Düsseldorf, Universiẗat, Diss., 2002.

Class of 2014 Abstract / Specific Aims: Determine time to appropriate therapy for S. maltophilia infection before implementation of mass spec. A second part of this project will evaluate the time to appropriate therapy after implementation of mass spec. The hypothesis is the time to appropriate therapy will decrease by > 2 days after implementation of mass spec. appropriate antibiotic therapy will be based on susceptibility data reported for each isolate of S. maltophilia. Potential appropriate therapy that will be evaluated includes high-dose sulfamethoxazole-trimethoprim (10-20 mg/kg/day based on TMP adjusted for renal function), ticarcillin- clavulanate plus aztreonam, moxifloxacin or levofloxacin, and ceftazidime. Methods: A retrospective chart review was done to evaluate time to identification and time to appropriate therapy for S. maltophilia as baseline data before implementation of mass spectrometry for earlier species identification. Subject selection included all patients between June 1, 2011 through May 31, 2012 with S. Maltophilia isolated from any source while admitted to the University of Arizona Medical Center-University Campus, Tucson, AZ. Patients with initial S. maltophilia isolated from a post-mortem sample or were colonizers were excluded. Main Results: There were 86 subjects included in the study based on inclusion and exclusion criteria. There were 60 subjects that received appropriate therapy for S. maltophilia coverage. The averaged time to initiation of appropriate antibiotic prior to the implementation of mass spectrometer was determined to be 6.5 days. Conclusion: Since S. maltophilia is not susceptible to many antibiotics used as empiric therapy, early identification of the pathogen via mass spectrometry, in addition to pharmacist intervention, may lead to initiation of appropriate antibiotics that is earlier than an average of 6.5 days found in this study.

Polycyclic aromatic hydrocarbons (PAHs) are compounds containing carbon and hydrogen atoms of fused benzene rings in linear, angular or cluster arrangements. These compounds have a large (negative) resonance energy, resulting in a thermodynamically stable structures. PAHs may also contain alkyl- and nitro-substituent groups. The complexity in these molecules can be generated by substituting the aromatic carbon atom with nitrogen, oxygen or sulfur, giving rise to heterocyclic PAHs.

Class of 2015 Abstract / Objectives: Stenotrophomonas maltophilia is considered one of the most intrinsically resistant opportunistic infections in the hospital setting. Immunocompromised patients are at a significant risk for nosocomial S. maltophilia infection. Matrix-assisted laser desorption/ionization time-of-flight mass spectrometry can quickly identify S. maltophilia. This study sought to determine the median and range of time to appropriate therapy of S. maltophilia infections after implementation of MALDI-TOF-MS for rapid species identification. Methods: A retrospective electronic medical record review of patients admitted to UAMC-UC during the study period was utilized to determine time to appropriate therapy. Positive cultures for S. maltophilia were identified by the microbiology laboratory database and assessed for inclusion in the study. Demographic information, time of culture, time to appropriate therapy, and isolate susceptibilities were collected using a data extraction tool. Variables were assessed with medians and ranges. Results: The average time to appropriate therapy was 3.4 days with a median of 3 days (range 0-21). Most isolates were susceptible to sulfamethoxazole-trimethoprim and levofloxacin and resistant to ceftazidime. Of the 20 isolates resistant to sulfamethoxazole-trimethoprim, 14 were susceptible to levofloxacin. Only one isolate was resistant to all four drugs. Immunocompromised patients accounted for only 12% of the study population. Conclusions: After implementation of MALDI-TOF MS, the median time to appropriate therapy in S. maltophilia infection was 3 days. Rapid species identification can lead to a quicker time to appropriate therapy, which is essential for effective treatment of S. maltophilia infection.

