O presente trabalho foi dividido em três etapas: 1) otimização da técnica de imunoistoquímica para raiva utilizando três diferentes anticorpos; 2) mapeamento histológico e imunoistoquímico de cortes seriados do sistema nervoso central (SNC) de bovinos e eqüinos e 3) Histologia e imunoistoquímica de bovinos com diagnóstico de raiva registrados no programa DXSNC do Ministério da Agricultura, Pecuária e Abastecimento (MAPA) com lesões de encefalite não-supurativa e de casos de eqüinos com raiva do arquivo do Setor de Patologia da UFRGS entre 2002-2007. Para a otimização da técnica de imunoistoquímica para raiva foram utilizadas 5 amostras de SNC de bovinos infectados naturalmente com o vírus da raiva usando-se um anticorpo policlonal e dois monoclonais. Para a recuperação antigênica foram avaliados os seguintes reagentes: protease XIV, proteinase K e tampão citrato pH 6,0. A detecção de antígeno rábico nas amostras foi possível com os três anticorpos utilizados. O anticorpo policlonal foi superior aos anticorpos monoclonais, demonstrando bons resultados com os três protocolos de recuperação antigênica, obtendo uma maior intensidade de marcação quando utilizado o tampão citrato. No mapeamento do SNC foram avaliadas 12 amostras de bovinos e 3 de eqüinos que morreram de raiva. Foi realizado histologia convencional e imunoistoquímica com utilização do anticorpo policlonal na diluição de 1:1000. Os principais achados histopatológicos em bovinos e eqüinos caracterizaram-se por meningoencefalite não-supurativa, microgliose focal, degeneração e necrose neuronal e neuronofagia. Em bovinos os principais locais de lesões foram no tronco encefálico, medula espinhal e gânglio trigêmeo. Corpúsculos de inclusão foram observados em 83,33% dos bovinos e em 100% dos eqüinos. Na imunoistoquímica todos os casos de bovinos e eqüinos obtiveram marcação positiva para raiva. Na terceira etapa do trabalho a histopatologia e imunoistoquímica de 30 amostras de bovinos com raiva do Programa DXSNC do SPV-UFRGS caracterizaram-se por meningoencefalite e meningomielite não supurativa com infiltrado mononuclear perivascular, principalmente de linfócitos e também de plasmócitos e macrófagos, além de, microgliose, satelitose e neuronofagia. Presença de corpúsculos de inclusão intracitoplasmáticos foi observado em 73,33% dos casos. Na imunoistoquímica obteve-se marcação em 80% dos casos. Em dois casos de eqüinos examinados do material de arquivo do SPV-UFRGS havia meningoencefalite não-supurativa e com presença de corpúsculos de inclusão e marcação imunoistoquímica nos dois casos. / The present study was divided in three stages: 1) optimization of the immunohistochemistry technique for rabies using three different antibodies; 2) histological and immunohistochemical mapping of serial sections of the central nervous system (CNS) of cattle and horses, and 3) histology and immunohistochemistry of bovine diagnosed with rabies registered on the DXSNC program of the Ministério da Agricultura e Abastecimento (MAPA) with lesions of non-suppurative encephalitis and of equines diagnosed with rabies registered on the files of Veterinary Pathology Section at UFRGS from 2002 to 2007. For the optimization of the rabies immunohistochemistry technique, 5 samples of CNS of bovine naturally infected with rabies virus were used. One polyclonal antibody and two monoclonal antibodies were used. The following reagents were evaluated for antigen retrieval: XIV protease, proteinase K and citrate buffer (pH 6,0). Detection of rabic antigen was possible with the three antibodies tested. The polyclonal antibody was superior to the monoclonal antibodies, demonstrating good results with the three antigen retrieval protocols. The highest intensity staining was obtained with the citrate buffer. In the CNS mapping, 12 samples of bovine and 3 of equine that died of rabies were evaluated. Conventional histology and immunohistochemistry with polyclonal antibody in a 1:1000 dilution were performed. The main histopathological findings in cattle and horses were non-suppurativepurulent meningoencephalitis, focal microgliosis, neuronal degeneration and necrosis and neurophagia. In bovine, the major sites of lesions were brain stem, spinal cord and trigeminal ganglion. Inclusion bodies were observed in 83.33% of bovine and 100% of equine. In the immunohistochemistry, all the bovine and equine cases resulted in positive staining for rabies. On the third stage of the study, histopathology and immunohistochemistry of 30 samples of bovine diagnosed with rabies from the DXSNC program of SPV-UFRGS were characterized by meningoencephalitis and nonsupurative meningomyelitis with perivascular mononuclear infiltrate, especially with lymphocytes and also plasma cells and macrophages. Microgliosis, satellitosis and neuronophagia were also seen. Intracytoplasmic inclusion bodies were observed in 73.33% of the cases. Positive staining was obtained in 80% of the cases in the immunohistochemistry. In two equine cases examined from the SPV-UFRGS file material, there was non-suppurative meningoencephalitis with inclusion bodies and immunohistochemical positive staining.

