Submitted by MARCIA ROVADOSCHI (marciar@unifra.br) on 2018-08-16T19:52:36Z No. of bitstreams: 2 license_rdf: 0 bytes, checksum: d41d8cd98f00b204e9800998ecf8427e (MD5) Dissertacao_MauberEduardoSchultzMoreira.pdf: 14104089 bytes, checksum: cdd198bace6b9a1b1e4ce9262baded58 (MD5) / Made available in DSpace on 2018-08-16T19:52:36Z (GMT). No. of bitstreams: 2 license_rdf: 0 bytes, checksum: d41d8cd98f00b204e9800998ecf8427e (MD5) Dissertacao_MauberEduardoSchultzMoreira.pdf: 14104089 bytes, checksum: cdd198bace6b9a1b1e4ce9262baded58 (MD5) Previous issue date: 2015-03-23 / Cancer is a public health problem of great impact. Relapses require higher doses of drugs or new approaches to minimizing toxicity. The use of liposome-based carrier systems pharmaceuticals may be an alternative by the use of the enhanced permeability and retention effect present in the tumor area. The aim of this project was to develop and characterize liposomes containing arsenic trioxide (ATO). They were prepared according reverse phase evaporation method using ethyl acetate (EA) as solvent followed by ultrasonication with probe to reduce the size and homogenization. In determining the arsenic, titanium and residual EA we used Atomic Absorption Spectrometry with Graphite Furnace (GF- AAS), Mass Spectrometry Inductively Coupled Plasma (ICP -MS) and Gas Chromatography coupled to mass detector (GC-MS), respectively. We also carried out stability studies with formulations being subjected to room temperature (25° C), cooling (4 to 8° C) and climate chamber (40° C and 60% humidity) for a period of 90 days. Cytotoxicity assays were performed by the method of reduction of 3- (4,5) dimetiltialzoil 2,5 - diphenyltetrazolium bromide (MTT). Data of physical-chemical characterization showed that the best condition was sonication with a power of 750 W, 40% amplitude and cycles of 8 seconds on and 2 seconds off, to avoid overheating. The average particle size was 87.5±1.07 nm and polydispersity index (IPD) 0.28±0.03 for liposomes blank (BL) and 71.17±0.06 nm and 0.29±0.04 for liposomes containing TOA (LAs / LAS). TOA content of LAs was 1.0 mg ml-1 and the encapsulation efficiency (%EE) of 7,43±0.72%. ICP-MS showed the presence of titanium in the formulation and the determination of the residual solvent was below the tolerable limit. The stability study showed that formulations remained stable over a period of 30 days, regardless of storage condition wherein the stored under refrigeration remained stable for 60 days. Cytotoxicity assays with MTT revealed that in 72 hours the LB, AE and the buffer did not exercise death activity. The reverse phase evaporation method followed by ultrasonication appears to be suitable for obtaining liposomal vesicles containing arsenic trioxide . / Câncer é um problema de saúde pública de grande impacto. As recidivas necessitam de doses maiores de fármacos ou de novas abordagens para minimizar a toxicidade. O uso de sistemas carreadores de fármacos baseados em lipossomas pode ser uma alternativa por fazer uso do efeito permeabilidade e retenção aumentada presente na área do tumor. O objetivo desta dissertação foi desenvolver e caracterizar lipossomas contendo trióxido de arsênio (TOA). Foi utilizado o método de evaporação em fase reversa com solvente acetato de etila (AE) seguido de ultrassonicação com sonda para reduzir o tamanho e homogeinização. Na determinação do arsênio, titânio e acetato de etila residual utilizaram-se as técnicas de Espectrometria de Absorção Atômica com Forno de Grafite (GF- AAS), Espectrometria de Massa com Plasma Indutivamente Acoplado (ICP-MS) e Cromatografia a Gás acoplado a detector de massa (GCMS), respectivamente. Foi realizado também estudo de estabilidade com as formulações sendo submetidas a temperatura ambiente (25°C), refrigeração (4 a 8°C) e câmara climática (40°C e umidade de 60%), por um período de 90 dias. Os ensaios de citotoxicidade foram realizados pelo método de redução do 3-(4,5) dimetiltialzoil-2,5 difeniltetrazolium (MTT). Os dados da caracterização físico-química mostraram que a melhor condição de sonicação foi com potência de 750 W, amplitude de 40% e ciclos de 8 segundos ligado e 2 segundos desligado, para evitar o aquecimento. O tamanho médio foi de 87,5 ± 1,07 nm e índice de polidispersão (IPD) 0,28 ± 0,03 para os lipossomas branco (LB) e 71,17 ± 0,06 nm e 0,29 ± 0,04 para os lipossomas contendo TOA (LAs/LAS), respectivamente. O teor de TOA nos LAs foi de 1,0 mg mL-1 e a eficiência de encapsulação (%EE) de 7,43 ± 0,72%. O ICP-MS revelou a presença de titânio nas formulações e a determinação do solvente residual ficou abaixo do limite tolerável. O estudo de estabilidade mostrou que as formulações permaneceram estáveis por um período de 30 dias, independente da condição de armazenamento, sendo que as armazenadas sob refrigeração permaneceram estáveis por 60 dias. Os ensaios de citotoxicidade com MTT revelaram que em 72 horas os LB, AE e a solução tampão não exerceram atividade de morte. O método de evaporação em fase reversa seguido de ultrassonicação parece ser adequado para a obtenção de vesículas lipossomais contendo trióxido de arsênio.

