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Histoquímica e análise digital de imagens em neoplasias cutâneas

MELO JUNIOR, Mario Ribeiro de January 2003 (has links)
Made available in DSpace on 2014-06-12T23:03:25Z (GMT). No. of bitstreams: 2 arquivo8803_1.pdf: 651323 bytes, checksum: 7e9194b273a2f4c98e025b3d8dee8510 (MD5) license.txt: 1748 bytes, checksum: 8a4605be74aa9ea9d79846c1fba20a33 (MD5) Previous issue date: 2003 / Este trabalho avaliou as alterações na expressão de carboidratos e a densidade populacional de células tumorais e Células de Langerhans (CL) a partir da análise computadorizada de imagens comparando as marcações de diferentes lectinas vegetais e imunohistoquímica sobre tecidos neoplásicos cutâneos. Foram selecionados fragmentos teciduais de pele, obtidos cirurgicamente por biópsia excisional, diagnosticados como carcinoma basocelular (CBC, n=35), carcinoma epidermóide (CEp, n=18), tricoepitelioma (TE, n=12), ceratoacantoma (KA, n=19), ceratose seborréica (CS, n=16) e ceratose actínica (CA, n=18), de ambos os sexos com idade média 59,7 anos. Foram testadas as lectinas Concanavalina A (Con A), Wheat germ agglutinin (WGA), Peanut agglutinin (PNA) Ulex europaeus agglutinin (UEA-I) e Tetragonolobus purpurea agglutinin (LTA), todas conjugadas a peroxidase. No estudo imunohistoquímico, a proteína S 100 foi marcada para análise das CL. Os resultados mostram que em relação as neoplasias benignas, observou-se que o KA exibiu padrões aberrantes de expressão dos carboidratos glucose/manose, &#945;-fucose e Dgalactose, evidenciados pela intensa marcação pelas lectinas Con A (94,7%), LTA (84,2%) e PNA (89,4%), respectivamente. Os tumores malignos expressaram padrões de marcação distintos que os diferenciou das outras neoplasias cutâneas; o EpC exibiu marcação significante apenas para lectina PNA, sendo incipiente para as outras lectinas. O CBC exibiu padrões de marcação diferentes daqueles observados nas lesões benignas principalmente, os casos de TE. Não foram observadas variações numéricas estatisticamente significativas das CL entre os tumores malignos, como CBC (19,85±5,81) e CEp (20,08±4,24). Contudo, houve maior número de CL nas lesões benignas; (102,04±17,11), TE (79,74±9,35), CS (122,38±9,92) e KA (110,62±31,4), que também mostraram diferenças entre si e quando comparadas as populações existentes nos tumores malignos e epiderme normal (p<0,05). As células de Langerhans não demonstraram diferenças significativas quanto à média das áreas e volumes das celulares entre as neoplasias benignas e malignas. Desta forma, de acordo com os dados qualitativos e quantitativos obtidos pode-se constatar que ocorrem alterações bioquímicas e populacionais celulares importantes que podem servir como parâmetros adicionais na distinção de tipos histológicos de neoplasias cutâneas
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Carcinomas mamários: enxergando os atípicos entre os típicos

BARBOSA, Bruno Trajano 24 February 2014 (has links)
Submitted by Isaac Francisco de Souza Dias (isaac.souzadias@ufpe.br) on 2016-07-18T19:22:35Z No. of bitstreams: 2 license_rdf: 1232 bytes, checksum: 66e71c371cc565284e70f40736c94386 (MD5) Dissertação_BRUNO TRAJANO BARBOSA_BIBLIOTECA CENTRAL UFPE.pdf: 2346317 bytes, checksum: f4f55bcf337c3b73228a9b7ff0863cdf (MD5) / Made available in DSpace on 2016-07-18T19:22:35Z (GMT). No. of bitstreams: 2 license_rdf: 1232 bytes, checksum: 66e71c371cc565284e70f40736c94386 (MD5) Dissertação_BRUNO TRAJANO BARBOSA_BIBLIOTECA CENTRAL UFPE.pdf: 2346317 bytes, checksum: f4f55bcf337c3b73228a9b7ff0863cdf (MD5) Previous issue date: 2014-02-24 / CAPES / O câncer de mama é uma das neoplasias com as maiores taxas de morbidade e mortalidade em todo o mundo e a principal causa de mortes por câncer em mulheres. Os objetivos deste trabalho foram: a) avaliar a expressão das proteínas HIF-1α, MGAT5, BRCA1 e BRCA2 em tumores de mama humana diagnosticados como carcinoma ductal invasivo (CDI) utilizando imunohistoquímica; b) avaliar a expressão de Gal-1 e Gal-3 e o glicocódigo em glicoconjugados de superfície celular de tumor mamário diagnosticado como carcinoma mucinosopurousando imunohistoquímica e histoquímica com lectinas (Con A, HPA, PNA e UEA-I), respectivamente; c)avaliar a expressão de BRCA1 e BRCA2 em carcinoma ductal invasivo de mama (CDI) bilateralutilizando imunohistoquímica;d) avaliar a expressão de MUC1, Gal-1 e Gal-3 em tumor de mama humana diagnosticado como carcinoma mucinoso com componente invasivo (CDI) utilizando imunohistoquímica. Os resultados foram; a) HIF-1α apresentou correlação estatística direta com a invasão linfonodal (p=0,036), BRCA2 apresentou uma correlação inversa com o receptor de progesterona (p=0,02), MGAT5, embora com imunomarcação positiva, não apresentou nenhuma correlação significativa comfatores clínico-histopatológico analisado (idade, invasão