O presente trabalho foi dividido em três etapas: 1) otimização da técnica de imunoistoquímica para raiva utilizando três diferentes anticorpos; 2) mapeamento histológico e imunoistoquímico de cortes seriados do sistema nervoso central (SNC) de bovinos e eqüinos e 3) Histologia e imunoistoquímica de bovinos com diagnóstico de raiva registrados no programa DXSNC do Ministério da Agricultura, Pecuária e Abastecimento (MAPA) com lesões de encefalite não-supurativa e de casos de eqüinos com raiva do arquivo do Setor de Patologia da UFRGS entre 2002-2007. Para a otimização da técnica de imunoistoquímica para raiva foram utilizadas 5 amostras de SNC de bovinos infectados naturalmente com o vírus da raiva usando-se um anticorpo policlonal e dois monoclonais. Para a recuperação antigênica foram avaliados os seguintes reagentes: protease XIV, proteinase K e tampão citrato pH 6,0. A detecção de antígeno rábico nas amostras foi possível com os três anticorpos utilizados. O anticorpo policlonal foi superior aos anticorpos monoclonais, demonstrando bons resultados com os três protocolos de recuperação antigênica, obtendo uma maior intensidade de marcação quando utilizado o tampão citrato. No mapeamento do SNC foram avaliadas 12 amostras de bovinos e 3 de eqüinos que morreram de raiva. Foi realizado histologia convencional e imunoistoquímica com utilização do anticorpo policlonal na diluição de 1:1000. Os principais achados histopatológicos em bovinos e eqüinos caracterizaram-se por meningoencefalite não-supurativa, microgliose focal, degeneração e necrose neuronal e neuronofagia. Em bovinos os principais locais de lesões foram no tronco encefálico, medula espinhal e gânglio trigêmeo. Corpúsculos de inclusão foram observados em 83,33% dos bovinos e em 100% dos eqüinos. Na imunoistoquímica todos os casos de bovinos e eqüinos obtiveram marcação positiva para raiva. Na terceira etapa do trabalho a histopatologia e imunoistoquímica de 30 amostras de bovinos com raiva do Programa DXSNC do SPV-UFRGS caracterizaram-se por meningoencefalite e meningomielite não supurativa com infiltrado mononuclear perivascular, principalmente de linfócitos e também de plasmócitos e macrófagos, além de, microgliose, satelitose e neuronofagia. Presença de corpúsculos de inclusão intracitoplasmáticos foi observado em 73,33% dos casos. Na imunoistoquímica obteve-se marcação em 80% dos casos. Em dois casos de eqüinos examinados do material de arquivo do SPV-UFRGS havia meningoencefalite não-supurativa e com presença de corpúsculos de inclusão e marcação imunoistoquímica nos dois casos. / The present study was divided in three stages: 1) optimization of the immunohistochemistry technique for rabies using three different antibodies; 2) histological and immunohistochemical mapping of serial sections of the central nervous system (CNS) of cattle and horses, and 3) histology and immunohistochemistry of bovine diagnosed with rabies registered on the DXSNC program of the Ministério da Agricultura e Abastecimento (MAPA) with lesions of non-suppurative encephalitis and of equines diagnosed with rabies registered on the files of Veterinary Pathology Section at UFRGS from 2002 to 2007. For the optimization of the rabies immunohistochemistry technique, 5 samples of CNS of bovine naturally infected with rabies virus were used. One polyclonal antibody and two monoclonal antibodies were used. The following reagents were evaluated for antigen