Dissertação (mestrado)—Universidade de Brasília, Faculdade de Medicina, Programa de Pós-Graduação em Ciências Médicas, 2017. / Submitted by Raquel Almeida (raquel.df13@gmail.com) on 2017-07-05T21:23:15Z No. of bitstreams: 1 2017_ThiagodosSantosBezerra.pdf: 12910920 bytes, checksum: d5cb7b0e36b811c0e777a5ce45c3d8ee (MD5) / Approved for entry into archive by Raquel Viana (raquelviana@bce.unb.br) on 2017-07-28T19:28:18Z (GMT) No. of bitstreams: 1 2017_ThiagodosSantosBezerra.pdf: 12910920 bytes, checksum: d5cb7b0e36b811c0e777a5ce45c3d8ee (MD5) / Made available in DSpace on 2017-07-28T19:28:18Z (GMT). No. of bitstreams: 1 2017_ThiagodosSantosBezerra.pdf: 12910920 bytes, checksum: d5cb7b0e36b811c0e777a5ce45c3d8ee (MD5) Previous issue date: 2017-07-28 / Introdução: A hipóxia isquêmica cerebral pode produzir severas lesões neurológicas, levando aos transtornos comportamentais que podem ter impacto negativo na recuperação do indivíduo e, por vezes, repercutindo negativamente na sua qualidade de vida. Esta pesquisa procurou analisar as alterações histológicas hipocampais e cerebelares provocadas pela hipóxia isquêmica encefálica induzida experimentalmente por nitrito de sódio e possíveis repercussões diretas sobre o comportamento. Metodologia: Foi realizado um estudo experimental por meio da administração de 60mg/Kg de Nitrito de Sódio em 10 ratas Wistar com 3 meses de idade, durante 15 dias consecutivos. Dez ratas, que não sofreram hipóxia serviram como controle. A fim de verificar repercussões comportamentais, avaliou-se os animais, pré e pós lesão no Open Field, Labirinto em Cruz Elevado e Teste do Nado Forçado, testes que avaliam locomoção, ansiedade e depressão, respectivamente. Os marcadores dos níveis de estresse foram avaliados por meio da verificação dos níveis sanguíneos de cortisol e glicose. As lesões hipocampais foram verificadas por meio de estudo histológico das áreas CA1 a CA4. Cortes do cerebelo também foram avaliados, uma vez que as células de Purkinje são altamente sensíveis a hipóxia isquêmica e serviriam como marcadoras deste processo. Resultados: O número de neurônios com lesão foi significantemente maior nos animais expostos ao Nitrito de Sódio, nas áreas CA2, CA3 e CA4 do hipocampo, refletindo de forma negativa nos parâmetros de avaliação nos testes de ansiedade e depressão. Conclusão: Foi possível verificar que o Nitrito de Sódio promoveu lesão encefálica por hipóxia isquêmica em ratos, sendo que os animais que sofreram intoxicação apresentaram diminuição do peso do encéfalo, lesões nas regiões CA2, CA3 e CA4 do hipocampo e comportamento ansiogênico e depressivo. / Introduction: Brain ischaemic hypoxia can produce severe neurological damage that leads to behavioural disorders, which may negatively impact the individual's recovery and, sometimes, their quality of life. This research analysed the hippocampal and cerebellar histological alterations caused by brain ischaemic hypoxia experimentally induced by sodium nitrite (NaNO2) and possible direct repercussions of this hypoxia on behaviour. Methodology: An experimental study was carried out by administering 60 mg/kg NaNO2 to 10 Wistar rats at 3 months of age for 15 consecutive days. Ten control rats did not receive NaNO2. To assess behavioural repercussions, the animals were evaluated in Open Field, Elevated Plus-Maze (EPM), and Forced Swim tests before and after injury to evaluate locomotion, anxiety like behavioural, and depression like behavioural, respectively. Markers of stress were evaluated by measuring the blood levels of cortisol and glucose. The presence of hippocampal lesions was verified by histologically studying the CA1 to CA4 areas. Sections of the cerebellum were also evaluated because Purkinje cells are highly sensitive to ischaemic hypoxia and may serve as markers for this process. Results: The number of neurons with lesions was significantly higher in animals exposed to NaNO2 in the hippocampus areas CA2, CA3, and CA4, and this number is correlated with the parameters of the anxiety and depression tests. Conclusion: NaNO2 promoted brain damage due to ischaemic hypoxia in rats. Intoxicated animals showed decreased brain weights; damage in hippocampus regions CA2, CA3, and CA4; and anxiogenic and depressive behaviour. In addition, the cerebellum was very vulnerable to hypoxia, presenting extensive lesion areas.