linfonodal e grau nuclear) nem com os marcadores de rotina no diagnóstico (receptor de estrógeno, receptor de progesterona e HER-2); b) a marcação de Con A e HPA foram positivas para histoquimica com lectinas, a imunohistoquímica foi positiva para Gal-1 e Gal-3. Gal-3 foi tambémpositivapara o estroma associado as células tumorais e ao endotélio vascular; c) a positividade para BRCA1 e BRCA 2 bem como para RE, RP e HER-2 não conferiu um aspecto de proteção quanto a progressão do câncer ecomprometimento linfonodal, d) os marcadores avaliados apresentaram expressão diferenciada nos componentescelulares do tumor: BRCA1 (componente mucinoso), BRCA2 (CDI), MUC1 e Gal-3 (citoplasma e membrana apical das células do carcinoma mucinoso e apenas na membrana apical das células de CDI) e Gal-1 (células estromais associadas ao tumor). Desta forma se conclui que: a) HIF-1α e BRCA2 são capazes de serem correlacionados com parâmetros clínico-histopatológicos da rotina diagnóstica e que seua positividade auxilia na caracterização do carcinoma ductal invasivo; b) apesar de ser caracterizado por um bom prognóstico, o carcinoma mucinoso aqui estudado apresentou características glicobiológicas que indicam a aquisição de um fenótipo agressivo; c) os resultados possibilitam a caracterização dos tumores como Luminal B cujo prognóstico se caracteriza como reservado. Eos biomarcadores avaliados BRCA1 e BRCA2 aliados aos da rotina clínica (RP, RE, HER-2 e Ki-67) possibilitaram um melhor entendimento e correlação dos aspectos clínicos, morfológicos e moleculares do câncer de mama bilateral tendo importância terapêutica, epidemiológica e preditiva; d) os resultados possibilitaram um melhor entendimento e correlação dos aspectos morfológicos e moleculares do carcinoma de mama mucinoso misto (com componente invasivo–CDI) auxiliando o diagnóstico apresentado pelos biomarcadores de rotina clínica (RP, RE, HER-2). / Breast cancer is one of the neoplasms with the highest rates of morbidity and mortality worldwide.The aims of this work were: a) evaluate the protein expression of HIF-1α, MGAT5, BRCA1 and BRCA2 in human mammary tumors diagnosed as invasive ductal carcinoma (CDI) using immunohistochemistry; b) evaluate the expression of Gal-1 and Gal-3 and the glycocode of glycoconjugates of cell surface in a mammary tumor diagnosed as pure mucinous carcinomausing immunohistochemistry and lectin histochemistry (Con A, HPA, PNA and UEA-I), respectively; c) evaluate the expression of BRCA1 and BRCA2 in bilateral invasive ductal carcinoma (IDC) of human breast using immunohistochemistry;d) evaluate the expression of MUC1, Gal-1 andGal-3 in human breast tumor diagnosed as mucinous carcinoma with invasive component (IDC) using immunohistochemistry. Results were: a) HIF-1αpresented a direct correlation with lymph node invasion (p=0.036), BRCA2 presented an inverse correlation to progesterone receptor (p=0.02), MGAT5(positive staining)did notpresentcorrelation with neither the clinic-histopathologic features studied (age, lymph node invasion and nuclear grade)nor routine diagnostic parameters (progesterone and estrogen receptorsand HER-2); b) Con A and HPA staining were positive and immunohistochemistry waspositive for Gal-1and Gal-3. Gal-3 was also positive to tumor cells associated stroma and vascular endothelium; c) BRCA1 and BRCA2 positivity as well as ER, PR and HER-2 positivity, did not conferred a protection to cancer aggressive progress where it was also observed a lymph node invasion; d) the tumor markers evaluated presented a positive differential expression in tumor cell components: BRCA1 in mucinous component, BRCA2in IDC cells, MUC1 and Gal-3 in the cytoplasm and membrane of apical cells of mucinous carcinoma and also exclusively in the membrane of apical cells of IDC, Gal-1 was positive in tumor cells associated to stroma. As conclusions it can be presented that: a) HIF-1αand BRCA2 were correlated to clinic-histopathologic parameters of routine diagnosis ans their positivity helps the characterization of invasive ductal carcinoma; b) despite being characterized by a good prognosis breast carcinoma, the mucinous carcinoma here studied presented glycobiology features that indicate the acquisition of an aggressive phenotype; c) results allowed to characterize both tumors as luminal B type which is a poor prognosis tumor and that the biomarkers evaluated, BRCA1 and 2, together with ER, PR and HER-2 contribute to a better understanding and correlations with clinic, morphologic and molecular aspects of the bilateral carcinoma regarding therapy, epidemiology and predictive informations; d) it was possible to conclude that correlation to morphology and molecular features of breast mucinous carcinoma with invasive component (IDC) helps the diagnosis when in association to routine diagnoses biomarkers (PR, ER, HER-2).
