Submitted by Cássio da Cruz Nogueira (cassionogueirakk@gmail.com) on 2017-10-18T16:07:55Z No. of bitstreams: 2 license_rdf: 0 bytes, checksum: d41d8cd98f00b204e9800998ecf8427e (MD5) Dissertacao_InfeccaoHumanaLeishmania.pdf: 1290203 bytes, checksum: 6da944f9d94deadb397ed06c6ab44357 (MD5) / Approved for entry into archive by Edisangela Bastos (edisangela@ufpa.br) on 2017-12-01T14:02:34Z (GMT) No. of bitstreams: 2 license_rdf: 0 bytes, checksum: d41d8cd98f00b204e9800998ecf8427e (MD5) Dissertacao_InfeccaoHumanaLeishmania.pdf: 1290203 bytes, checksum: 6da944f9d94deadb397ed06c6ab44357 (MD5) / Made available in DSpace on 2017-12-01T14:02:34Z (GMT). No. of bitstreams: 2 license_rdf: 0 bytes, checksum: d41d8cd98f00b204e9800998ecf8427e (MD5) Dissertacao_InfeccaoHumanaLeishmania.pdf: 1290203 bytes, checksum: 6da944f9d94deadb397ed06c6ab44357 (MD5) Previous issue date: 2010 / Foi realizado um estudo transeccional em um coorte de 946 indivíduos de ambos os sexos, acima de um ano de idade, residentes em área endêmica de leishmaniose visceral americana(LVA), no município de Barcarena, nordeste do Pará,Brasil.O objetivo deste estudo foi identificar indivíduos com a infecção sintomática e/ou assintomática causada pela Leishmania(L.) chagasi e estudar clinica e imunologicamente os dois tipos de infecção. Para o diagnóstico da infecção foi usado a reação de imunofluorescência indireta(RIFI) e a reação intradérmica de Montenegro(RIM), com amastigotas e antígenos de promastigotas de Leishmania(L.) chagasi , respectivamente. Os resultados foram marcados com + a ++++: Para a RIFI, os títulos sorológicos de 80-160 e de 320-640 foram dados de + a ++; em relação aos títulos de 1.280-2.560 e de 5.120-10.240 como +++ e ++++, respectivamente. Para a RIM, as reações exacerbadas (acima de 16mm) como ++++; as reações fortemente: positivas(13-15mm) como +++; moderadamente positivas (9-12mm) como ++, e fracamente positiva (5-8mm) como +. A análise da diferença entre os perfis clínico-imunológicos da infecção foi baseada no programa BioEstat 4.0 e os testes Quiquadrado e Binomial com confiança de 95%. Durante o estudo, 12 pessoas infectadas mostraram os títulos sorológicos elevados (1.280 a 10.240 IgG) com reações negativas de RIM: 5 crianças e 2 adultos desenvolveram LVA com títulos de RIFI do 2.560 (IgG) e RIM negativa. Foram detectadas 2 crianças e 3 adultos que desenvolveram infecções sub-clínicas com títulos de RIFI de 1.280 (IgG) e RIM negativa. Além disso, os dois testes permitiram a identificação de 5 perfis clínico-imunológicos diferentes entre os 231 casos da infecção diagnosticados, como se segue: 1. 77% com infecção assintomática(IA), com a RIM que varia de +/++++ e RIFI negativa; 2. 2% com infecção sintomática(IS = LVA) e 3. 1,3% com infecção sub-clínica oligossintomática (IOS), grupos com RIM negativa e RIFI que varia de +++/++++; 4. 9.9% com uma infecção sub-clínica resistente (ISR), mostrando RIM e RIFI com +/++, e 5. 9.8% com uma infecção inicial indeterminada (III), com RIM negativa e RIFI +/++. A respeito da evolução da infecção, a observação principal era que somente um único caso IS( =AVL) evoluiu do perfil III(infecção inicial indeterminada), de uma amostra de 23 casos, enquanto a maioria das infecções evoluíram aos perfis ISR(9 casos) ou ISO(5 casos), sendo que os últimos 8 casos permaneceram como perfil III. / A transeccional study was carried out in a cohort of 946 individuals of both sexes, from one year old and upwards, living in endemic area of American visceral leishmaniasis (AVL), municipality of Barcarena, northeast Pará, Brazil. The major aim of this study was to identify