Submitted by Alessandra Portugal (alessandradf@ioc.fiocruz.br) on 2013-09-24T19:55:31Z No. of bitstreams: 1 EDNÉA OLIVEIRA DE ABREU.pdf: 1590342 bytes, checksum: 44ea9449e253c4217f2f2125f7a56bb5 (MD5) / Made available in DSpace on 2013-09-24T19:55:31Z (GMT). No. of bitstreams: 1 EDNÉA OLIVEIRA DE ABREU.pdf: 1590342 bytes, checksum: 44ea9449e253c4217f2f2125f7a56bb5 (MD5) Previous issue date: 2012 / Fundação Oswaldo Cruz. Instituto Oswaldo Cruz. Rio de Janeiro, RJ, Brasil / A galectina-3 (Gal-3), lec ctina solúvel ligante de ß-galactosídeos, é encontrada em diferentes compartimentos celulares, modulando diversos processos b biológicos, como proliferação e apoptose. No timo, órgão linfoide central onde aas células T se diferenciam, está presente e no córtex e na medula. Interage com gglicoproteínas de superfície celular e compponentes da matriz extracelular (ECM), influenciando a migração de timócitos, fu undamental para sua diferenciação, com ppropriedades de- adesivas. Em estudos pr révios, notamos uma acentuada diminuiçãão da massa e celularidade do timo de e animais deficientes para o gene da GGal-3 (Gal-3-/-). Considerando a capacidade e da Gal-3 em modular processos biológicos que podem estar envolvidos neste fenômen no, tivemos por objetivo avaliar fatores en nvolvidos com o processo de atrofia tímica oobservado na ausência de Gal-3. Primeirame ente, verificamos a possibilidade da Gal-3 modular a expressão dos genes StAR e CYP11A1, que codificam proteínas envollvidas na síntese de glicorticoides, hormôn nios capazes de causar atrofia tímica. Obsservamos aumento da expressão de StAR nna adrenal e de ambos os genes no timo do os animais Gal-3-/-, correlacionando com os m maiores níveis de corticosterona no soro e n no timo desses animais. Por citometria de fl luxo, analisamos possíveis alterações nas ssubpopulações de timócitos e não observa amos diferenças significativas nas porcentag gens de subpopulações de células definidas p pelos marcadores CD4 e CD8. Porém, ao analisarmos o subgrupo de células duplo--negativas (DN), demonstramos um aumen nto de timócitos DN1 e diminuição de DNN3, isolados de animais Gal-3-/-. Em núme eros absolutos observamos uma diminuição ssignificativa dos timócitos em todas as subp populações analisadas. Na análise das taxas d de morte celular, através da marcação por a anexina V, apesar de não haver diferença s significativa nos timócitos totais, houve aum mento de morte nos timócitos duplo-positivos (DP) de animais Gal-3-/-. Por outro lado, nna análise de proliferação espontânea por iincorporação de bromodeoxiuridina, observ vamos diminuição de proliferação nos timóci itos totais, sendo significativa nas células D DN, DP e simples-positivas (SP)CD4. A aná álise morfológica do timo de animais Gal-33-/-mostrou manutenção das regiões cortica ais e medulares, porém, observamos a preseença de estruturas semelhantes a corpúsculo os de Hassall na medula. Além disso, análiise por imunofluorescência revelou desorga anização da rede epitelial tímica desses anim mais, com detecção de extensas áreas sem c células epiteliais. Ao analisarmos a celularid dade de outros órgãos linfoides, observamoss diminuição no número de células totais da a medula óssea, baço e linfonodos mesentéric cos, mas não nos linfonodos subcutâneos. Em m conjunto, nossos dados sugerem que a Gal--3 contribui para a manutenção da homeosta ase do timo, modulando a diferenciação, prol liferação e morte de timócitos. / Galectin-3 (Gal-3), a sol b-galactoside-binding lectin, is fou nd at different luble usubcellular compartments s, modulating various biological proce esses, such as proliferation and apoptosis . In the thymus, the central lymphoid organ in which T cells differentiate, this lectin is ffound in the cortex and in the medulla. Gal--3 interacts with glycoproteins on the cell surface and in extracellular matrix compponents (ECM), influencing thymocyte mig gration, which is fundamental for their diffeerentiation, with de-adhesive properties. In p previous studies, we noted a serious decrease i in thymus weight and cellularity in Gal-3 defficient mice (Gal-3-/-). Considering Gal-3 abiility to modulate biological processes that ma ay be involved in this phenomenon, the aim off this project was to evaluate factors involved d in the process of thymic atrophy observed i in the absence of Gal-3. We first verified a p possible modulation in the expression of StAR R and CYP11A1 genes, which encode proteinns involved in the synthesis of glucocorticoid ds, hormones that can cause thymic atrophy, bby Gal-3. We observed an increase in the exp pression of StAR in the adrenal and of both h genes in the thymus of Gal-3-/-mice, corr relating with the increased levels of corticost terone in the serum and thymus of these animaals. We analyzed by flow cytometry possiblle alterations in thymocyte subpopulations and we did not observe significant differen nces in the percentages of cell subsets defin ned by CD4 and CD8. However, the analysiis of double-negative (DN) cells showed an iincrease of DN1 and a decrease in DN3 thym mocytes isolated from Gal-3-/-animals. In abso olute numbers we observed a significant decre ease in all thymocyte subpopulations analyzedd. In the analysis of cell death ratio by annexiin V labeling, although no significant differen nces were seen in total thymocytes, there wa as an increase in double-positive (DP) thym mocyte death in Gal-3-/-animals. On the other hand, the spontaneous proliferatioon analysis by bromodeoxyuridin incorpor ration showed a decrease in proliferation of t total thymocytes, being statistically signific cant in DN, DP and simple-positive (SP) )CD4 cells. The morphological analysis of tthe thymus of Gal-3-/-mice showed well defiined cortical and medullary regions, but we o observed the presence of structures similar to Hassall’s bodies in the medulla. Moreoverr, immunofluorescence analysis showed evvident epithelial network disorganization wi ith extensive TEC-free areas. We also analyzeed the cellularity of other lymphoid organs a and observed a decrease in the number of tot tal bone marrow, spleen and mesenteric lym mph node cells but not in subcutaneous lymp ph nodes. Taken together, our data sugges st that Gal-3 contributes to the maintena ance of thymus homeostasis, modulating thymocyte differentiation, proliferation aand cell death.