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Modificación enzimática de lecitinas

Penci, María Cecilia 08 April 2009 (has links)
El cultivo de oleaginosas constituye uno de los pilares de la agricultura de Argentina, siendo notable el incremento de la superficie cultivada de especies como soja y girasol. La creciente demanda de alimentos y la utilización de estos recursos renovables para la obtención de combustibles ha generado un aumento también de la capacidad de las plantas de extracción de aceites vegetales. Entre los subproductos generados en el proceso de extracción de aceite de soja y girasol se encuentran las gomas, constituidas por fosfolípidos, agua y restos de aceite. La posterior deshidratación da lugar al subproducto denominado lecitinas, comercializado ampliamente para su uso en alimentos debido a sus propiedades emulsionantes. Importantes cantidades de gomas, lecitinas y harina residual del proceso de extracción de aceite se emplean también en la fabricación de alimento balanceado para diferentes especies animales. El incremento de la cantidad de semilla procesada es un incentivo para la obtención de subproductos de mayor valor agregado. Cada fosfolípido contribuye a la funcionalidad de la lecitina, por lo que la modificación de la estructura de estos componentes posibilitaría ampliar las propiedades funcionales de las mismas, dependiendo de la materia prima empleada, el método de extracción y purificación como así también la modificación propuesta. El objetivo general de esta Tesis es ampliar el conocimiento existente acerca de la funcionalidad de lecitinas de soja y girasol mediante la modificación de los fosfolípidos que las constituyen empleando catalizadores enzimáticos, la caracterización de los productos obtenidos y sus propiedades tecnológicas a través de sistemas emulsionados. En el Capítulo 1 se presenta una introducción acerca de las propiedades químicas de los fosfolípidos como así también una descripción del proceso de obtención de lecitinas y las posibles modificaciones físicas y químicas a las que pueden someterse los fosfolípidos, incluyendo la modificación enzimática. En el Capítulo 2 se exponen los conocimientos recavados acerca de los catalizadores biológicos (enzimas) empleados en la modificación de lecitinas, con especial atención en la hidrólisis de los ácidos grasos presentes en la molécula de los fosfolípidos. En el Capítulo 3, se presentan las metodologías implementadas para el estudio de la reacción de hidrólisis enzimática. Se detalla en primer lugar la desarrollada para el seguimiento de los ácidos grasos liberados mediante cromatografía gaseosa y posteriormente la correspondiente a fosfolípidos y sus productos de hidrólisis empleando cromatografía líquida de alta presión. En el Capítulo 4 se exhibe la caracterización realizada para cada uno de los sustratos (lecitina de soja y de girasol) siguiendo métodos oficiales o adaptación de metodologías para tal fin. En el Capítulo 5 se presentan los resultados obtenidos del estudio de la reacción de hidrólisis enzimática empleando fosfolipasas. Entre las variables estudiadas se encuentran la materia prima (distribución de fosfolípidos característica para cada lecitina), pH, temperatura y tipo de catalizador. El Capítulo 6 comienza con una introducción acerca de los sistemas emulsionados. Posteriormente se realiza un estudio sobre las condiciones de formulación de emulsiones empleando fosfolípidos de soja y girasol, para después analizar el comportamiento de emulsiones elaboradas con lecitinas hidrolizadas en un sistema particular. El Capítulo 7 resume las conclusiones generales y expone los trabajos futuros que pueden realizarse a partir de las metodologías desarrolladas en esta Tesis y los conocimientos expuestos. Palabras claves: lecitinas, fosfolípidos, lisofosfolípidos, fosfolipasas, emulsiones. / The cultivation of oilseeds constitutes one of the pillars of the Argentinean agriculture, being notable the increase of the cultivated surface of species such as soybean and sunflower. The increasing demand of food and the utilization of these renewable resources for the obtaining of fuel have generated also an augment of the capacity of the vegetable-oil extraction industry. Sludges are by-products generated in soybean and sunflower oil extraction process constituted by phospholipids, water and remains of oil. The dehydration process transforms them in other by-product called "lecithin", widely commercialized as food additive due to its emulsification properties. Important quantities of sludge, lecithin and soybean flour are also used in the manufacture of feedstuff. The increase of seed processed in the extraction plants is an incentive to obtain by-products with more added values. Every phospholipid contributes to the functionality of the lecithin, so the modification of the molecular structure of these components could extend the functional properties of lecithin, depending on the