individuals with the symptomatic and/or asymptomatic infection due to Leishmania (L.) chagasi, and to study the two types of infection, both clinically and immunologicall. For diagnosis of infection there were used the indirect fluorescent antibody test (IFAT) and the leishmanin skin test (LST) with amastigotes and promastigotes antigens of Leishmania (Leishmania) chagasi, respectively. Results were scored as + to ++++: for the IFAT, serological titres (IgG) of 80-160 and 320-640 were given + and ++, with those of 1.280-2.560 and 5.120- 10.240 as +++ and ++++ respectively. For the LST, exacerbated reactions (³16mm) were regarded as ++++, strongly positive (13-15mm) as +++, moderately positive (9- 12mm) as ++, and weakly positive (5-8mm) as +. Analysis of the difference among the clinical-immunological profiles of infection was based on the programme BioEstat 4.0 and the X2 and Binomial tests with confidence of 95%. During the study, 12 infected persons showed high serological titres (1.280 to 10.240 IgG) with negative LST reactions: 5 children and 2 adults developed of AVL with IFAT titres ³ 2.560 (IgG) and a negative LST, and 2 children and 3 adults developed subclinical infections with IFAT titre of 1.280 (IgG) and a negative LST. In addition, the two tests enabled the identification of 5 different clinical-immunological profiles within the total of 231 cases of infection diagnosed, as follows: 1. 77% with asymptomatic infection (AI), with LST ranging from +/++++ and a negative IFAT; 2. 2% with symptomatic infection (SI = AVL) and 3. 1.3% with subclinical oligosymptomatic infection (SOI), both groups with a negative LST and IFAT ranging from +++/++++; 4. 9.9% with a subclinical resistant infection (SRI), showing both LST and IFAT with +/++, and 5. 9.8% with an indeterminate initial infection (III), with a negative LST and IFAT +/++. Regarding evolution of infection, the major observation was that only a single case of SI (= AVL) evolved from the profile III (23 cases), from which most infections evolved to the profiles SRI (9 cases) or SOI (5 cases) while the lastly 8 cases remained as III.

Made available in DSpace on 2014-08-26T17:15:19Z (GMT). No. of bitstreams: 2 license.txt: 1748 bytes, checksum: 8a4605be74aa9ea9d79846c1fba20a33 (MD5) 117.pdf: 2530040 bytes, checksum: 349e9b913a8742a2b359934a532ec37d (MD5) Previous issue date: 2007 / A pesquisa consistiu da avaliação da Reação Intradérmica de Montenegro – IDRM – como instrumento para inquéritos epidemiológicos e diagnóstico da Leishmaniose Tegumentar Americana - LTA, em duas populações, respectivamente, 400 adultos sadios (Estudo I) e 302 pacientes suspeitos de LTA (Estudo II). O Estudo I foi realizado em região considerada indene de LTA, em Santa Maria, Rio Grande do Sul, e visou a comparação entre a resposta ao antígeno de Montenegro e aos preservativos timerosal e fenol, analisando, entre outros, parâmetros como inocuidade, especificidade e padronização clínica do preservativo, as respostas após 48 horas e em torno de 2 semanas após a aplicação e a Reação em Cadeia da Polimerase (PCR) em casos positivos ao antígeno. O Estudo II, realizado no Instituto de Pesquisa Clínica Evandro Chagas- IPEC/FIOCRUZ envolveu, entre outros aspectos, a comparação entre o comportamento da IDRM e os testes de diagnóstico para detecção de Leishmania, bem como o estabelecimento de protocolo de padronização clínica da técnica de aplicação do teste e leitura da reação. Os resultados mostraram que a utilização do timerosal como veículo do Teste de Montenegro em voluntários sadios foi responsável por 12% de falso positivos ao teste. No entanto, cerca