Orientadora: Eliana Gertrudes Macedo Lemos / Banca: Lúcia Maria Carareto Alves / Banca: Vanderlei Rodrigues / Resumo: Metabólitos secundários são compostos bioativos, com grande importância para a indústria farmacêutica e agropecuária, produzidos por certos grupos de microrganismos e plantas. Os policetídeos, que são sintetizados por complexos enzimáticos denominados policetídeos sintases (PKSs), desatacam-se entre os metabólitos secundários conhecidos e compõe a estrutura química básica de vários antibióticos. Todos os genes envolvidos na biossíntese de um policetídeo se encontram agrupados fisicamente no cromossomo, e contém genes que são altamente conservados, comumente chamados d~ pks mínima. Os métodos tradicionais para pesquisa de novas drogas, que envolvem o cultivo de microrganismos isolados do solo, não são mais tão promissores, devido à alta taxa de redescoberta de antibióticos já conhecidos, que chega a 99,9%, e à pequena parcela de microrganismos do solo que são cultiváveis pelas técnicas padrões de cultivo, cerca de 1 %. A Metagenômica é uma abordagem promissora que permite acessar o genoma desses organismos incultiváveis, pois consiste na extração de DNA diretamente do ambiente e construção de uma biblioteca com este genoma misto. Neste trabalho descrevemos a construção de uma biblioteca feita com DNA de alto peso molecular isolado diretamente de solo coletado sob arboreto de eucaliptos no Estado de São Paulo, Brasil. A biblioteca possui 9.320 clones e foi construída em vetor cosmídeo, com insertos de tamanho variando entre 30 e 45kb...(Resumo completo, clicar acesso eletrônico abaixo) / Abstract: Secondary metabolites are bioactive compounds with great importance in the pharmaceutical and agriculture industries, procuced by a few groups of microrganisms and plants. The polyketides that are synthetized by enzimatic complexes, denominated polyketides synthases, outstand among the secondary known metabolites, which are part of the main structure of many antibiotics. Ali genes involved in the biosynthesis of antibiotics are found as clusters in the chromossome. The traditional methods for the research of new drugs that are made from microrganisms cultures isolated from the soil are not so promissing, due to the high rate of rediscorevy of already known species, reaching 99.9%. The other small piece of microrganisms are culturable by standards culture methods, reaching 1 % maximum. Metagenomics is a promissing approach that allows the access to genom of these organisms that are not culturable, as it is carried out by DNA extraction directly from the environment and construction of a mixed genomic library. In this work, we describe the construction of a library made from high molecular weight DNA isolated directly form the soi! undemeath a pinus forest in the State of São Paulo, Brazil. The library shows 9.320 dones and it was constructed in a cosmideo vector, with insert size ranging from 30 to 45 kb. Digestion with difterent restriction enzymes of cosmidial DNA randomly chosen allowed to visualize evident difterences in the restriction fragments among the clones, as does the possibility to determine the average insert size. The initial evaluation of the presence of genes involved in the biosynthesis of antibiotics synthesized by the enzymatic system PKS of kind I, was accomplished by the PCR amplification of clones from the library using specific primers. We studied 4.320 clones and the results suggest a great variety of these genes. The PCR products obtained were sequenced for the determination of identity of the amplified gene. / Mestre

Orientador: Raquel Fernandes Pupo Nogueira / Banca: Helena Redigolo Pezza / Banca: Renato Sanches Freire / Resumo: Fármacos residuais estão sendo encontrados com freqüência em ambientes aquáticos o que pode acarretar problemas ambientais. Dessa forma, neste trabalho foi avaliada uma alternativa para a degradação do antibiótico tetraciclina (TC): a utilização do processo foto-Fenton. O monitoramento da concentração de TC foi feito por análises de Cromatografia Líquida de Alta Eficiência (CLAE) e a remoção da carga orgânica foi avaliada por determinações de Carbono Orgânico Total (COT). Dois sistemas de fotodegradação foram empregados, um utilizando radiação artificial e outro solar. Foi avaliada a influência de alguns fatores na fotodegradação de TC (24,0 mg L-1) como a utilização de ferrioxalato de potássio (FeOx) e Fe(NO3)3 que foram testados como fonte de ferro e apresentaram resultados diferentes. Sob radiação artificial, Fe(NO3)3 apresentou os melhores resultados pois a total oxidação do composto alvo foi atingida em apenas um minuto de tratamento, enquanto que na presença de FeOx a total oxidação ocorreu em 10 minutos. Quando a concentração de Fe(NO3)3 foi variada de 0,200 mol L-1 para 0,100 mol L-1 foi verificado um decréscimo na remoção de COT de 74% para 47%. Já sob radiação solar, os melhores resultados foram obtidos com FeOx, pois em 30 segundos de tratamento a TC foi totalmente oxidada. Outro parâmetro avaliado foi a influência da concentração de H2O2 e a maior concentração estudada (20 mmol L-1) prejudicou a fotodegradação, enquanto que a menor concentração testada (3,00 mmol L-1) manteve boa remoção de COT (76%) e de oxidação de TC (100%). A degradação de TC foi também avaliada em matrizes como água superficial e efluente de estação de tratamento de esgoto. Nessas matrizes, FeOx sob radiação solar manteve bons resultados para a oxidação de TC, com o qual foram alcançados percentuais de 85 e 74% de remoção de COT na água superficial e efluente de ETE, respectivamente. / Abstract: