Resumo: Este trabalho teve por objetivos: (i) selecionar genótipos de tangerinas resistentes a infecção por Alternaria alternata, e estabelecer relações entre níveis de severidade da doença entre folhas e frutos, (ii) avaliar a contribuição de metabólitos na resistência de folhas maduras de tangerinas a A. alternata, (iii) selecionar genótipos de tangerina resistentes a infecção por Elsinoe fawcettii. Para tais experimentos foram utilizados 22 genótipos de tangerina pertencentes ao banco de germoplasma da Estação experimental de Citricultura de Bebedouro, Bebedouro-SP. (i) Dentre os materiais genéticos resistentes, foram constatados quatro genótipos de clementinas (Citrus clementina), seis mandarinas, sendo duas pertencentes a C. reticulata, duas a C. tangerina, uma a C. deliciosa e uma a C. nobilis; um tangelo (C. tangerina x C. paradisi); dois híbridos de mandarinas, sendo um resultante do cruzamento entre C. nobilis x C. deliciosa, e o outro de C. clementina x C. reticulata; um híbrido de tangor (C. clementina x C. sinensis) e dois híbridos de satsumas (C. unshiu x C. deliciosa.). Também foi constatado indícios de relação entre severidade de doença em folhas jovens destacadas e incidência natural de doença em frutos. (ii) Ao final dos experimentos, não foi observado influência desses metabólitos na defesa das folhas maduras de tangerina a MMA. (iii) Dente os genótipos avaliados, foram observados 10 materiais genéticos resistentes a verrugose. Dentre estes materiais, observou-se que os genótipos Commune, Caffin, Bruno, Burgess, Peau Lisse, Zanzibar, Beuty of Glen Retreat, Rode King e Encore também se apresentaram resistentes a MMA. Estes materiais são promissores para o cultivo de tangerinas em áreas de ocorrência destas doenças, e poderão contribuir com futuros trabalhos de melhoramento genético para resistência a MMA e verrugose. / Abstract: The aims of this work were: (i) select tangerine genotypes resistant to Alternaria alternata infection and classify relative degrees of disease severity among leaves and fruits, in order to ultimately control the pathogen; (ii) evaluate metabolites contribuition on mature leaves of tangerines to A. alternata; (iii) select tangerine genotypes resistant to Elsinoe fawcettii. For such experiments 22 tangerines genotypes from germoplasm bank at Estação experimental de Citricultura de Bebedouro, Bebedouro-SP were used. (i) Among the resistant genetic materials, four clementines genotypes (Citrus clementina), six mandarines, being two of C. reticulata, two C. tangerina, one C. deliciosa and one C. nobilis; one tangelo (C. tangerina x C. paradisi); two mandarines hybrids, being one resulted between C. nobilis x C. deliciosa crossing, and other at C. clementina x C. reticulata; one tangor hybrid (C. clementina x C. sinensis) and two satsumas hybrids (C. unshiu x C. deliciosa) were found. A consistent relationship was noted among level of susceptibility in leaves (as evaluated following either natural infection or artificial inoculation), severity and susceptibility of fruit, suggesting a new methodology for diagnosis, identification and selection of Citrus spp. varieties resistant to A. alternata. (ii) At the end of experiments, it was not found any relationship between the presence of these metabolites and resistance to MMA on tangerines mature leaves. (iii) Among the genotypes evaluated, 10 genetic materials resistant to scab were observed. Finally, Commune, Caffin, Bruno, Burgess, Peau Lisse, Zanzibar, Beuty of Glen Retreat, Rode King and Encore cultivars, being resistant to A. alternata and also to E. fawcettii, exhibited good agronomic characteristics and, consequently, show a promising economic exploration. / Orientador: Antonio de Goes / Coorientador: Eduardo Sanches Stuchi / Banca: Antonio Baldo Geraldo Martins / Banca: Sérgio Florentino Pascholati / Mestre

Orientadora: Eliana Gertrudes Macedo Lemos / Banca: Lúcia Maria Carareto Alves / Banca: Vanderlei Rodrigues / Resumo: Metabólitos secundários são compostos bioativos, com grande importância para a indústria farmacêutica e agropecuária, produzidos por certos grupos de microrganismos e plantas. Os policetídeos, que são sintetizados por complexos enzimáticos denominados policetídeos sintases (PKSs), desatacam-se entre os metabólitos secundários conhecidos e compõe a estrutura química básica de vários antibióticos. Todos os genes envolvidos na biossíntese de um policetídeo se encontram agrupados fisicamente no cromossomo, e contém genes que são altamente conservados, comumente chamados d~ pks mínima. Os métodos tradicionais para pesquisa de novas drogas, que envolvem o cultivo de microrganismos isolados do solo, não são mais tão promissores, devido à alta taxa de redescoberta de antibióticos já conhecidos, que chega a 99,9%, e à pequena parcela de microrganismos do solo que são cultiváveis pelas técnicas padrões de cultivo, cerca de 1 %. A Metagenômica é uma abordagem promissora que permite acessar o genoma desses organismos incultiváveis, pois consiste na extração de DNA diretamente do ambiente e construção de uma biblioteca com este genoma misto. Neste trabalho descrevemos a construção de uma biblioteca feita com DNA de alto peso molecular isolado diretamente de solo coletado sob arboreto de eucaliptos no Estado de São Paulo, Brasil. A biblioteca possui 9.320 clones e foi construída em vetor cosmídeo, com insertos de tamanho variando entre 30 e 45kb...(Resumo completo, clicar acesso eletrônico abaixo) / Abstract: Secondary metabolites are bioactive compounds with great importance in the pharmaceutical and agriculture industries, procuced by a few groups of microrganisms and plants. The polyketides that are synthetized by enzimatic complexes, denominated polyketides synthases, outstand among the secondary known metabolites, which are part of the main structure of many antibiotics. Ali genes involved in the biosynthesis of antibiotics are found as clusters in the chromossome. The traditional methods for the research of new drugs that are made from microrganisms cultures isolated from the soil are not so promissing, due to the high rate of rediscorevy of already known species, reaching 99.9%. The other small piece of microrganisms are culturable by standards culture methods, reaching 1 % maximum. Metagenomics is a promissing approach that allows the access to genom of these organisms that are not culturable, as it is carried out by DNA extraction directly from the environment and construction of a mixed genomic library. In this work, we describe the construction of a library made from high molecular weight DNA isolated directly form the soi! undemeath a pinus forest in the State of São Paulo, Brazil. The library shows 9.320 dones and it was constructed in a cosmideo vector, with insert size ranging from 30 to 45 kb. Digestion with difterent restriction enzymes of cosmidial DNA randomly chosen allowed to visualize evident difterences in the restriction fragments among the clones, as does the possibility to determine the average insert size. The initial evaluation of the presence of genes involved in the biosynthesis of antibiotics synthesized by the enzymatic system PKS of kind I, was accomplished by the PCR amplification of clones from the library using specific primers. We studied 4.320 clones and the results suggest a great variety of these genes. The PCR products obtained were sequenced for the determination of identity of the amplified gene. / Mestre