Resumo: A correta distinção dos micro-organismos envolvidos na patogênese da doença periodontal torna-se importante para o entendimento da sua progressão, auxiliando no adequado planejamento do tratamento periodontal. Assim métodos moleculares tornam-se ferramentas de grande valia no diagnóstico microbiológico. A técnica do PCR convencional é um método já estabelecido na literatura, porém não permite uma quantificação exata das amostras avaliadas. Com isso o PCR em tempo real surgiu para complementar o PCR convencional. O objetivo do presente estudo foi realizar a análise comparativa de ambas as técnicas na detecção de Porphyromonas gingivalis, Tannerella forsythia e Porhyromonas endodontalis. Foram selecionados 20 pacientes sistemicamente saudáveis, com doença periodontal crônica generalizada. Após o exame clínico periodontal completo, 30 amostras de sítios doentes não adjacentes (PS ≥ 5 e 7 mm com sangramento a sondagem) e 30 amostras de sítios sadios não adjacentes (PS ≤ 3 mm e ausência de sangramento a sondagem) foram coletados antes e 60 dias após a terapia periodontal básica de raspagem, alisamento radicular e instrução de higiene oral. O PCR convencional, PCR em tempo real e primers específicos para cada técnica foram utilizados para análise microbiológica. Para a análise comparativa entre as técnicas o PCR em tempo real foi dividido em 3 scores de acordo com a quantidade de DNA e o PCR convencional em 2 scores, presente e ausente. As análise estatísticas foram realizadas utilizados o software GraphPad. Os resultadosmostraram que o PCR em tempo real possui maior sensibilidade e especificidade na detecção dos micro-organismos P. endodontalis, P. gingivalis e T. forsythia, os quais foram detectados em maiores proporções nos sítios doentes quando comparados aos sítios... (Resumo completo, clicar acesso eletrônico abaixo) / Abstract: The correct distinguishment of microorganisms involved in the periodontal disease pathogen, it is important in the understanding of its progression and adequate treatment planning, in this way, different microbiologic diagnostic molecular methods became key instruments. The conventional PCR technique is a well established method, however does not permit a precise quantification of the evaluated samples, being complemented by the real time PCR. The aim of the present study was to realize a comparative analysis of both techniques in the detection of Porphyromonas gingivalis, Tannerella forsythia e Porhyromonas endodontalis. 20 systemically healthy patients, with established generalized cronic periodontal disease were selected. After a complete clinical periodontal exam, 30 non adjacent affected sites samples (Depth Probing ≥ 5 e 7 mm with positive bleeding) and 30 non adjacent healthy sites samples (depth probing ≤ 3 mm with negative bleeding) were collected initially and 60 days after a basic periodontal therapy, root scaling and oral hygiene instructions. Conventional PCR, real time PCR and specific primers for it technique were used for microbiological analysis. To permit a comparative analysis between both PCR methods studied, the real time PCR was divided in 3 different scores, in accordance to DNA quantity and the conventional PCR in 2 scores, present or absent. The GraphPad software was used to make the statistical analysis. The results demonstrated that the real time PCR are more sensitive and specific in the detection of P. endodontalis, P. gingivalis and T. forsythia, detecting them in a higher proportion in the affected sites when compared to the healthy sites. After the basic periodontal therapy, there was a significant reduction of the bacteria analyzed. That way, can be suggested that presence of... (Complete abstract, click electronic access below) / Orientador: Denise Madalena Palomari Spolidorio / Coorientador: Rosemary Adriana Chiérici Marcantonio / Banca: Poliana Duarte / Banca: Joni Augusto Cirelli / Mestre

Resumo: A expressão de citocinas inflamatórias é um processo estritamente regulado por mecanismos variados, incluindo o controle da sinalização intracelular e da atividade transcricional por inibidores endógenos, os quais são pouco estudados e compreendidos. Três grupos de proteínas: SHP, PIAS e SOCS inibem de maneira distinta e específica a transdução de sinais pela via JAK/STAT, bem como a atividade dos fatores de transcrição, eventos que modulam a expressão de diversas citocinas. As doenças periodontais estão associadas à inflamação persistente, com elevados níveis de citocinas proinflamatórias, no entanto praticamente não existem informações sobre a participação destes mecanismos de regulação nas diferentes condições clínicas periodontais. Os objetivos deste projeto incluíram avaliar a cinética de expressão das proteínas SOCS1 e SOCS3 e suas proteínas-alvo, STAT1 e STAT3, respectivamente, durante a evolução da doença periodontal. Foram utilizados 36 ratos Wistar divididos em 2 grupos: DP - doença periodontal induzida por 2 métodos: ligaduras ao redor dos 1os molares inferiores e injeções de 60 μg de LPS de E. coli no tecido gengival palatino dos molares superiores, 3x/semana; Grupo controle negativo - recebeu apenas injeções de PBS (veículo). Os ratos foram sacrificados 7, 15 e 30 dias após a indução da doença periodontal para avaliação histológica e análise macroscópica da perda óssea alveolar. A expressão de SOCS1 e SOCS3 e a ativação de STAT1 e STAT3 foram avaliadas nas biópsias gengivais por PCR em tempo real e Western blot. Ambos os modelos apresentaram significante e progressiva perda óssea dos 7 aos 30 dias. A inflamação foi evidente já no período de 7 dias em ambos os modelos, porém enquanto manteve-se similar nos demais períodos no modelo de indução por LPS, apresentou uma diminuição na severidade da inflamação... (Resumo completo, clicar acesso eletrônico abaixo) / Abstract: Inflammatory cytokine gene expression is a process strictly regulated by various mechanisms, including the negative regulation of signaling of cytokine receptors and of the activity of transcription factors such as STATs. These mechanisms involve endogenous proteins and are largely unknown, especially in periodontal diseases. Three groups of proteins, SHP, PIAS and SOCS modulate in a fairly specific manner JAK/STAT signaling and/or STAT activity. Periodontal diseases are infectious-inflammatory conditions of the supporting tissues of the teeth associated with increased levels of proinflammatory cytokines, but there are no information regarding the role of these endogenous mediators of JAK/STAT during its course. The aims of this study included the evaluation of the expression kinetics of inducible negative regulators and their target proteins during the course of experimentally induced periodontal disease. 36 Wistar rats were divided into two groups: PD - experimental periodontal disease induced by two methods: ligature placement around the first mandibular molars and E. coli lipopolysaccharide (LPS) injections into the palatal gingival tissues of the maxillary molars, 3x/week, and Negative Control group. Rats were sacrificed 07, 15 and 30 days after disease induction for histological evaluation of periodontal inflammation and macroscopic analysis of alveolar bone loss. SOCS expression and the activation status of STAT1 and STAT3 were evaluated in gingival biopsies by real time PCR and Western Blot. Both disease models presented significant progressive bone loss from 7 to 30 days. Inflammation was evident and similar for all the periods in LPS injected sites; however, a decrease on severity at the end of the experimental period was observed in the ligature model. There was a significant (p<0.05) increase on SOCS1 and SOCS3 gene expression in PD compared to control... (Complete abstract click electronic access below) / Orientador: Joni Augusto Cirelli / Coorientador: Carlos Rossa Junior / Banca: Carlos Ferreira dos Santos / Banca: Paulo Sergio Cerri / Mestre