enteropatogenic (EPEC) and enterohemorragic (EHEC) Escherichia coli, capable of inducing attachment and effacement lesion in enterocytes. The main subtypes of intimins of EPEC and EHEC prevalent in Brazil are &#945;, &#946; and &#947;. Our aim is to investigate the transference of maternal anti-intimin antibodies to the newborns of healthy mothers from Sao Paulo, Brazil. IgG and SIgA antibodies were determined in sera and colostrum from 50 healthy women and cord sera from their newborns, by ELISA using as antigens purified recombinant proteins, conserved and variable regions of &#945;, &#946; and &#947; intimins. The IgA antibody concentrations of colostrum are higher than IgG antibodies in serum for all intimins and there were no statistical differences between them in colostrum samples. The concentrations of antibodies reactive with the conserved region of intimin are significantly higher compared to the variable regions in the sera groups, mothers and newborns. There were high correlation coefficients between all the anti-intimins antibodies in colostrum samples. In the comparison of the seric antibody concentrations, the coefficients were higher between anti-&#945; and anti-&#946; than all the other pairs. Our results confirm the transference of maternal antibodies to the newborns by placenta and breastfeeding and reinforce the high protection effect of breastfeeding against EPEC infection.