Fundação de Amparo à Pesquisa do Estado do Rio de Janeiro / A Hipóxia-Isquêmica (HI) pré-natal é caracterizada por uma redução no aporte de oxigênio e nutrientes para o feto durante o período gestacional, que pode acarretar, a longo prazo, em dificuldade de concentração e aprendizagem, hiperatividade e déficit de memória. Esses prejuízos podem persistir ou se agravar até a idade adulta, levando ainda ao aparecimento de doenças como epilepsia e paralisia cerebral (PC). A privação de oxigênio e nutrientes, assim como o estresse materno, anemia, eclâmpsia e uso de drogas durante a gestação, podem causar estresse oxidativo durante os períodos críticos do desenvolvimento, e pode ser a principal razão para as mudanças que levam a programação fetal. O objetivo deste estudo foi relacionar a geração de espécies reativas e a consequente formação de estresse oxidativo nos animais adultos, com as alterações da biodisponibilidade do óxido nítrico de forma sistêmica, além de mudanças nos comportamentos motor e de ansiedade, manutenção da memória e aprendizado. Para a hipóxia, foi utilizado o modelo de clampeamento das artérias uterinas das ratas no 18 dia gestacional por 45 min, analisando os filhotes após 90 dias de nascidos. Foram utilizados os testes Open Field e labirinto em cruz elevada para a análise comportamental, e análises das enzimas glutationa peroxidase (GPx), superóxido desmutase (SOD) e catalase, além de quantificação de nitritos, TBARs e carbonilação de proteínas para avaliação de mecanismos oxidantes e antioxidantes. Os resultados demonstraram que o insulto durante a gestação pode acarretar em redução na formação da enzima GPx, além de maior concentração de nitritos analisados nos soros dos animais hipoxiados quando comparados aos controles, contribuindo para o dano oxidativo. Também foi observada redução na memória de habituação e comportamento motor, além de elevado comportamento ansioso em animais hipoxiados, diferentemente de controles. Concluímos assim que a hipóxia isquêmica pré-natal pode alterar permanentemente o estado oxidativo dos animais, além de atuar na formação do comportamento motor, memória de habituação e ansiedade. As descobertas aqui apresentadas contribuem para ampliar o entendimento acerca do evento de hipóxia isquêmica pré-natal, além de prover ferramentas para o desenvolvimento de mecanismos protetores e preventivos aos possíveis danos por ela causados. / The prenatal hypoxia ischemic (HI) is characterized by a decreased supply of oxygen and nutrients to the fetus during the gestational period that could be followed in a long term by poor concentration and learning, hyperactivity and memory deficits. These damages can persist or become more severe, leading to diseases like epilepsy or cerebral palsy. The oxygen and nutrients privation, as well as maternal stress, anemia, eclampsia and drugs abuse in gestation, may cause oxidative stress during the critical periods of development, and could be the main reason to changes leading to a fetal programming. The aim of the present study was to investigate the association of reactive species generation and consequent formation of oxidative stress in HI adult animals, with systemic alterations in nitric oxide bioavailability, in addition to changes on motor behavior and anxiety, memory maintenance and learning. To hypoxia, we used the model of rats uterine arteries clamping in 18 day of gestation for 45 min, analyzing the pups after 90 days of life. The open field test and elevated plus maze test were used to behavioral analysis, and GPx, SOD and catalase enzymes analysis, besides nitrite quantification, TBARs and protein carbonyl to verify oxidative stress. The results have shown that a hypoxic insult during gestation can cause reduction in GPx enzyme formation associated with elevated nitrite concentration in serum of hypoxic animals when compared to controls, contributing to oxidative damage. Also it was observed an impairment of habituation memory and motor behavior, besides the increased anxiety in hypoxic animals, in contrast to controls. Thus, it can be conclude that prenatal hypoxia ischemia can permanently alter the oxidative status in animals, and also act in formation of motor, habituation memory and anxiety behavior. The findings contribute to increase the knowledge about the prenatal hypoxia ischemia, and provide tools for the development of protective mechanisms and preventions to possible damages caused by this critical event.