O gênero Stenotrophomonas inclui doze espécies de bactérias Gram- negativas, não fermentadoras, que podem ser encontradas no ambiente. Até o presente, S. maltophilia é a única espécie com linhagens que são patógenos oportunistas em seres humanos. Essa espécie tem ganhado importância clínica por estar envolvida em um crescente número de infecções em pacientes imunodeprimidos e em UTI neonatais, apresentando altas taxas de morbimortalidade. Isolados ambientais e clínicos de S. maltophilia compartilham 85% de homologia genômica, podendo ser a diferença uma consequência da adaptação da bactéria aos diferentes nichos ecológicos em que é encontrada. Embora infecções e/ou colonizações por S. maltophilia aconteçam principalmente em ambiente nosocomial, diversos estudos têm mostrado um aumento do número de infecções de origem comunitária. Neste estudo, isolados nosocomiais e linhagens clínicas de S. maltophilia foram fenotipados e comparados quanto ao seu perfil filogenético por Multilocus Sequence Typing (MLST). Na análise por MLST utilizaram-se os genes atpD, gapA, guaA, nuoD, ppsA, recA e rpoA, por serem genes constitutivos. O perfil filogenético mostrou alta variabilidade clonal, provavelmente refletindo o processo de adaptação de S. maltophilia ambientais a outros habitats. Verificou-se que dois subgrupos de isolados clínicos de S. maltophilia com grande homogeneidade filogenética apresentam recombinação intergrupos, indicando alta permissividade à transferência horizontal de informação genética, envolvida na resistência a antibióticos e na expressão de fatores de virulência. Mais ainda, para a maioria das amostras clínicas aqui estudadas, inferências filogenéticas podem ser feitas apenas com o uso do gene ppsA. Portanto, o sequenciamento de apenas um fragmento específico para esse gene seria suficiente, em muitos casos, para determinar se a infecção por S. maltophilia foi causada por cepa já presente no ambiente nosocomial ou por bactérias de origem comunitária introduzidas nesse ambiente pela circulação de pessoas e materiais. Finalmente, foi possível mostrar que até mesmo isolados e linhagens clínicas filogeneticamente próximos não compartilham similaridade de perfil metabólico, o que indica sua origem comunitária / The genus Stenotrophomonas comprises twelve species of Gram- negative and non-fermentative bacteria, which can be found in the environment. The species S. maltophilia is the only one, until the present, that includes opportunistic pathogenic strains in humans. S. maltophilia gained clinical importance by being involved in an increasing number of infections in immunocompromissed patients and in NICUs, with high rates of morbidity and mortality. Environmental and clinical isolates of S. maltophilia share around 85% of genomic homology and this difference may be a consequence of adaptation to the different ecological niches where S. maltophilia can be found. Although infection and/or colonization by S. maltophilia occur mainly in the nosocomial environment, several studies have shown a growing number of community-acquired infections. In this study, nosocomial isolates and clinical strains of S. maltophilia were phenotyped and their phylogenetic profiles compared by using Multilocus Sequence Typing (MLST). In order to accomplish the MLST analysis the constitutive genes atpD, gapA, guaA, nuoD, ppsA, recA and rpoA were used. The resultant global phylogenetic profile showed high clonal variability, what correlates with the adaptability process of environmental S. maltophilia to other habitats. It was found that two clinical isolates subgroups of S. maltophilia with great phylogenetic homogeneity present intergroup recombination indicating the high permittivity to horizontal gene transfer, a mechanism involved in the acquisition of antibiotic resistance and expression of virulence factors. Moreover, for most of the clinical samples studied here, phylogenetic inferences can be made with the use of the gene ppsA only. Therefore, the sequencing of just one specific fragment of this gene would allow, in many cases, to determine whether the infection with S. maltophilia ? ? was caused by a strain already present in the nosocomial environment, or by bacteria introduced from the community in this environmental through the movement of people and materials. Finally, phenotyping data showed that even closely phylogenetic related nosocomial isolates and clinical strains do not share the same metabolic profile, thus indicating their community- acquired origin