raw material, the extraction and purification method and the proposed modification. The general aim of this Thesis is to extend the existing knowledge about the functionality of soybean and sunflower lecithins by the enzymatic modification of their phospholids, the product characterization and the study of technological properties by the evaluation of emulsions. In Chapter 1, an introduction of the chemical properties of phospholipids is presented. A general description of the lecithin process and physical and chemical modifications (taking into account enzymatic modifications) is also included. In Chapter 2 the actual knowledge of the biological catalysts (enzymes) used in the modification of lecithins is exposed, with special attention on the hydrolysis of the fatty acid of phospholipids. In Chapter 3, the analytical methodologies implemented for the study of the hydrolysis reaction have been included. The detailed methodology for the pursuit of the free fatty acids by gas chromatography and also a methodology for the phospholipids and their hydrolysis products analysis by high performance liquid chromatography are presented. Chapter 4 shows the substrate characterization for both lecithins using official methods or methodologies adapted to this purpose. In Chapter 5 the results of the enzymatic hydrolysis reaction using phospholipases are presented. The variables assayed were: substrate, pH, temperature and catalyst. Chapter 6 begins with an introduction of emulsified systems. Later on, a general study of the emulsion formulation conditions is presented. After that, the behaviour of emulsions made with modified lecithin is analyzed. Chapter 7 summarizes the general conclusions and exposes the future works that could be possible due the methodologies developed in this thesis and the exposed knowledge from modified lecithin. Keywords: lecithin, phospholipid, lysophospholipid, phospholipases and emulsion.
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Utilización de lipasas en la modificación enzimática de lecitinas crudas

Goñi, M. Laura 30 October 2014 (has links)
El complejo aceitero argentino es uno de los sectores de la industria alimentaria que ha evidenciado mayor crecimiento durante los últimos años. Localmente se manifiesta una creciente necesidad de producir materiales elaborados con mayor valor agregado, tanto para consumo interno como para exportación. Argentina es uno de los principales productores y exportadores de aceite de girasol (Helianthus annuus L.) y la industria local se destaca por su avanzada tecnología y alta competitividad. Los fosfolípidos (PLs) son componentes naturales de las semillas oleaginosas que pasan al aceite durante el proceso de extracción. Estos compuestos deben ser removidos, ya que pueden depositarse durante el transporte o almacenamiento del aceite crudo como así también afectar su estabilidad y características sensoriales. Las gomas, producto del desgomado acuoso de aceites vegetales, constituidas fundamentalmente por agua, PLs y aceite, podrían ser procesadas secas (lecitina cruda) o desaceitadas para obtener productos con un mayor valor agregado adecuados para ser usados como aditivos alimenticios. En la presente tesis se propone estudiar la modificación de lecitinas vegetales mediante la hidrólisis enzimática de lecitinas crudas utilizando fosfolipasas libres para dar lugar a nuevos productos de interés industrial. La tesis se estructura en ocho capítulos, en los Capítulos 1, y 2 se presenta una introducción teórica que incluye una revisión bibliográfica suministrando al lector los conocimientos básicos sobre el área. En el Capítulo 3 se detallan los materiales utilizados y la metodología experimental llevada a cabo para las reacciones de hidrólisis y las técnicas analíticas para cuantificación e identificación de los compuestos presentes en el sustrato y los productos. En el Capítulo 4 se describe el diseño experimental para la hidrólisis enzimática de lecitina cruda de girasol utilizando Lecitase® Ultra como catalizador, se presenta un estudio de las condiciones óptimas o recomendables para la reacción, y se muestran los resultados obtenidos para la caracterización de la materia prima y los productos de hidrólisis, hallándose que no era posible identificar ni cuantificar todas las especies de PLs con las metodologías tradicionales. En el Capítulo 5 se presenta el desarrollo de una técnica analítica para determinación de PLs y sus formas hidrolizadas mediante espectroscopía de resonancia magnética nuclear de fósforo (31P-NMR), junto con una revisión de las distintas técnicas analíticas normalmente utilizadas encontradas en bibliografía. En el Capítulo 6 se reportan los resultados de la cuantificación de PLs por este método, realizando el seguimiento a diferentes tiempos de hidrólisis. Luego en el Capítulo 7 se presentan los estudios realizados para evaluar las propiedades estabilizantes de las lecitinas modificadas en un caso