Fundação de Amparo à Pesquisa do Estado do Rio de Janeiro / A Hipóxia-Isquêmica (HI) pré-natal é caracterizada por uma redução no aporte de oxigênio e nutrientes para o feto durante o período gestacional, que pode acarretar, a longo prazo, em dificuldade de concentração e aprendizagem, hiperatividade e déficit de memória. Esses prejuízos podem persistir ou se agravar até a idade adulta, levando ainda ao aparecimento de doenças como epilepsia e paralisia cerebral (PC). A privação de oxigênio e nutrientes, assim como o estresse materno, anemia, eclâmpsia e uso de drogas durante a gestação, podem causar estresse oxidativo durante os períodos críticos do desenvolvimento, e pode ser a principal razão para as mudanças que levam a programação fetal. O objetivo deste estudo foi relacionar a geração de espécies reativas e a consequente formação de estresse oxidativo nos animais adultos, com as alterações da biodisponibilidade do óxido nítrico de forma sistêmica, além de mudanças nos comportamentos motor e de ansiedade, manutenção da memória e aprendizado. Para a hipóxia, foi utilizado o modelo de clampeamento das artérias uterinas das ratas no 18 dia gestacional por 45 min, analisando os filhotes após 90 dias de nascidos. Foram utilizados os testes Open Field e labirinto em cruz elevada para a análise comportamental, e análises das enzimas glutationa peroxidase (GPx), superóxido desmutase (SOD) e catalase, além de quantificação de nitritos, TBARs e carbonilação de proteínas para avaliação de mecanismos oxidantes e antioxidantes. Os resultados demonstraram que o insulto durante a gestação pode acarretar em redução na formação da enzima GPx, além de maior concentração de nitritos analisados nos soros dos animais hipoxiados quando comparados aos controles, contribuindo para o dano oxidativo. Também foi observada redução na memória de habituação e comportamento motor, além de elevado comportamento ansioso em animais hipoxiados, diferentemente de controles. Concluímos assim que a hipóxia isquêmica pré-natal pode alterar permanentemente o estado oxidativo dos animais, além de atuar na formação do comportamento motor, memória de habituação e ansiedade. As descobertas aqui apresentadas contribuem para ampliar o entendimento acerca do evento de hipóxia isquêmica pré-natal, além de prover ferramentas para o desenvolvimento de mecanismos protetores e preventivos aos possíveis danos por ela causados. / The prenatal hypoxia ischemic (HI) is characterized by a decreased supply of oxygen and nutrients to the fetus during the gestational period that could be followed in a long term by poor concentration and learning, hyperactivity and memory deficits. These damages can persist or become more severe, leading to diseases like epilepsy or cerebral palsy. The oxygen and nutrients privation, as well as maternal stress, anemia, eclampsia and drugs abuse in gestation, may cause oxidative stress during the critical periods of development, and could be the main reason to changes leading to a fetal programming. The aim of the present study was to investigate the association of reactive species generation and consequent formation of oxidative stress in HI adult animals, with systemic alterations in nitric oxide bioavailability, in addition to changes on motor behavior and anxiety, memory maintenance and learning. To hypoxia, we used the model of rats uterine arteries clamping in 18 day of gestation for 45 min, analyzing the pups after 90 days of life. The open field test and elevated plus maze test were used to behavioral analysis, and GPx, SOD and catalase enzymes analysis, besides nitrite quantification, TBARs and protein carbonyl to verify oxidative stress. The results have shown that a hypoxic insult during gestation can cause reduction in GPx enzyme formation associated with elevated nitrite concentration in serum of hypoxic animals when compared to controls, contributing to oxidative damage. Also it was observed an impairment of habituation memory and motor behavior, besides the increased anxiety in hypoxic animals, in contrast to controls. Thus, it can be conclude that prenatal hypoxia ischemia can permanently alter the oxidative status in animals, and also act in formation of motor, habituation memory and anxiety behavior. The findings contribute to increase the knowledge about the prenatal hypoxia ischemia, and provide tools for the development of protective mechanisms and preventions to possible damages caused by this critical event.