Orientador: Gisele Fabrino Machado / Banca:Katia Denise Saraiva Bresciani / Banca: Paulo Ricardo Dell'Armelina Rocha / Resumo: A encefalitozoonose é uma doença zoonótica causada por microsporídios do gênero Encephalitozoon e acomete uma ampla gama de aves, répteis e mamíferos, incluindo os coelhos, principal hospedeiro da espécie Encephalitozoon cuniculi. Esse estudo teve como objetivo investigar a ocorrência da presença do DNA de Encephalitozoon spp. em coelhos de granjas e residências do interior do e estado de São Paulo, Brasil. Foram colhidas 429 amostras por conveniência, que passaram por extração e posterior amplificação de DNA por meio da PCR convencional para o gênero Encephalitozoon. O método utilizado permitiu a detecção do parasito em 11 amostras (2,56%). Há presença do esporo do parasito em algumas destas granjas, mas nenhum coelho doméstico apresentou positividade. A baixa porcentagem de DNA detectado nas amostras analisadas pode indicar uma baixa ocorrência desta infecção nos animais presentes nas granjas analisadas. Esta é a primeira pesquisa sobre o gênero Encephalitozoon em granjas de coelhos e residências no estado de São Paulo. / Abstract: Encephalitozoonosis is a zoonotic disease caused by microsporidia of the genus Encephalitozoon and affects a wide range of birds, reptiles and mammals, including rabbits, the main host of the species Encephalitozoon cuniculi. This study aimed to investigate the occurrence of the DNA of Encephalitozoon spp. in rabbits from farms and residences at cities in state of São Paulo, Brazil. A total of 429 samples of feces were collected for convenience, from rabbits living at farms and residences from the state of São Paulo, Brazil. The DNA was extracted and amplified by conventional PCR for the genus Encephalitozoon. The parasite was detected in 11 samples (2.56%). That showed there's the presence of the parasite spore in some of these farms, but no domestic rabbit showed positivity. The low percentage of DNA detected in the analyzed samples, may indicate a low occurrence of this infection in the animals present in the analyzed farms. This is the first research on the genus Encephalitozoon in farms of rabbits and residences in the state of São Paulo. / Mestre

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In this context, most sensitive techniques must be developed and aggregated normally to the used ones as routine of environmental tracking. Objectives: to evaluate the quality of water in human use from the Municipal District of Goiania-Goiaz in relation to the presence of helminthes and opportunistic protozoa, with emphasis in the research of the Coccideos and intestinal Microsporas. Methodology: The samples of water were collected monthly – from february2006 to january2007, in six points: in Meia-Ponte River and Ribeirão João Leite River, which supply the Municipal District of Goiania; and Bosque dos Buritis Lake and Parque Vaca Brava Lake. The laboratorial analysis were achieved in NUPEREME and LDGM. The procedures for the study of water was the method of filter membrane commended by “Standard Methods for the Examination of Water and Wastewater”. The opportunistic parasite agents were identified by the technique of concentration and specific coloration for coccideos and microsporidios, immunofluorecence by Kit MeryFluor and bio-molecular techniques, using PCR. The helminthes were identified by the method of Hoffman Pons and Janner (1934). Results: Of 72 collected samples, two of them were positive for Cryptosporidium spp by the technique of Ziehl-Nelseen and the Kit Mery-Fluor. Utilizing the technique of PCR, the specimen Cryptosporidium parvum was confirmed to the collected sample in Meia-Ponte River, 2km from ETE-Goiania, which did not occur with other sample identified in Vaca Brava Lake. Utilizing the technique of Hoffman Pons and Janner (1934), on confirmation by the technique of immunofluorescence of the Kit Mery-Fluor, cysts of Giardia were found in Ribeirão João Leite River, in a point before the act of captivating from SANEAGO (Sanitation of Goiás) at 2.77%(2/72), and another one in Municipal of Goianápolis at 1.38%(1/72), where receives a great part of the sewerage generated by Anapolis City. The techniques of Kynioum and Hot- Cromotrope did not