retrieval: XIV protease, proteinase K and citrate buffer (pH 6,0). Detection of rabic antigen was possible with the three antibodies tested. The polyclonal antibody was superior to the monoclonal antibodies, demonstrating good results with the three antigen retrieval protocols. The highest intensity staining was obtained with the citrate buffer. In the CNS mapping, 12 samples of bovine and 3 of equine that died of rabies were evaluated. Conventional histology and immunohistochemistry with polyclonal antibody in a 1:1000 dilution were performed. The main histopathological findings in cattle and horses were non-suppurativepurulent meningoencephalitis, focal microgliosis, neuronal degeneration and necrosis and neurophagia. In bovine, the major sites of lesions were brain stem, spinal cord and trigeminal ganglion. Inclusion bodies were observed in 83.33% of bovine and 100% of equine. In the immunohistochemistry, all the bovine and equine cases resulted in positive staining for rabies. On the third stage of the study, histopathology and immunohistochemistry of 30 samples of bovine diagnosed with rabies from the DXSNC program of SPV-UFRGS were characterized by meningoencephalitis and nonsupurative meningomyelitis with perivascular mononuclear infiltrate, especially with lymphocytes and also plasma cells and macrophages. Microgliosis, satellitosis and neuronophagia were also seen. Intracytoplasmic inclusion bodies were observed in 73.33% of the cases. Positive staining was obtained in 80% of the cases in the immunohistochemistry. In two equine cases examined from the SPV-UFRGS file material, there was non-suppurative meningoencephalitis with inclusion bodies and immunohistochemical positive staining.

O presente trabalho foi dividido em três etapas: 1) otimização da técnica de imunoistoquímica para raiva utilizando três diferentes anticorpos; 2) mapeamento histológico e imunoistoquímico de cortes seriados do sistema nervoso central (SNC) de bovinos e eqüinos e 3) Histologia e imunoistoquímica de bovinos com diagnóstico de raiva registrados no programa DXSNC do Ministério da Agricultura, Pecuária e Abastecimento (MAPA) com lesões de encefalite não-supurativa e de casos de eqüinos com raiva do arquivo do Setor de Patologia da UFRGS entre 2002-2007. Para a otimização da técnica de imunoistoquímica para raiva foram utilizadas 5 amostras de SNC de bovinos infectados naturalmente com o vírus da raiva usando-se um anticorpo policlonal e dois monoclonais. Para a recuperação antigênica foram avaliados os seguintes reagentes: protease XIV, proteinase K e tampão citrato pH 6,0. A detecção de antígeno rábico nas amostras foi possível com os três anticorpos utilizados. O anticorpo policlonal foi superior aos anticorpos monoclonais, demonstrando bons resultados com os três protocolos de recuperação antigênica, obtendo uma maior intensidade de marcação quando utilizado o tampão citrato. No mapeamento do SNC foram avaliadas 12 amostras de bovinos e 3 de eqüinos que morreram de raiva. Foi realizado histologia convencional e imunoistoquímica com utilização do anticorpo policlonal na diluição de 1:1000. Os principais achados histopatológicos em bovinos e eqüinos caracterizaram-se por meningoencefalite não-supurativa, microgliose focal, degeneração e necrose neuronal e neuronofagia. Em bovinos os principais locais de lesões foram no tronco encefálico, medula espinhal e gânglio trigêmeo. Corpúsculos de inclusão