Paez JIG. Fatores associados à mortalidade em infecções nosocomiais por Stenotrophomonas maltophilia [dissertação]. São Paulo: Faculdade de Medicina, Universidade de São Paulo; 2007. 154p. Infecção de corrente sanguínea (ICS) e pneumonia por S. maltophilia são associadas á alta mortalidade. A identificação de fatores relacionados à mortalidade em pacientes com infecções por esse agente pode permitir intervenções no sentido de diminuir a sua mortalidade. Realizamos um estudo retrospectivo com 60 pacientes com ICS ou pneumonia de origem hospitalar no Instituto Central do Hospital das Clínicas da Faculdade de Medicina da Universidade de São Paulo (ICHC-FMUSP) durante o período de 30 de julho de 1999 a 30 de julho de 2005. Analisamos os fatores de risco relacionados à mortalidade global e a mortalidade nos primeiros 14 dias da infecção por meio de um estudo de coorte retrospectivo comparando os pacientes que apresentaram óbito com os que não apresentaram óbito.As seguintes características foram encontradas na população estudada no momento da infecção, 57 (85%) dos pacientes receberam antibióticos prévios, 88% tinham cateter venoso central, 57% estavam em uso de ventilação mecânica, 35% em uso de quimioterapia e 75% estavam internados em unidade de cuidado intensivo. Neoplasia foi a principal doença de base presente em 45%. Choque séptico foi descrito em 30% dos casos, a média de pontuação na escala de APACHE II foi de 17 pontos e a média de pontuação da escala SOFA foi de 7 pontos. Foram diagnosticadas 8 pneumonias e 52 ICS, 47% foram ICS primárias, entre estas 13% foram ICS relacionadas ao cateter. Foram diagnosticadas também 40% ICS secundárias, sendo o principal foco pulmonar (18%). 27% das infecções foram polimicrobianas. Os fatores de risco independentes associados à mortalidade nos primeiros 14 dias identificados na análise multivariada foram, pontuação maior que 6 no índice SOFA (RR=18,9. IC95%=2,4-146,2) e presença de choque séptico (RR=11,6. IC95%=1,3-105,9). O fator de risco associado à mortalidade global na análise multivariada foi, pontuação maior que 6 no índice SOFA (RR=37,1. IC95%=2,8-494,3). A instituição de terapia antimicrobiana inadequada para o tratamento das infecções por S. maltophilia foi freqüente, sendo observada em 40 (85%) pacientes, principalmente por atraso no inicio e por tempo curto de tratamento. Não houve diferença estatística quando comparado o tratamento adequado do tratamento inadequado. A curva de sobrevida de Kaplan-Meier mostrou que pacientes com APACHE II >20 e SOFA > 10 tinham respectivamente uma chance de sobrevida menor que 8% e menor que 10% (P=<0.001) até 21 dias após a primeira cultura positiva. A mortalidade global foi de 75% e a mortalidade nos primeiros 14 dias de infecção foi de 38%. Estes resultados mostram que infecções por S. maltophilia acontecem em pacientes gravemente doentes com múltiplos fatores de risco e que os fatores associados à mortalidade são principalmente relacionados ao estado da condição clínica de base e gravidade do paciente. / Paez JIG. Factors associated with mortality in Nosocomial infections with Stenotrophomonas maltophilia [dissertation]. São Paulo: ?Faculdade de Medicina, Universidade de São Paulo?; 2007. 154p. Bloodstream infections (BSI) and pneumonia caused by Stenotrophomonas maltophilia are associated with high mortality. A retrospective study with 60 patients with nosocomial BSI and pneumonia was done at the Instituto Central do Hospital das Clínicas da Faculdade de Medicina da Universidade de São Paulo (ICHC-FMUSP). Cases were selected from July 30, 1999 through July 30, 2005. Risk factors associated with overall mortality and 14-day mortality after the onset of infection were accessed. 57 (85%) patients had received previous antimicrobial therapy, 88% had CVC, 57% mechanical ventilation and 75% stay in intensive care unit in the onset of infection. Malignancy (45%) was the most frequent underlying diseases. From 60 patients, 30% had septic shock, the mean of APACHE II score was 17 points and the mean of SOFA index was 7 points. A total of 60 infections were identified. Among these, 8 were pneumonias and 52 BSI, that for this turn, 33% were primary BSI, 13% were CVC-related and 40% secondary. 35% of the infections were polymicrobial. Risk factors associated with 14-day mortality after the onset of infections in the multivariate analysis were, SOFA index > 6 points (RR=18.9. 95%CI=2.4-146.2) and septic shock (RR=11.6. 95%IC=1.3-105.9). Risk factor associated with overall mortality was SOFA index > 6 points, (RR=37.1. 95%IC=2.8-494.3). Used of inappropriate antimicrobial therapy was observed in 40 (85%) patients, of whom received therapy with more 72 hours and received therapy for an insufficient length of time and there was no difference when compared appropriated and non-appropriated therapy. Kaplan-Meier estimations curves showed that patients with APACHE II >20 and SOFA > 10 had respectively a survival chance less than 8% and less than 10% (P=<0.001) at 21 days after the first positive S. maltophilia culture. The overall mortality and 14-day mortality after the onset of infections rates were 75% and 38% respectively. Our results showed that infections caused by S. maltophilia occur in critically ill patients with multiple risk factors and that the most important risk factors associated with mortality are the initial clinical condition and severity of diseases.