específico (emulsiones lácteas) y se analiza cómo varían las propiedades observadas según los distintos grados de hidrólisis y por ende según la composición de las lecitinas. Finalmente en el Capítulo 8 se presentan las conclusiones de los estudios realizados en esta tesis, junto con sugerencias de trabajos futuros para su continuación y/o profundización en los temas tratados. / In Argentina, the edible oil processing is one of the food industry areas with highest growing levels in the last years. Locally, an increasing demand has arisen for the production of manufactured materials with higher added value, both for internal market and for export. Argentina is one of the major producers and exporters of sunflower oil (Helianthus annuus L.), and the local industry is characterized for its advanced technology and high competitiveness. Phospholipids (PLs) are natural components of oily seeds which are extracted along with the oil in the extraction process and must be removed from the oil in order to prevent their settling during crude oil shipping or storing. They also affect oil stability and sensorial properties. Gums, which are by-products from the aqueous degumming of vegetable oils and are constituted mainly by water, PLs and oil, might be processed dried (crude lecithin) or deoiled, in order to obtain products with higher added value, suitable for applications as food additives. In this thesis, a study concerning the modification of sunflower lecithin by means of enzymatic hydrolysis of crude lecithin using free phospholipases is proposed in order to obtain new products of interest for industrial applications. The thesis is divided in eight chapters. In Chapters 1 and 2 a theoretical introduction is presented, including a literature review to provide the reader with the basic concepts on the topic. In Chapter 3 the materials and experimental methodology used for the hydrolysis reactions, as well as the analytical techniques for the quantitation and identification of the compounds present in the substrate and reaction products are described in detail. In Chapter 4 the experimental design for the enzymatic hydrolysis of crude sunflower lecithin using Lecitase® Ultra as catalyst is described, presenting a study of the optimal or recommended reaction conditions. Raw material and hydrolysis products characterization results are shown, concluding that it is not possible to identify and quantify all the PLs species with the traditional methodologies. In Chapter 5 the development of an analytical technique for the determination of PLs and their hydrolyzed forms by phosphorus nuclear magnetic resonance spectroscopy (31P-NMR) is presented, together with a review of different analytical techniques usually found in the literature. In Chapter 6 the PLs quantification results using this method are reported for different hydrolysis times. In Chapter 7 the evaluation of the stabilizing properties of modified lecithins in a specific application (dairy emulsions) is presented, as well as an analysis of the variation of the observed properties for different hydrolysis degrees and therefore for different lecithin composition. Finally, in Chapter 8 the conclusions of the thesis are summarized, together with future work suggestions for the continuation and/or deepening of the studied topics.
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Estudo dos fatores envolvidos no processo de atrofia tímica observado em camundongos deficientes para o gene da galectina-3.

Abreu, Ednéa Oliveira de. January 2012 (has links)
Submitted by Alessandra Portugal (alessandradf@ioc.fiocruz.br) on 2013-09-24T19:55:31Z No. of bitstreams: 1 EDNÉA OLIVEIRA DE ABREU.pdf: 1590342 bytes, checksum: 44ea9449e253c4217f2f2125f7a56bb5 (MD5) / Made available in DSpace on 2013-09-24T19:55:31Z (GMT). No. of bitstreams: 1 EDNÉA OLIVEIRA DE ABREU.pdf: 1590342 bytes, checksum: 44ea9449e253c4217f2f2125f7a56bb5 (MD5) Previous issue date: 2012 / Fundação Oswaldo Cruz. Instituto Oswaldo Cruz. Rio de Janeiro, RJ, Brasil / A galectina-3 (Gal-3), lec ctina solúvel ligante de ß-galactosídeos, é encontrada em diferentes compartimentos celulares, modulando diversos processos b biológicos, como proliferação e apoptose. No timo, órgão linfoide central onde aas células T se diferenciam, está presente e no córtex e na medula. Interage com gglicoproteínas de superfície celular e compponentes da matriz extracelular (ECM), influenciando a migração de timócitos, fu undamental para sua diferenciação, com ppropriedades de- adesivas. Em estudos pr révios, notamos uma acentuada diminuiçãão da massa e celularidade do timo de e animais deficientes para o gene da GGal-3 (Gal-3-/-). Considerando a capacidade e da Gal-3 em modular processos biológicos que podem estar envolvidos neste fenômen no, tivemos por objetivo avaliar fatores en nvolvidos com o processo de atrofia tímica oobservado na ausência de Gal-3. Primeirame ente, verificamos a possibilidade da