Thèse d'exercice : Pharmacie : Nantes : 2003. Mémoire DES : Biologie médicale : Nantes : 2003. / Thèse : 2003NANT014P. Bibliogr. f. 152-157.

Le virus de l'anémie aviaire (CAV) est un virus à ADN simple brin de la famille des Circoviridae qui cause une immunodéficience ainsi qu'une anémie et des hémorragies chez les poulets. Ce virus cause un débalancement chez les populations lymphocytaires affectées telles que les cellules T CD8+ (principalement), CD4+, les macrophages, les lymphocytes B ainsi que les cellules précurseurs des lymphocytes T et les hémocytoblastes (hématopoïétiques). Le CAV entraîne également des dysfonctions immunitaires qui se manifestent par une diminution de la phagocytose chez les macrophages et par la modification de la sécrétion de certaines cytokines comme l'augmentation de l'INFy et la diminution du TCGF, de l'IL-1 et de l'IL-6. L'objectif de cette recherche était de démontrer que le CAV peut affecter in vitro les populations lymphocytaires principalement les cellules précurseurs des lymphocytes T. Nous avons également voulu observer si les diminutions des populations lymphocytaires suite à l'apoptose étaient causées par le CAV. Ainsi, des cellules provenant d'organes lymphoïdes (moelle osseuse, thymus et rate) ont été infectées in vitro par deux souches de CAV soit la souche pathogène CUX-1 et la souche atténuée CIA-1 et leur phénotype analysé par des double-immunomarquages (CD4, CD8, TCR, CD3, CD45, IgM). Aussi, les capacités fonctionnelles de lymphocytes de la rate et du thymus infectés ont été évaluées par la transformation blastique en présence de ConA. La phagocytose des macrophages de moelle osseuse infectés a été vérifiée à l'aide de billes fluorescentes et la sécrétion de cytokines a été quantifiée par des tests ELISA. L'apoptose des cellules a été mesurée par des tests TUNEL et ANNEXIN V/IP. La présence de l'ADN viral codant pour l'apoptine VP3 a été détectée par PCR. Cette étude a été effectuée chez des cellules provenant de poussins à 1 et 7 jours post-éclosion afin de déterminer si la maturation lymphocytaire durant les premiers jours post-éclosion avait un impact sur la défense contre le CAV. Nos résultats ont montré que la différence de pathogénicité des deux souches du CAV était reliée au niveau de l'apoptose précoce et tardive des cellules myéloïdes en culture et des thymocytes induite par l'infection virale. Aussi, nous avons observé que les cellules précurseures, qui étaient les plus affectées par ces virus, ne possédaient pas le TCR-yδ mais exprimaient fortement au moins les marqueurs CD3 et CD8. Nous avons également constaté des baisses fonctionnelles des thymocytes surtout avec la souche pathogène CUX-1. Les lymphocytes spléniques CD8+ étaient aussi affectés par l'infection virale. Par contre, les capacités phagocytaires des macrophages myéloïdes étaient augmentées en présence des virus. Les effets des virus étaient plus évidents chez les poussins de 7jrs d'âge ou commerciaux d'un jour. Les cellules TCR-yδ et les lymphocytes B n'étaient pas affectées par les infections virales. Les conséquences de l'infection virale et de l'apoptose induite par le virus sur l'efficacité de la réponse immune chez le jeune poussin dépendent autant de la souche virale que de la nature de ou des sous-populations de cellules-cibles lymphoïdes ou myéloblastiques et du niveau de maturité immunologique du poussin.

Reproduction de : Thèse d'exercice : Médecine vétérinaire : Toulouse 3 : 2007. / Titre provenant de l'écran titre. Bibliogr. p. 127-135.

Reproduction de : Thèse d'exercice : Médecine vétérinaire : Toulouse 3 : 2007. / Titre provenant de l'écran titre. Bibliogr. f. 48-50.

Mémoire numérisé par la Direction des bibliothèques de l'Université de Montréal.

Thèse d'exercice : Médecine. Médecine générale : Paris 12 : 2006. / Titre provenant de l'écran-titre. Bibliogr. f. 80-85.

Cette thèse traite un sujet pluridisciplinaire, la conception d’un prototype de micro-capteur biologique pour la détection des anticorps de patients susceptibles d'être allergiques.Elle a pour objectif la miniaturisation de la méthode ELISA pour « Enzyme Linked Immune Sorbent Assay » en concevant en « full-custom », avec une technologie CMOS APS, un capteur colorimétrique. Ce capteur est posé en dessous un système micro fluidique contenant l’échantillon biologique à tester, le tout est illuminé via une fibre optique. Le détecteur capte la lumière qui a traversé le micro-tube contenant l’échantillon. Les courants photoniques induits sont liés à la concentration et la coloration de la solution. Le virage colorimétrique de la réaction enzymatique, due à la présence des anticorps dans le sérum, et l’évaluation quantitative de la concentration seront déterminée par la mesure de ces photo-courants. Le capteur pourrait contenir une matrice de 20x20 pixels de détecteurs de couleur ainsi que leur électronique de lecture et de commande. Pour des raisons de coûts, nous avons validé le procédé à l’aide d’une matrice de 4x4 pixels de détecteur de couleur. La réalisation du circuit a été suivie par une caractérisation électrique et colorimétrique. La caractérisation électrique a permis de valider le fonctionnement du bloc de commande du circuit ainsi que celui du pixel (l’électronique de lecture, BDJ). Les résultats de mesures concordent avec ceux de simulations. La caractérisation colorimétrique consiste à mesurer le virage colorimétrique de deux solutions différentes. Les mesures ont pu montrer que notre capteur est plus sensible que le spectromètre utilisé pour mesurer la concentration des deux solutions. Ainsi ce travail de recherche a contribué à la miniaturisation d’une bio-puce colorimétrique dédiée aux tests immunologiques basée sur la méthode ELISA. / This PhD treats a multidisciplinary subject based on the design of a biological micro-sensor prototype for the detection of antibodies of patients susceptible to be allergic.The goal has been the miniaturization of the ELISA "Enzyme Linked Immune Sorbent Assay" method, designing in integrated full-custom colorimetric sensor with a CMOS APS technology. This sensor is installed below a microfluidic system containing the biological test sample, the whole is illuminated via an optical fiber. The sensor detects the light passed through the micro reservoir containing the sample, the induced photo-currents is related to the concentration of the solution. The color change of the enzyme reaction due to the presence of antibodies in the serum, and the quantitative evaluation of the concentration will be determined by the measurement of the induced photo-currents. The sensor may contain a matrix of 20x20 color detector pixels and their reading and control electronics. For cost reasons, we validated the method using a matrix of 4 x 4 pixels of color detectors.The design of electrical device was followed by a colorimetric and electrical characterizations. The latter was used to validate the operation of the control block of the circuit as well as that of the pixel (readout electronics, BDJ). The results brought by measurements are in good agreement with those obtained through simulations. The colorimetric characterization consists in measuring the intensity of the color of two different solutions of different colors. These measurements have shown that our sensor is more sensitive than a spectrometer. Therefore, this research work has contributed to the miniaturization of a colorimetric sensor and its electronic part for the Immunoassay based on the ELISA method.