foram observados em 83,33% dos bovinos e em 100% dos eqüinos. Na imunoistoquímica todos os casos de bovinos e eqüinos obtiveram marcação positiva para raiva. Na terceira etapa do trabalho a histopatologia e imunoistoquímica de 30 amostras de bovinos com raiva do Programa DXSNC do SPV-UFRGS caracterizaram-se por meningoencefalite e meningomielite não supurativa com infiltrado mononuclear perivascular, principalmente de linfócitos e também de plasmócitos e macrófagos, além de, microgliose, satelitose e neuronofagia. Presença de corpúsculos de inclusão intracitoplasmáticos foi observado em 73,33% dos casos. Na imunoistoquímica obteve-se marcação em 80% dos casos. Em dois casos de eqüinos examinados do material de arquivo do SPV-UFRGS havia meningoencefalite não-supurativa e com presença de corpúsculos de inclusão e marcação imunoistoquímica nos dois casos. / The present study was divided in three stages: 1) optimization of the immunohistochemistry technique for rabies using three different antibodies; 2) histological and immunohistochemical mapping of serial sections of the central nervous system (CNS) of cattle and horses, and 3) histology and immunohistochemistry of bovine diagnosed with rabies registered on the DXSNC program of the Ministério da Agricultura e Abastecimento (MAPA) with lesions of non-suppurative encephalitis and of equines diagnosed with rabies registered on the files of Veterinary Pathology Section at UFRGS from 2002 to 2007. For the optimization of the rabies immunohistochemistry technique, 5 samples of CNS of bovine naturally infected with rabies virus were used. One polyclonal antibody and two monoclonal antibodies were used. The following reagents were evaluated for antigen retrieval: XIV protease, proteinase K and citrate buffer (pH 6,0). Detection of rabic antigen was possible with the three antibodies tested. The polyclonal antibody was superior to the monoclonal antibodies, demonstrating good results with the three antigen retrieval protocols. The highest intensity staining was obtained with the citrate buffer. In the CNS mapping, 12 samples of bovine and 3 of equine that died of rabies were evaluated. Conventional histology and immunohistochemistry with polyclonal antibody in a 1:1000 dilution were performed. The main histopathological findings in cattle and horses were non-suppurativepurulent meningoencephalitis, focal microgliosis, neuronal degeneration and necrosis and neurophagia. In bovine, the major sites of lesions were brain stem, spinal cord and trigeminal ganglion. Inclusion bodies were observed in 83.33% of bovine and 100% of equine. In the immunohistochemistry, all the bovine and equine cases resulted in positive staining for rabies. On the third stage of the study, histopathology and immunohistochemistry of 30 samples of bovine diagnosed with rabies from the DXSNC program of SPV-UFRGS were characterized by meningoencephalitis and nonsupurative meningomyelitis with perivascular mononuclear infiltrate, especially with lymphocytes and also plasma cells and macrophages. Microgliosis, satellitosis and neuronophagia were also seen. Intracytoplasmic inclusion bodies were observed in 73.33% of the cases. Positive staining was obtained in 80% of the cases in the immunohistochemistry. In two equine cases examined from the SPV-UFRGS file material, there was non-suppurative meningoencephalitis with inclusion bodies and immunohistochemical positive staining.