Gal-3 modular a expressão dos genes StAR e CYP11A1, que codificam proteínas envollvidas na síntese de glicorticoides, hormôn nios capazes de causar atrofia tímica. Obsservamos aumento da expressão de StAR nna adrenal e de ambos os genes no timo do os animais Gal-3-/-, correlacionando com os m maiores níveis de corticosterona no soro e n no timo desses animais. Por citometria de fl luxo, analisamos possíveis alterações nas ssubpopulações de timócitos e não observa amos diferenças significativas nas porcentag gens de subpopulações de células definidas p pelos marcadores CD4 e CD8. Porém, ao analisarmos o subgrupo de células duplo--negativas (DN), demonstramos um aumen nto de timócitos DN1 e diminuição de DNN3, isolados de animais Gal-3-/-. Em núme eros absolutos observamos uma diminuição ssignificativa dos timócitos em todas as subp populações analisadas. Na análise das taxas d de morte celular, através da marcação por a anexina V, apesar de não haver diferença s significativa nos timócitos totais, houve aum mento de morte nos timócitos duplo-positivos (DP) de animais Gal-3-/-. Por outro lado, nna análise de proliferação espontânea por iincorporação de bromodeoxiuridina, observ vamos diminuição de proliferação nos timóci itos totais, sendo significativa nas células D DN, DP e simples-positivas (SP)CD4. A aná álise morfológica do timo de animais Gal-33-/-mostrou manutenção das regiões cortica ais e medulares, porém, observamos a preseença de estruturas semelhantes a corpúsculo os de Hassall na medula. Além disso, análiise por imunofluorescência revelou desorga anização da rede epitelial tímica desses anim mais, com detecção de extensas áreas sem c células epiteliais. Ao analisarmos a celularid dade de outros órgãos linfoides, observamoss diminuição no número de células totais da a medula óssea, baço e linfonodos mesentéric cos, mas não nos linfonodos subcutâneos. Em m conjunto, nossos dados sugerem que a Gal--3 contribui para a manutenção da homeosta ase do timo, modulando a diferenciação, prol liferação e morte de timócitos. / Galectin-3 (Gal-3), a sol b-galactoside-binding lectin, is fou nd at different luble usubcellular compartments s, modulating various biological proce esses, such as proliferation and apoptosis . In the thymus, the central lymphoid organ in which T cells differentiate, this lectin is ffound in the cortex and in the medulla. Gal--3 interacts with glycoproteins on the cell surface and in extracellular matrix compponents (ECM), influencing thymocyte mig gration, which is fundamental for their diffeerentiation, with de-adhesive properties. In p previous studies, we noted a serious decrease i in thymus weight and cellularity in Gal-3 defficient mice (Gal-3-/-). Considering Gal-3 abiility to modulate biological processes that ma ay be involved in this phenomenon, the aim off this project was to evaluate factors involved d in the process of thymic atrophy observed i in the absence of Gal-3. We first verified a p possible modulation in the expression of StAR R and CYP11A1 genes, which encode proteinns involved in the synthesis of glucocorticoid ds, hormones that can cause thymic atrophy, bby Gal-3. We observed an increase in the exp pression of StAR in the adrenal and of both h genes in the thymus of Gal-3-/-mice, corr relating with the increased levels of corticost terone in the serum and thymus of these animaals. We analyzed by flow cytometry possiblle alterations in thymocyte subpopulations and we did not observe significant differen nces in the percentages of cell subsets defin ned by CD4 and CD8. However, the analysiis of double-negative (DN) cells showed an iincrease of DN1 and a decrease in DN3 thym mocytes isolated from Gal-3-/-animals. In abso olute numbers we observed a significant decre ease in all thymocyte subpopulations analyzedd. In the analysis of cell death ratio by annexiin V labeling, although no significant differen nces were seen in total thymocytes, there wa as an increase in double-positive (DP) thym mocyte death in Gal-3-/-animals. On the other hand, the spontaneous proliferatioon analysis by bromodeoxyuridin incorpor ration showed a decrease in proliferation of t total thymocytes, being statistically signific cant in DN, DP and simple-positive (SP) )CD4 cells. The morphological analysis of tthe thymus of Gal-3-/-mice showed well defiined cortical and medullary regions, but we o observed the presence of structures similar to Hassall’s bodies in the medulla. Moreoverr, immunofluorescence analysis showed evvident epithelial network disorganization wi ith extensive TEC-free areas. We also analyzeed the cellularity of other lymphoid organs a and observed a decrease in the number of tot tal bone marrow, spleen and mesenteric lym mph node cells but not in subcutaneous lymp ph nodes. Taken together, our data sugges st that Gal-3 contributes to the maintena ance of thymus homeostasis, modulating thymocyte differentiation, proliferation aand cell death.