showed positivity for any of the opportunistic protozoa researched in this work. About the helminthes, 23.6% (17/72) of the samples were positive for larvas of free life, and 2.77%(2/72) for eggs, detecting Ascaris lumbricoides and Hymenolepis diminuta. In relation to the temperature and humidity, significant result was not obtained statistically. However, it did not influence on the occurrence of the protozoarios and helminths. Conclusion: The applied parasitological methodologies showed to be at low cost, relatively fast ones, even not specific. For the specific identification was necessary to utilization of molecular methods helminthes showed major positivity, maybe by the practicality of the method, demonstrating speed and low cost to the diagnosis. / Introdução: A água é uma substância de importância vital para os seres vivos, porém, devido à ação antrópica, inúmeros microrganismos são disseminados através desta. Dentre estes microrganismos uma atenção especial deve ser dada aos parasitos. Estes chegam aos ambientes aquáticos através das fezes do homem e outros animais, e podem desencadear diversos agravos à saúde, sobretudo em indivíduos imunodeprimidos e imunossuprimidos. Em rotina de monitoramento ambiental normalmente se utiliza as bactérias do grupo dos coliformes como parâmetro microbiológico, o que não evidencia a real contaminação por outros patógenos, comprometendo a real qualidade microbiológica da água. Neste contexto, técnicas mais sensíveis devem ser desenvolvidas e agregadas as normalmente utilizadas como rotina de monitoramento ambiental. Objetivos: Padronizar a utilização de técnicas parasitológicas e moleculares na avaliação da qualidade da água de uso humano do Município de Goiânia-Goiás em relação à presença de helmintos e protozoários oportunistas, com ênfase na pesquisa dos Coccídeos e os Microsporídios intestinais. Metodologia: Amostras de água foram coletadas mensalmente, de Fevereiro/06 a Janeiro/07 em seis pontos, em dois rios que abastecem o município de Goiânia, Rio Meia Ponte (dois pontos) e Ribeirão João Leite (dois pontos) e nos lagos: Bosque dos Buritis e Parque Vaca Brava. A análise laboratorial foi realizada pelo NUPEREME, LGMC e LDGM. O procedimento para a detecção de protozoários em água foi baseado no método da membrana filtrante preconizado pelo “Standard Methods for the Examination of water and wastewaster”. Os agentes parasitários oportunistas foram identificados através de técnicas de concentração e coloração específicas para Coccídeos e Microsporídios, Imunofluorescência pelo kit MeryFluor® e técnicas moleculares, utilizando a Reação em Cadeia da Polimerase (PCR) e Nested-PCR. Os helmintos foram identificados pelo método de Hoffman Pons e Janer (1934). Resultados: De 72 amostras coletadas, duas foram positivas para Cryptosporidium sp através da técnica de Ziehl- Nelseen e do Kit MeryFluor®. Utilizando a técnica da Nested-PCR foi confirmada a espécie Cryptosporidium parvum para a amostra coletada no Rio Meia Ponte, 2 km à jusante da ETE/Goiânia, o que não ocorreu com a outra amostra, identificada no lago Vaca Brava. Utilizando a técnica de Hoffman Pons e Janer (1934), com confirmação pela técnica de Imunofulorescência do Kit MeryFluor®, foram encontrados Cistos de Giardia sp no Ribeirão João Leite, em um ponto antes da captação da SANEAGO 2,77%(2/72) e outro no Município de Goianápolis 1,38% (1/72), onde recebe grande parte do esgoto gerado pela cidade de Anápolis. As técnicas de Kynioun e Hot-Chromotrope não apresentaram positividade para nenhum dos protozoários oportunistas pesquisados nesse trabalho. Quanto aos helmintos, 23,6% (17/72) das amostras foram positivas para larvas de vida livre e 2,77% (2/72) para ovos, detectando Ascaris lumbricoides e Hymenolepis diminuta. Quanto à temperatura e umidade não foi obtido resultado estatisticamente significativo, portanto não influenciando na ocorrência dos protozoários e helmintos. Conclusão: As metodologias parasitológicas aplicadas mostraram ser de baixo custo, relativamente rápidas, porém não específicas. Para a identificação específica foi necessária a utilização de métodos moleculares. Os helmintos apresentaram maior positividade, talvez pela praticidade do método, demonstrando rapidez e baixo custo para o diagnóstico.