Memoria para optar al título profesional de: Ingeniero en Recursos Naturales Renovables / Jubaea chilensis es un árbol endémico de la zona central de Chile. Es una especie amenazada, la cual ha visto reducida su población original en gran parte por su explotación para la producción de miel de palma. Sin embargo, actualmente la principal amenaza para la conservación de la especie está más relacionada con diferentes factores que limitan su regeneración natural. Estas amenazas han llevado a tener poblaciones coetáneas fuera de las áreas protegidas. Ejemplo de esto, en la ex Hacienda Siete Hermanas en la región de Valparaíso, se puede observar que el 90% de la población está compuesta por individuos adultos. En este trabajo cuantificamos la regeneración natural, para la identificación de condiciones favorables para el establecimiento de la especie y cuantificar la interacción espacial de individuos en diferentes estados de desarrollo. Mediante un análisis de procesos puntuales, se analizó la interacción espacial entre individuos provenientes de regeneración natural, y de ellos en relación a las posibles plantas madres, determinando la distancia, el tipo y rangos de interacción. Se construyó además un modelo estadístico para predecir la densidad de regeneración natural, asociándola a diferentes variables ambientales. Finalmente se utilizó el modelo ajustado para identificar sitios favorables para la regeneración natural de J. chilensis en la ex Hacienda Siete Hermanas. Los diferentes patrones espaciales analizados difirieron significativamente de un patrón de distribución aleatorio, observando una notoria agrupación espacial entre los individuos de regeneración para todos los rangos de distancia analizados, y de estos respecto a los adultos. Mediante la modelación espacial se determinó además que la regeneración natural de J. chilensis se relaciona significativamente con sitios con mayor cobertura vegetacional, reflejado en la relación significativa positiva con el NDVI, y especialmente en sitios con una mayor radiación solar, expresado en la relación positiva entre densidad y exposición topográfica. Los resultados sugieren que la generación de núcleos de regeneración de J. chilensis se debería a la conjugación de condiciones ambientales propicias para el establecimiento de nuevos individuos. El patrón espacial de reclutamiento en J. chilensis sigue más bien el mecanismo planteado por Janzen–Connell, donde el mayor reclutamiento ocurre a distancias intermedias desde la planta madre, lo que puede sugerir una concentración de individuos en zonas donde las plántulas logren escapar a la depredación de semillas y a la herbivoría. Por otro lado, la relación significativa de la regeneración con el NDVI, sugiere la ocurrencia de un efecto nodriza, facilitador de la regeneración natural de la especie. Este efecto facilitador de la cobertura en la supervivencia de J. chilensis se debería principalmente a mejores condiciones ambientales bajo el dosel, por lo que la dispersión efectiva ocurriría limitado por su coincidencia con el nicho de regeneración bajo la cobertura vegetacional. Este trabajo confirma la facilitación de J. chilensis por la vegetación acompañante en su ciclo reproductivo. Por lo cual, la restauración de la especie debe necesariamente considerar el reestablecimiento de elementos del bosque esclerófilo. / Jubaea chilensis is an endemic tree of central Chile. It is an endangered species which has reduced its original population largely by exploitation for the production of palm honey. However, currently the main threat to the conservation of the species is related to different factors that are limiting natural regeneration. These threats have produced coetaneous populations out of the range of natural protected areas. An example of this occurs in the ex Hacienda Siete Hermanas, where we can observe that 90% of individuals are adults. In this study we quantified the natural regeneration of Jubaea chilensis and identified the best conditions for the natural regeneration process. Moreover, we quantified the spatial interaction of individuals for different growth states. Using an analysis of point processes we analyzed the spatial interaction between individuals from natural regeneration and their relation to the potential mother plants. In order to characterize the spatial interaction between reproductive individuals and its progeny we estimated the distance, type and range of interaction between them. Furthermore, we fitted a statistical model to predict the density of regeneration using environmental variables as predictors which describe the degree of environmental heterogeneity. Fitted models were used to identify favorable sites for natural regeneration of J. chilensis in the ex Hacienda Siete Hermanas. The different spatial patterns analyzed differed significantly from a random distribution pattern with a marked spatial clustering among regeneration individuals for all distance ranges analyzed, and of these with respect to adults. Results show that natural regeneration of J. chilensis is significantly related to higher plant cover sites. This pattern is due to the significant and positive relationship with the NDVI, especially in places with higher solar radiation which is associated to the positive relationship between density and topographic exposure. The results suggest that the generation of nuclei regeneration of J. chilensis is due to the proper combination of environmental conditions to the establishment of new individuals. The spatial pattern of recruitment in J. chilensis follows the mechanism proposed by Janzen-Connell where the increased recruitment occurs at intermediate distances from the mother plant which can suggest a concentration of individuals in areas where seedlings manage to escape seed predation and herbivory. On the other hand, significant relationship with the NDVI regeneration suggests the occurrence of a nurse effect facilitating natural regeneration of the species. This facilitating effect on survival coverage of J. chilensis would be mainly due to improved environmental conditions under the canopy, so that the effective dispersion occur limited by its coincidence with the regeneration niche low vegetation coverage. This work confirms the facilitation of J. chilensis by accompanist vegetation in their reproductive cycle. Therefore, the restoration of the species must consider the reestablishment of sclerophyllous forest elements.