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Avaliação da adição de emulsificantes do tipo lecitinas modificadas na cristalização de manteiga de cacau e de chocolate amargo / Evaluation of addition of modified lecithins in the crystallization of cocoa butter and dark chocolates

Miyasaki, Eriksen Koji, 1986- 12 June 2013 (has links)
Orientadores: Theo Guenter Kieckbusch, Valdecir Luccas / Dissertação (mestrado) - Universidade Estadual de Campinas, Faculdade de Engenharia Química / Made available in DSpace on 2018-08-24T05:00:36Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Miyasaki_EriksenKoji_M.pdf: 5704488 bytes, checksum: 8c68d44e4acedc12c047e6f34e53701d (MD5) Previous issue date: 2013 / Resumo: As lecitinas modificadas de soja estão sendo introduzidas no processamento de chocolates como alternativa à lecitina padrão para melhorar as propriedades reológicas e de cristalização. A influência da adição de 0,2 a 0,8% (m/m) de lecitinas hidrolisada enzimaticamente, hidroxilada, em pó e acetilada na cristalização da manteiga de cacau foi avaliada. No chocolate, foram adicionadas as lecitinas hidrolisada enzimaticamente e hidroxilada nas concentrações de 0,1 a 0,3% (m/m). Os resultados, para ambos os casos, foram comparados com as amostras contendo lecitina padrão. Para quantificar o efeito destes aditivos foram determinadas as propriedades de fusão e de cristalização por DSC, as características reológicas utilizando um reômetro, a cinética de cristalização usando um Espectrômetro de Ressonância Magnética Nuclear, e o temper index por meio de um temperímetro. Barras de chocolate foram armazenadas a 25°C por 62 dias com o monitoramento dos eventos de fusão por DSC, de textura por texturômetro, das transformações polimórficas por difração de Raios-X e do desenvolvimento de fat bloom por Microscopia Eletrônica de Varredura. A adição de emulsificantes na manteiga de cacau e no chocolate promoveu uma aceleração da cristalização, mas apenas nas concentrações mais baixas. A adição de lecitinas modificadas à manteiga de cacau diminuiu a temperatura máxima de fusão e aumentou a entalpia de cristalização e de fusão. O uso de lecitinas modificadas no chocolate não apresentou vantagens em termos reológicos, se comparadas ao de lecitina padrão. No armazenamento, algumas amostras com lecitinas modificadas foram capazes de retardar a transição polimórfica e a forma VI foi obtida apenas na amostra contendo 0,2% de lecitina padrão. No geral, a transição polimórfica foi antecipada usando maior concentração de lecitina padrão e de lecitina hidrolisada, e retardada com maior quantidade de lecitina hidroxilada. As propriedades de fusão não apresentaram uma tendência definida ao longo do tempo e com a variação de concentração dos emulsificantes. A tensão de ruptura aumentou em chocolates com menores concentrações de lecitinas e uma diminuição significativa desta resistência foi observada a partir de 21 dias de armazenamento nos chocolates com maiores concentrações de emulsificantes. O desenvolvimento do fat bloom não apresentou uma causa única, ocorrendo com e sem transição de fases, e não foi encontrada correlação definida com o tamanho médio de partículas e o índice de temperagem. / Abstract: Modified soy lecithins are being introduced in chocolates processing as an alternative to standard lecithin to improve the rheological characteristics and the crystallization patterns. The influence of the amount added (0.2 to 0.8% (w/w)) and the types of these new additives (hydroxylated, enzymatically hydrolyzed, acetylated, defatted or powder lecithins) on cocoa butter was evaluated. In dark chocolate, enzymatically hydrolyzed and hidroxilated lecithin were added at concentration of 0.1 to 0.3%(w/w) to evaluate mass crystallization. The results in both cases were compared to samples containing standard lecithin. The influence of the addition of lecithins was quantified by determining the melting and crystallization events with a DSC, the rheological characteristics using a rheometer, the crystallization kinetics using a Nuclear Magnetic Resonance Spectrometer, the temper index using a temperimeter. Chocolate bars were stored for 62 days at 25°C, monitoring their melting properties by DSC, texture properties with a texturometer, the polymorphic events by X-rays diffraction and the fat bloom development by Scanning Electron Microscopy. The addition of the emulsifiers to cocoa butter and chocolate accelerated the fat crystallization rates, but only at the lower concentrations. The use of modified lecithins in cocoa butter decreased the maximum melting temperature and increased the crystallization and melting enthalpies. No rheological improvements were detected with the use of modified lecithins in chocolates, compared to the addition of standard lecithin. During the storage period, some chocolates with modified lecithins were able to restrain polymorphic transitions and the polymorphic form VI was only achieved in chocolates containing 0.2 % of standard lecithin. As a general trend, increasing concentrations of standard or hydrolyzed lecithins in dark chocolates anticipate the polymorphic transitions and increasing amount of hydroxylated lecithins delayed these events. No correlation was found between the melting properties with the storage period and with the emulsifier's concentration. Increasing values of mechanical resistance (snap test) were detected in chocolates with the lowest lecithin concentrations and a significant decrease was observed in chocolates with the highest lecithin concentrations after 21 days of storage. The fat bloom development showed no single cause, occurring with and without phase transitions, and there was no clear correlation with the mean particle size and the temper index. / Mestrado / Engenharia de Processos / Mestre em Engenharia Química