A ciclodextrina glicosiltransferase (EC 2.4.1.19) é a única enzima capaz de converter amido e açúcares relacionados em ciclodextrinas através de reação de ciclização. Estes compostos podem formar complexos de inclusão com moléculas hidrofóbicas, tornando-se importante para aplicação nas indústrias alimentícias, farmacêuticas, agrícolas, químicas e de cosméticos. Um novo microorganismo produtor de CGTase foi encontrado entre bactérias isoladas do solo e foi identificado como Stenotrophomonas maltophilia. A enzima produzida por este microrganismo foi purificada em quatro etapas: precipitação por afinidade com amido, ultrafiltração, cromatografia de troca iônica e cromatografia de interação hidrofóbica. A CGTase assim purificada obteve, aproximadamente, atividade específica de 200.000 U/mg e fator de purificação de 2500. Com uma única banda, o peso molecular da enzima purificada foi estimado em 70kDa por SDS-PAGE. A temperatura ótima para atividade da enzima foi de 60 º C, enquanto que a atividade enzimática permaneceu praticamente estável entre pH 6 e 10, indicando natureza alcalotolerante. Km e Vmax para a enzima pura foram de 2,5 g/mL e 12,5 U/mg de proteína, respectivamente, usando amido solúvel como substrato. / Cyclodextrin glycosyltransferase (EC 2.4.1.19) is the unique enzyme able to convert starch and related sugars into cyclodextrins via cyclization reaction. These compounds can form inclusion complexes with hydrophobic molecules, becoming important for application in the food, pharmaceutical, agricultural, chemical and cosmetics industries. A new microorganism producing the CGTase was found among strains isolated from soil and identified as Stenotrophomonas maltophilia. The enzyme produced by this strain was purified by four steps: starch affinity precipitation, ultrafiltration, ion exchange chromatography and hydrophobic interaction chromatography. The CGTase thus obtaining specific activity 200,000 U.mg-1 and 2500-fold purification. With a single band, the molecular weight of the purified enzyme was estimated in 70kDa by SDS-PAGE. The optimum temperature for enzyme activity was 60ºC, whereas the enzyme activity remained almost stable between pH 6 to 10, indicating its alkalotolerant nature. Km e Vmax for the pure enzyme were 2.5 g/mL and 12.5 U/mg protein, respectively, using soluble starch as substrate.

O gênero Stenotrophomonas inclui doze espécies de bactérias Gram- negativas, não fermentadoras, que podem ser encontradas no ambiente. Até o presente, S. maltophilia é a única espécie com linhagens que são patógenos oportunistas em seres humanos. Essa espécie tem ganhado importância clínica por estar envolvida em um crescente número de infecções em pacientes imunodeprimidos e em UTI neonatais, apresentando altas taxas de morbimortalidade. Isolados ambientais e clínicos de S. maltophilia compartilham 85% de homologia genômica, podendo ser a diferença uma consequência da adaptação da bactéria aos diferentes nichos ecológicos em que é encontrada. Embora infecções e/ou colonizações por S. maltophilia aconteçam principalmente em ambiente nosocomial, diversos estudos têm mostrado um aumento do número de infecções de origem comunitária. Neste estudo, isolados nosocomiais e linhagens clínicas de S. maltophilia foram fenotipados e comparados quanto ao seu perfil filogenético por Multilocus Sequence Typing (MLST). Na análise por MLST utilizaram-se os genes atpD, gapA, guaA, nuoD, ppsA, recA e rpoA, por serem genes constitutivos. O perfil filogenético mostrou alta variabilidade clonal, provavelmente refletindo o processo de adaptação de S. maltophilia ambientais a outros habitats. Verificou-se que dois subgrupos de isolados clínicos de S. maltophilia com grande homogeneidade filogenética apresentam recombinação intergrupos, indicando alta permissividade à transferência horizontal de informação genética, envolvida na resistência a antibióticos e na expressão de fatores de virulência. Mais ainda, para a maioria das amostras clínicas aqui estudadas, inferências filogenéticas podem ser feitas apenas com o uso do gene ppsA. Portanto, o sequenciamento de apenas um fragmento específico para esse gene seria suficiente, em muitos casos, para determinar se a infecção por S. maltophilia foi causada por cepa já presente no ambiente nosocomial ou por bactérias de origem comunitária introduzidas nesse ambiente pela circulação de pessoas e materiais. Finalmente, foi possível mostrar que até mesmo isolados e linhagens clínicas