La grippe est une infection respiratoire causée par le virus influenza, ayant d'importants impacts socio-économiques.La grande capacité mutagénique de ce virus nous oblige à développer notre arsenal pharmacologique vu l'augmentation du nombre de résistances aux antiviraux. Ce projet propose d'utiliser des médicaments accessibles et disponibles pour le traitement de diverses maladies qui sont susceptibles de limiter la propagation virale en ciblant des voies cellulaires essentielles pour la réplication virale (acidification endosomales et niveaux de calcium cellulaire). Les résultats obtenus ont démontré que l'utilisation d'agents lysosomotropes alcalinisants et de modulateurs du calcium inhibait de façon significative la réplication virale.La sensibilité des souches à ces traitements était les suivantes : H1N1 et H3N2 adaptées à la souris, H1N1 humaine, H1N1 porcine et H5N1 et N5N2 [i.e. H5N2] aviaire. Des concentrations plus élevées étaient nécessaires pour un traitement post-infection.La combinaison de traitements entre eux ou avec l'oseltamivir (inhibiteur de la neuraminidase) ont démontré un effet inhibiteur additif significatif. L'inhibition de l'induction de la polymérase acide virale tôt dans l'infection a indiqué que les traitements empêchent le relâchement du génome viral dans la cellule. In vivo, seule la chloroquine (50 mg/kg/jr) inhibait significativement la réplication virale pulmonaire. Néanmoins cette section du projet soutient l'idée d'exploiter des mécanismes cellulaires cruciaux pour le virus afin de développer de nouveaux traitements antiviraux. L'oseltamivir réduit la réplication du virus influenza et l'inflammation excessive dans les poumons durant l'infection. Cependant, les effets du traitement antiviral et d'une réduction de la dose infectieuse, suite aux traitements ou lors d'une infection avec une faible dose infectieuse sur la réponse immune sont mal connus.La seconde partie du projet soutient que malgré les réductions de la sévérité de l'infection et de la réplication virale pulmonaire observées, la réponse immune adaptative T CD8[indice supérieur +] permettrait la génération de cellules mémoires conférant une immunité secondaire hétérotypique. Les résultats obtenus ont démontré qu'une réduction de la charge virale pulmonaire diminuait le recrutement de cellules de l'immunité innée et de lymphocytes T CD8[indice supérieur +] spécifiques au virus au site d'infection, comparativement à forte charge virale pulmonaire.La génération des lymphocytes T CD8[indice supérieur +] dans les organes lymphoïdes secondaires n'était pas affectée. Ces deux situations ont diminué la persistance de la population mémoire dans les poumons ce qui diminue la protection des souris lors de l'infection secondaire. Notre étude aurait donc démontré qu'une diminution de la charge virale pulmonaire pourrait avoir d'importantes conséquences négatives sur la génération de la réponse immune adaptative et mémoire.

Mémoire numérisé par la Direction des bibliothèques de l'Université de Montréal.

Les analyses physico-chimiques des arômes du vin prennent aujourd’hui un essor considérable pour faciliter la prise de décision des professionnels de la vigne et du vin. Des analyses performantes, pour un certain nombre de molécules parmi les plus pertinentes, ont été développées (GC-MS, LC-MS). Cependant les techniques utilisées ne sont pas facilement transposables au sein des exploitations. L’objectif de cette thèse est donc de proposer un nouveau type de dosage peu onéreux et simple à mettre en œuvre. La technique envisagée est le dosage immunologique (tests ELISA) qui permet, pour quelques Euros, de doser directement sur le terrain les molécules pertinentes sans préparation préalable des échantillons. Les molécules visées (alkylméthoxypyrazines et précurseurs cystéinylés de thiols volatiles) sont présentes dans les vins de Cabernet Sauvignon et de Sauvignon blanc. / Analytical methods for the detection and quantification of wines aroma typically utilise HPLC-MS or GC-MS. The methods require some isolation and concentration step preceding the analysis. Enzyme-linked immunosorbent assays (ELISAs) are becoming either alternative complementary analytical tools to conventional methods because of their rapidity, sensitivity, selectivity, and low cost. In this Thesis, the applicability of ELISAs for detection and quantification of precursors of volatile thiols and alkylmethoxypyrazines, which have been isolated from wines, made from Cabernet Sauvignon or Sauvignon Blanc, are described.