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Caracterização de lecitinas comerciais por espectrometria de massas ambiente com ionização sonic-spray / Characterization of commercial lecithins by easy ambient sonic-spray ionization mass spectrometry

Fernandes, Gabriel Deschamps, 1988- 19 August 2018 (has links)
Orientador: Daniel Barrera Arellano / Dissertação (mestrado) - Universidade Estadual de Campinas, Faculdade de Engenharia de Alimentos / Made available in DSpace on 2018-08-19T21:15:47Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Fernandes_GabrielDeschamps_M.pdf: 1854677 bytes, checksum: e57833484e8f9ad4a136187bed59d8d2 (MD5) Previous issue date: 2012 / Resumo: Os fosfolipídios são definidos como o grupo de moléculas que contém um grupamento fosfato. Por apresentarem características anfipáticas, este grupo de moléculas se organiza naturalmente em bicamadas, originando as membranas dos seres vivos. Industrialmente são capazes de estabelecer interfaces óleo/água, possibilitando a formação e estabilização de emulsões. Este grupo de moléculas é bastante diverso quimicamente, sendo os principais componentes a fosfatidilcolina, fosfatidiletanolamina, fosfatidilserina, fosfatidilinositol, ácido fosfatídico e esfingomielina. A determinação e quantificação desses compostos é bastante laboriosa tanto nos meios industriais como acadêmicos, envolvendo, entre outras, etapas de digestão ácida e incineração. A espectrometria de massas desponta como uma técnica bastante favorável à análise de lipídios, englobando desde estudos clínicos até de biocombustíveis. Mais recentemente, as técnicas de espectrometria de massas com ionização ambiente facilitaram o acesso a este tipo de tecnologia, diminuindo os custos de implantação e principalmente de operação. A ionização ambiente por sonic-spray (EASI, easy ambient sonic-spray ionization) denota-se como uma técnica adequada à análise de lipídios, uma vez que não aplica alta voltagem e alta temperatura, prevenindo, portanto possíveis degradações destas moléculas. Este trabalho teve como objetivo, estudar a ionização de fosfolipídios (PL) e triacilgliceróis (TAG) frente à técnica EASI-MS, bem como, estudar a viabilidade técnica da caracterização de lecitinas comerciais por meio da técnica EASI-MS. Quanto à ionização dos lipídios, foi possível observar, nas condições de estudo, que dentro de uma mesma classe (PL ou TAG) a intensidade de ionização diminui com o aumento da cadeia dos ácidos graxos e aumenta com o aumento das insaturações. Para o estudo de caracterização foram utilizadas seis amostras de lecitina de soja comercial, obtidas por diferentes processos. As amostras foram diluídas em clorofórmio e submetidas à análise de EASI-MS, nos modos positivo e negativo. Nos espectros de EASI(+)-MS, os íons mais representativos foram os íons correspondentes à fosfatidilcolina e aos triacilgliceróis, enquanto que, nos espectros de EASI(-)-MS os íons mais representativos corresponderam à fosfatidiletanolamina, aos ácidos graxos livres e aos glicofosfolipídios. A técnica EASI-MS mostrou-se eficiente na caracterização das lecitinas comerciais. Sendo uma técnica rápida e que não exige preparo de amostra / Abstract: Phospholipids are defined as the group of molecules containing a phosphate grouping. As they have amphipathic characteristics, this group of molecules naturally organizes bilayer, origin the membranes of living organism and are able to establish an industrial oil / water interface, allowing the formation and stabilization of emulsions. This group of molecules is very chemically different; the main components are phosphatidylcholine, phosphatidylethanolamine, phosphatidylserine, phosphatidylinositol, phosphatidic acid and sphingomyelin. The determination and quantification of these compounds is very laborious for the academic and industrial circles, involving, among others, several steps, like acid digestion and incineration. Mass spectrometry is emerging as a very favorable tool of lipids analysis, since clinical and biofuel studies. Recently, the techniques of ambient mass spectrometry have facilitated the access to this type of technology, reducing deployment costs and especially the operation. Easy ambient sonic-spray ionization (EASI) denotes as a suitable technique to analyze the lipids, since it does not apply high voltage and high temperature, and thereby prevent possible degradation of these molecules. This work aimed to study the ionization of phospholipids (PL) and triacylglycerols (TAG) in EASIMS technique, as well as studying the technical feasibility of the characterization of commercial lecithins by EASI-MS. On the lipid ionization, it was observed, under the conditions of the study, that within the same class (TAG or PL) the ionization intensity decreases with increasing of fatty acids chains and increases with increasing of unsaturation. For characterization studies were used six samples of commercial soy lecithin, obtained by different processes. Samples were diluted in chloroform and analyzed for EASI-MS in positive and negative ion modes. In the spectra of EASI (+)- MS, the most representing ions are corresponding to triglycerides and phosphatidylcholine, whereas in the spectra of EASI (-)-MS the most representative ions correspond to the phosphatidylethanolamine, the free fatty acids and glicophospholipidios. The EASI-MS technique was efficient in the characterization of commercial lecithins. As a fast technique and does not require sample preparation / Mestrado / Tecnologia de Alimentos / Mestre em Tecnologia de Alimentos

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