filogeneticamente próximos não compartilham similaridade de perfil metabólico, o que indica sua origem comunitária / The genus Stenotrophomonas comprises twelve species of Gram- negative and non-fermentative bacteria, which can be found in the environment. The species S. maltophilia is the only one, until the present, that includes opportunistic pathogenic strains in humans. S. maltophilia gained clinical importance by being involved in an increasing number of infections in immunocompromissed patients and in NICUs, with high rates of morbidity and mortality. Environmental and clinical isolates of S. maltophilia share around 85% of genomic homology and this difference may be a consequence of adaptation to the different ecological niches where S. maltophilia can be found. Although infection and/or colonization by S. maltophilia occur mainly in the nosocomial environment, several studies have shown a growing number of community-acquired infections. In this study, nosocomial isolates and clinical strains of S. maltophilia were phenotyped and their phylogenetic profiles compared by using Multilocus Sequence Typing (MLST). In order to accomplish the MLST analysis the constitutive genes atpD, gapA, guaA, nuoD, ppsA, recA and rpoA were used. The resultant global phylogenetic profile showed high clonal variability, what correlates with the adaptability process of environmental S. maltophilia to other habitats. It was found that two clinical isolates subgroups of S. maltophilia with great phylogenetic homogeneity present intergroup recombination indicating the high permittivity to horizontal gene transfer, a mechanism involved in the acquisition of antibiotic resistance and expression of virulence factors. Moreover, for most of the clinical samples studied here, phylogenetic inferences can be made with the use of the gene ppsA only. Therefore, the sequencing of just one specific fragment of this gene would allow, in many cases, to determine whether the infection with S. maltophilia ? ? was caused by a strain already present in the nosocomial environment, or by bacteria introduced from the community in this environmental through the movement of people and materials. Finally, phenotyping data showed that even closely phylogenetic related nosocomial isolates and clinical strains do not share the same metabolic profile, thus indicating their community- acquired origin

A ciclodextrina glucosiltransferase (CGTase) é uma enzima industrialmente muito importante, capaz de converter o amido em ciclodextrinas (CDs). As CDs são capazes de formar complexos de inclusão com uma grande gama de compostos orgânicos e inorgânicos, podendo mudar suas propriedades químicas e físicas, propriedades estas que lhes confere extensiva aplicabilidade na indústria de alimentos, farmacêutica, química, cosmética e agrícola. Atualmente, diversas CGTases já foram isoladas e caracterizadas a partir de vários microrganismos, principalmente Bacillus, Paenibacillus, Pseudomonas, Klebsiella, Xanthomonas, Thermococcus, Vibrio, Geobacillus e Thermoanaerobacterium. Neste trabalho, demonstramos o primeiro relato envolvendo a clonagem e expressão heteróloga da CGTase de Stenotrophomonas maltophilia, microrganismo isolado do solo brasileiro. O gene codificador da CGTase de S. maltophilia, foi amplificado com êxito através da técnica de PCR, clonado no vetor pET-23a(+) e expresso em Escherichia coli BL21(DE3). As células recombinantes necessitaram de aproximadamente 4 horas de cultivo em meio Luria Bertani (LB) após a adição de 0,1 mM de IPTG para a expressão elevada da proteína alvo. Porém, a CGTase recombinante foi expressa sob forma de corpos de inclusão permanecendo na fração insolúvel, sendo necessário utilizar protocolos para solubilização, incluindo diferentes concentrações de uréia, mas a precipitação não foi eficaz. Embora tenha sido observada uma expressão elevada da proteína com cerca de 60 kDa em SDS-PAGE 12%, que correspondeu ao tamanho esperado da proteína, a forma ativa da enzima não foi obtida. Uma análise bioinformática foi realizada, onde foi observou-se uma proteína conhecida como uma importante possível facilitadora transmembrana (PMFTP – putative Major Facilitator Transmembrane Protein) que ancora o gene cgt. Proteína esta que pode ser utilizada em novos estudos a fim de desenvolver um novo e mais eficaz sistema para expressão da CGTase, podendo facilitar a sua expressão extracelular. Assim, mais estudos são necessários para desenvolver um