de 29,5% dos 203 voluntários sadios testados foram IDRM- positivos e 1 dos 151 voluntários testados foi positivo `a PCR, evidenciando infecção subclínica por Leishmania na área do Estudo I. Foram evidenciadas reações tardias em 4,5% dos indivíduos sadios avaliados, mas nenhum dos pacientes apresentou tais reações. O Teste de Montenegro pode ser considerado confortável e seguro para indivíduos sadios e pacientes com LTA e suspeitos, não tendo sido verificadas reações adversas sistêmicas e tendo sido as reações locais discretas e presentes em 21,5% e 11,2% dos pacientes, respectivamente. Verificou-se que o método de leitura da IDRM por meio do decalque em papel deve ser usado como alternativa à leitura direta, desde que realizado por profissional obedecendo protocolo padronizado. Entre os métodos de diagnóstico da LTA avaliados no Estudo II, A PCR foi o mais sensível (92,3%), superando a cultura (78%), a histopatologia (40%) e o imprint (24%). A co-positividade IDRM - PCR foi de 71,4% e a acurácia de 81,3%. O conjunto dos resultados encontrados reforça a constatação de que a IDRM é o melhor instrumento para inquéritos de LTA, e, como método diagnóstico, apresenta sensibilidade de 89%, especificidade de 71,4%, valor preditivo positivo de 68,7% e valor preditivo negativo de 90,3%. / The research consisted of the evaluation of Montenegro skin test- MST- as an instrument for epidemiological surveys and diagnosis of American Tegumentary Leishmaniasis- ATL in two populations, respectively, 400 healthy adults (Study I) and 302 ATL suspicious patients (Study II). The Study I was performed in an ATL non endemic area, in Santa Maria, Rio Grande do Sul, and it evaluates MST positivity and the preservatives timerosal and phenol, analyzing, among other, parameters as innocuousness, specificity and clinical standardization of the preservative, the reactions after 48 hours and around 2 weeks after the application and the PCR reaction in positive cases to the antigen. The Study II, developed at the Institute of Clinical Research Evandro Chagas - IPEC / FIOCRUZ involved, among other aspects, the comparison between the MST response and the leishmaniasis diagnostic tests, as well as the establishment of protocol of clinical standardization of the MST. The results showed that the use of the timerosal as vehicle of MST in healthy volunteers was responsible for 12% - of false positive results to the test. However, about 29,5% of the 203 healthy volunteers tested were MST - positive and 1 of the 151 tested volunteers were PCR- positive, evidencing subclinical infection for Leishmania in the area of Study I. Late reactions were evidenced in 4,5% of the healthy individuals, but none of the patients presented such reactions. MST can be considered comfortable and safe for healthy volunteers and ATL patients, not having been verified systemic adverse reactions and having been the local reactions presents in 21,5% and 11,2% of the two groups, respectively. It was verified that the method of MST reading of through the paper should be used as alternative to the direct reading, since accomplished by professional obeying standardized protocol. Among the methods of ATL diagnosis in the Study II, PCR was the most sensitive (92,3%), overcoming culture (78%), histopathology (40%) and imprint (24%). The co-positivity MST-PCR was of 71,4% and the agreement of 81,3%. These results reinforces that MST is the best instrument for surveys in ATL endemic areas and, as method of diagnosis, it presents sensitivity of 89%, specificity of 71,4%, preditive positive value of 68,7% and preditive positive value of 90,3 %.

