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Previous issue date: 2017-02-24 / CNPQ / A dengue é uma importante doença de aspecto emergente e um grande desafio para a saúde pública mundial. No mercado, existe apenas uma vacina licenciada que não é totalmente eficaz na prevenção da doença. Também existem dificuldades para se expressar antígenos virais em sistemas procarióticos para uso no diagnóstico sorológico. O presente estudo, por meio da engenharia de proteínas, propõe moléculas alternativas de interesse diagnóstico e/ou vacinal para a dengue. Com o uso de ferramentas computacionais seguindo a estratégia “epitope-scaffolding”, elementos estruturais da NS1 de dengue (epitope) foram transplantados para a TOP7 (scaffold). Os genes sintéticos para as variantes dessa proteína, levando em consideração os 4 sorotipos de dengue, totalizando 4 proteínas recombinantes, foram otimizados, sintetizados comercialmente e clonados em vetor de expressão. As proteínas recombinantes tiveram sua expressão confirmada por ensaios de imunoblot e purificadas por cromatografia de afinidade, apresentando alto rendimento e solubilidade. Foram realizados ELISAs, com soros de pacientes infectados com DENV-3, para avaliação imunológica das proteínas quiméricas expressas. Os sinais detectados para as quimeras sugerem que elas são potencialmente imunogênicas. / Dengue is an important emerging disease and a major public health challenge worldwide. Currently, there is only one licensed vaccine that is not fully effective in preventing the disease. There are also difficulties in expressing viral antigens in prokaryotic systems for use in serological diagnosis. The present study, through the engineering of proteins, proposes alternative molecules to be employed in strategies for diagnostics and/or vaccines for dengue. With the use of computational tools following the epitope-scaffolding approach, structural elements of dengue NS1 (epitopes) were transplanted to the TOP7 protein (scaffold). Synthetic genes for 4 recombinant proteins, taking into account the 4 serotypes of dengue, were optimized, commercially synthesized and cloned into expression vector. The cells of Escherichia coli BL21 were transformed with the respective plasmid constructs. Proteins were confirmed by immunoblot assays and purified by affinity chromatography, exhibiting high yield and solubility. ELISAs, with sera from patients infected by DENV-3, were performed for the immunological evaluation of expressed chimeric proteins. Signals detected for the chimeras suggest that they are potentially immunogenic.
| Identifer | oai:union.ndltd.org:IBICT/oai:repositorio.ufpe.br:123456789/25092 |
| Date | 24 February 2017 |
| Creators | PURIFICAÇÃO JUNIOR, Antonio Fernando da |
| Contributors | http://lattes.cnpq.br/2133638997896286, DHALIA, Rafael, LINS NETO, Roberto Dias |
| Publisher | Universidade Federal de Pernambuco, Programa de Pos Graduacao em Genetica, UFPE, Brasil |
| Source Sets | IBICT Brazilian ETDs |
| Language | Portuguese |
| Detected Language | English |
| Type | info:eu-repo/semantics/publishedVersion, info:eu-repo/semantics/masterThesis |
| Source | reponame:Repositório Institucional da UFPE, instname:Universidade Federal de Pernambuco, instacron:UFPE |
| Rights | Attribution-NonCommercial-NoDerivs 3.0 Brazil, http://creativecommons.org/licenses/by-nc-nd/3.0/br/, info:eu-repo/semantics/openAccess |
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