sistema de co-expressão de rCGTase::PMFTP em E. coli e obter mais informações desta proteína de Stenotrophomonas maltophilia. / Cyclodextrin glucosyltransferase (CGTase) is an industrially important enzyme, capable to convert starch into cyclodextrins (CDs). The CDs are able to form inclusion complexes with a wide range of organic and inorganic compounds, which can change their chemical and physical properties, that gives them extensive applicability in the food, pharmaceutical, chemical, cosmetics and agricultural. Currently, many CGTases have been isolated and characterized from various microorganisms, particularly Bacillus, Paenibacillus, Pseudomonas, Klebsiella, Xanthomonas, Thermococcus, Vibrio, Geobacillus and Thermoanaerobacterium. This work demonstrates the first report involving cloning and expression of heterologous CGTase from Stenotrophomonas maltophilia, microorganism isolated from Brazilian soil. The gene encoding the S. maltophilia CGTase, was successfully amplified by PCR, cloned into the vector pET-23a (+) and expressed in Escherichia coli BL21(DE3). Recombinant cells required about 4 h of cultivation in Luria Bertani (LB) after addition of 0.1 mM IPTG for high expression of the target protein. However, the CGTase was expressed recombinant form of inclusion bodies remaining in the insoluble fraction, being necessary use protocols for solubilization, including different concentrations of urea, but the precipitation was not effective. Although it was observed a high expression of the protein about 60 kDa on SDS-PAGE 12%, corresponding to the expected size of the protein, but the active form of the enzyme was not obtained. Bioinformatic analysis was performed and observed a Putative Major Facilitator Transmembrane Protein (PMFTP) harboring the cgt gene. This protein can be used in further studies to develop a new and more effective system for expression of the CGTase, which may facilitate its extracellular expression. Thus, more studies are needed to develop a system of co-expression of rCGTase::PMFTP in E. coli and acquire more information about this protein of Stenotrophomonas maltophilia.

A ciclodextrina glicosiltransferase (EC 2.4.1.19) é a única enzima capaz de converter amido e açúcares relacionados em ciclodextrinas através de reação de ciclização. Estes compostos podem formar complexos de inclusão com moléculas hidrofóbicas, tornando-se importante para aplicação nas indústrias alimentícias, farmacêuticas, agrícolas, químicas e de cosméticos. Um novo microorganismo produtor de CGTase foi encontrado entre bactérias isoladas do solo e foi identificado como Stenotrophomonas maltophilia. A enzima produzida por este microrganismo foi purificada em quatro etapas: precipitação por afinidade com amido, ultrafiltração, cromatografia de troca iônica e cromatografia de interação hidrofóbica. A CGTase assim purificada obteve, aproximadamente, atividade específica de 200.000 U/mg e fator de purificação de 2500. Com uma única banda, o peso molecular da enzima purificada foi estimado em 70kDa por SDS-PAGE. A temperatura ótima para atividade da enzima foi de 60 º C, enquanto que a atividade enzimática permaneceu praticamente estável entre pH 6 e 10, indicando natureza alcalotolerante. Km e Vmax para a enzima pura foram de 2,5 g/mL e 12,5 U/mg de proteína, respectivamente, usando amido solúvel como substrato. / Cyclodextrin glycosyltransferase (EC 2.4.1.19) is the unique enzyme able to convert starch and related sugars into cyclodextrins via cyclization reaction. These compounds can form inclusion complexes with hydrophobic molecules, becoming important for application in the food, pharmaceutical, agricultural, chemical and cosmetics industries. A new microorganism producing the CGTase was found among strains isolated from soil and identified as Stenotrophomonas maltophilia. The enzyme produced by this strain was purified by four steps: starch affinity precipitation, ultrafiltration, ion exchange chromatography and hydrophobic interaction chromatography. The CGTase thus obtaining specific activity 200,000 U.mg-1 and 2500-fold purification. With a single band, the molecular weight of the purified enzyme was estimated in 70kDa by SDS-PAGE. The optimum temperature for enzyme activity was 60ºC, whereas the enzyme activity remained almost stable between pH 6 to 10, indicating its alkalotolerant nature. Km e Vmax for the pure enzyme were 2.5 g/mL and 12.5 U/mg protein, respectively, using soluble starch as substrate.