Toxinas termo-lábeis expressas por Escherichia coli enterotoxigênica (LT-I, LT-IIa e LT-IIb) são adjuvantes sistêmicos e de mucosa. Essas proteínas apresentam reduzida identidade (<14%) em suas subunidades B e ligação a receptores distintos, o que pode resultar em propriedades biológicas diferenciais. O objetivo do trabalho foi avaliar a resposta imune induzida pela toxina LT-IIa e seu pentâmero B (LT-IIaB) administradas pelas vias transcutânea e intradérmica. Inicialmente as proteínas foram expressas em E. coli, purificadas e avaliadas quanto à funcionalidade in vitro. Numa segunda etapa, as propriedades imunomoduladoras de LT-IIa e LT-IIaB, imunogenicidade e atividade adjuvante, foram avaliadas em modelo murino. A resposta imune (humoral e celular) induzida contra ovalbumina (OVA), aplicada como antígeno, foi determinada. Os resultados demonstram que as atividades adjuvantes induzidas por LT-IIa e LT-IIaB variam de acordo com a via de inoculação e que as holotoxinas LT-I e LT-IIa induzem graus de inflamação e ativação de resposta imune distintos em camundongos. / Heat-labile toxins expressed by enterotoxigenic Escherichia coli (LT-I, LT-IIa and LT-IIb) are potent systemic and mucosal adjuvants. These proteins have low identity (<14%) in their B subunits and bind to different receptors, which may result in differential biological properties. The objective of this work was to evaluate the immune response induced by LT-IIa toxin and its pentameric B subunit (LT-IIaB) delivered by transcutaneous and intradermic routes. Initially the proteins of interest were expressed in recombinant E. coli strains, purified and tested for functionality in vitro. In a second moment, the immunomodulatory properties of LT-IIa and LT-IIaB, immunogenicity and adjuvant activity, were evaluated in mouse model. The humoral and cellular immune responses induced against ovalbumin (OVA) used as antigen were determined. The results show that the adjuvant activity of LT-IIa and its B pentamer depends on the route of inoculation and that LT-I and LT-IIa differ both on induction of inflammation and activation of immune responses in mice.

Toxinas termo-lábeis expressas por Escherichia coli enterotoxigênica (LT-I, LT-IIa e LT-IIb) são adjuvantes sistêmicos e de mucosa. Essas proteínas apresentam reduzida identidade (<14%) em suas subunidades B e ligação a receptores distintos, o que pode resultar em propriedades biológicas diferenciais. O objetivo do trabalho foi avaliar a resposta imune induzida pela toxina LT-IIa e seu pentâmero B (LT-IIaB) administradas pelas vias transcutânea e intradérmica. Inicialmente as proteínas foram expressas em E. coli, purificadas e avaliadas quanto à funcionalidade in vitro. Numa segunda etapa, as propriedades imunomoduladoras de LT-IIa e LT-IIaB, imunogenicidade e atividade adjuvante, foram avaliadas em modelo murino. A resposta imune (humoral e celular) induzida contra ovalbumina (OVA), aplicada como antígeno, foi determinada. Os resultados demonstram que as atividades adjuvantes induzidas por LT-IIa e LT-IIaB variam de acordo com a via de inoculação e que as holotoxinas LT-I e LT-IIa induzem graus de inflamação e ativação de resposta imune distintos em camundongos. / Heat-labile toxins expressed by enterotoxigenic Escherichia coli (LT-I, LT-IIa and LT-IIb) are potent systemic and mucosal adjuvants. These proteins have low identity (<14%) in their B subunits and bind to different receptors, which may result in differential biological properties. The objective of this work was to evaluate the immune response induced by LT-IIa toxin and its pentameric B subunit (LT-IIaB) delivered by transcutaneous and intradermic routes. Initially the proteins of interest were expressed in recombinant E. coli strains, purified and tested for functionality in vitro. In a second moment, the immunomodulatory properties of LT-IIa and LT-IIaB, immunogenicity and adjuvant activity, were evaluated in mouse model. The humoral and cellular immune responses induced against ovalbumin (OVA) used as antigen were determined. The results show that the adjuvant activity of LT-IIa and its B pentamer depends on the route of inoculation and that LT-I and LT-IIa differ both on induction of inflammation and activation of immune responses in mice.