Pharmaceutical residues are being found frequently in aquatic environments what may cause environmental problems. Therefore, in this work an alternative for the degradation of the tetracycline (TC) antibiotic was evaluated: the use of the photo-Fenton process. The monitoring of the TC concentration was made by High Performance Liquid Chromatography (HPLC) analysis and the removal of the organic load was evaluated by Total Organic Carbon determination (TOC). Two systems of photodegradation were employed, one using artificial radiation and other using solar radiation. The influence of some factors in the photodegradation of TC (24,0 mg L-1) was evaluated such as the use of potassium ferrioxalate (FeOx) and Fe(NO3)3 that were tested as iron source and presented different results. Under artificial radiation, Fe(NO3)3 presented the best results since total oxidation of the target compound was achieved in only one minute of treatment, while in presence of FeOx the total oxidation occurred in 10 minutes. When the concentration of Fe(NO3)3 was varied from 0,200 mol L-1 to 0,100 mol L-1 a decrease in the TOC removal from 74% to 47% was verified. Regarding solar radiation, best results were obtained with FeOx, since in 30 seconds of treatment, the TC was totally oxidized. Other parameter evaluated was the influence of the H2O2 concentration. The highest concentration studied (20 mmol L-1) hindered the photodegradation, while the lowest concentration (3,00 mmol L-1) tested provided good TOC removal (76%) and TC oxidation (100%). The degradation of TC was also evaluated in matrices such as surface water and effluent of sewage treatment plant. FeOx under solar radiation maintained good results for the TC oxidation with which percentages of 85% and 74% of TOC removal were achieved, respectively. / Mestre

Resumo: Foi realizado um experimento com frangos de corte machos e fêmeas, com duração de 43 dias, no Aviário Experimental do Departamento de Zootecnia da Faculdade de Ciências Agrárias e Veterinárias, UNESP, Campus de Jaboticabal, SP. O objetivo foi o de avaliar a eficácia de três programas de alimentação contendo virginiamicina, sobre o desempenho, rendimento de carcaça e morfometria intestinal de frangos de corte machos e fêmeas, criados sobre cama reutilizada. Foram utilizados 2.160 pintos de um dia de idade da linhagem Cobb, distribuídos em 72 boxes com 30 aves cada. O delineamento experimental adotado foi em blocos com esquema fatorial 3x2 (três programas alimentares e dois sexos), com doze repetições de 30 aves cada. As dietas experimentais consistiram em: T1 (dieta inicial, crescimento e final, isentas de virginiamicina), T2 (adição de virginiamicina nas dietas inicial, crescimento e final) e T3 (adição de virginiamicina nas dietas inicial e crescimento). Aos 21, 35 e 42 dias de idade foram avaliados os dados de desempenho (peso médio, ganho de peso, consumo de ração, conversão alimentar e viabilidade criatória) e aos 42 dias de idade as características de carcaça (rendimento de carcaça, peito, peito desossado, coxa + sobrecoxa e asas). Aos 43 dias de idade, amostras de duodeno e jejuno foram retiradas para análise de morfometria de altura e largura das vilosidades, profundidade de cripta e relação a altura de vilosidade/profundidade de cripta, no Laboratório de Histologia e Embriologia do Departamento de Morfologia e Fisiologia Animal da FCAV, UNESP. Os tratamentos T2 e T3 proporcionaram melhores resultados para peso, ganho de peso e conversão alimentar, no entanto, não interferiram no consumo de ração, viabilidade criatória e no rendimento de carcaça e cortes quando comparados com o tratamento T1. A utilização de virginiamicina proporcionou melhor ... (Resumo completo, clicar acesso eletrônico abaixo) / Abstract: An experiment was conducted with broiler males and females, with duration of 43 days in the Experimental Aviary of the Animal Science Department at Agriculture and Veterinary Sciences Faculty, UNESP, Jaboticabal, SP. The objective was to evaluate the efficacy of three feed programs containing virginiamycin on performance, carcass and intestinal morphology of broiler males and females reared on reused litter. We used 2,160 chicks a day old, Cobb, distributed in 72 boxes with 30 birds each. The experiment was arranged in blocks with a 3x2 factorial arrangement (three food programs and two sexes), with twelve replicates of 30 birds each. The experimental diets consisted of T1 (starter, growth and final diet free virginiamycin), T2 (addition of virginiamycin in diets starting, growing and finishing) and T3 (addition of virginiamycin in diets and initial growth). At 21, 35 and 42 days of age were evaluated performance data (average weight, weight gain, feed intake, feed conversion and livability) and at 42 days old carcass characteristics (carcass yield, breast, boneless breast, thigh + drumstick and wings). At 43 days of age, samples of duodenum and jejunum were removed for morphometric analysis of villus height and width, crypt depth and compared villus height/crypt depth in the Histology and Embryology Laboratory, of Morphology and Physiology Departament, from FCAV, UNESP. The treatments T2 and T3 provided better results for weight, weight gain and feed conversion, however, did not affect feed intake, livability and carcass yield and cuts when compared with T1. The use of virginiamycin provided better development of the villi and crypts, when compared with treatment without antibiotic in the study / Orientador: Silvana Martinez Baraldi Artoni / Coorientador: Otto Mack Junqueira / Banca:Antonio Carlos de Laurentiz / Banca: Maria Rita Pacheco / Mestre