Submitted by MARCIA ROVADOSCHI (marciar@unifra.br) on 2018-08-17T19:52:35Z No. of bitstreams: 2 license_rdf: 0 bytes, checksum: d41d8cd98f00b204e9800998ecf8427e (MD5) Dissertacao_FernandaReisFavarin.pdf: 2215176 bytes, checksum: f94c01cb7f3e20eec81ca0cf6c5bf3bd (MD5) / Made available in DSpace on 2018-08-17T19:52:35Z (GMT). No. of bitstreams: 2 license_rdf: 0 bytes, checksum: d41d8cd98f00b204e9800998ecf8427e (MD5) Dissertacao_FernandaReisFavarin.pdf: 2215176 bytes, checksum: f94c01cb7f3e20eec81ca0cf6c5bf3bd (MD5) Previous issue date: 2017-05-11 / Ascorbic acid (AA) is a water soluble vitamin and also is widely used as an antioxidant in the food, chemical and pharmaceutical industry. Among vitamins, this chemical compost is known as one of the most unstable, due to its stability can be affected by temperature, oxidation, light, enzymes, pH and metal catalysts. With the use of nanotechnology, the AA can be encapsulated in liposomes, which play the role of a shield, protecting the AA from all those factors mentioned above. The liposomes are biocompatible and biodegradable vesicular structures formed by bilayers of phospholipids around an aqueous core, but more unstable than other nanoparticles. The purpose of the liposomes usage is to protect the AA from degradation. Thus, this work aims to prepare liposomes containing ascorbic acid, to characterize and to analyze its antioxidant activity. First, an analytical method for the quantification of ascorbic acid by high performance liquid chromatography (HPLC) was co-validated. After co-validation, liposomal formulations containing 1 mg/mL ascorbic acid (LIP-A) and blank liposomal formulations (LIP-B) - without the active ingredient - were prepared for comparison using the reverse phase evaporation method. After preparation of these formulations, they were characterized according to their refractive index, average particle diameter, polydispersity index (PDI), zeta potential, pH, content, encapsulation efficiency, stability and, DPPH• and ABTS• free radical scavenging activity. In stability, three formulations were prepared and each formulation was divided into three vials, each vial was stored in a different condition. Here are the conditions: climatic chamber (40 0 °C), room temperature (25 2 °C) and refrigerator (4 1 °C). Through the results of the co-validation it was possible to realize that the ascorbic acid‘s quantification method is linear, specific and precise and, can be used for the quantification of ascorbic acid in LIP-A. The prepared liposomes presented 161 6 nm of mean vesicle diameter, a 0,231 0,02 polydispersity index, -7.3 1,1 mV zeta potential, 3,2 0,04 pH and a 19 1,1% encapsulation efficiency. The initial AA content of LIP-A was 1 mg/mL , and the initial antioxidant activity of LIP-A was 12.0 1,1 mMol and 11.4 1,4 mmol of TE/ml for the DPPH• and ABTS• radicals, respectively. The content and free radical scavenging activity varied according to the condition in which LIP-A were stored (climatic chamber, room temperature or refrigerator), because the AA’s stability depends on temperature in which it is stored. During the stability analysis, it was possible to see that LIP-B in climatic chamber condition presented instability from 15º on, while LIP-A remained stable till day 30. These results suggest that the AA, It is suggested that AA as an antioxidant leaves the liposomes more stable. The best condition for the LIP-A storage was the refrigerator one. In this condition the liposome remained stable for 30 days regarding to its mean diameter, PDI, zeta potential and pH. This condition also presented a higher content and antioxidant activity for longer than in the other ones. / O ácido ascórbico (AA) é uma vitamina hidrossolúvel e um antioxidante amplamente utilizado pela indústria alimentícia, química e farmacêutica. Entre as vitaminas, é conhecida como uma das mais instáveis, pois sua estabilidade pode ser afetada pela temperatura, oxigênio, luz, enzimas, pH e catalisadores metálicos. O AA pode ser protegido destes fatores sendo encapsulado em lipossomas, através da nanotecnologia. Os lipossomas são estruturas vesiculares formadas por bicamadas de fosfolipídios ao redor de um núcleo aquoso, são vesículas biocompatíveis e biodegradáveis, mas são mais instáveis. O objetivo da utilização de lipossomas neste trabalho é que estas vesículas protejam o AA da degradação. Sendo assim, a proposta deste trabalho é preparar lipossomas contendo ácido ascórbico, caracterizá-los e analisar sua atividade antioxidante. Primeiramente foi co-validado um método analítico para a quantificação de ácido ascórbico por cromatografia a líquido de alta eficiência (CLAE). Após a co-validação foram preparadas formulações lipossomais contendo ácido ascórbico (LIP-A) na concentração de 1 mg/mL e formulações lipossomais brancas – sem o ativo (LIP-B) para fins de comparação, através do método de evaporação em fase reversa. Após a preparação destas formulações, elas foram caracterizadas de acordo com seu índice de refração, diâmetro médio de partícula, índice de polidispersão (IPD), potencial zeta, pH, teor, eficiência de encapsulação, atividade sequestrante de radicais livres DPPH• e ABTS• e estabilidade. Na estabilidade foram preparadas três formulações e cada formulação foi dividida em três frascos, cada frasco foi armazenado em uma condição diferente: câmara climática (40 0 °C), temperatura ambiente (25 2 °C) e geladeira (4 1 °C). Através dos resultados da co-validação foi possível perceber que o método para quantificação do ácido ascórbico é linear, específico e preciso e pode ser utilizado para a quantificação de ácido ascórbico em LIP-A. Os lipossomas preparados apresentaram 161 6 nm de diâmetro médio de vesícula, 0,231 0,02 de índice de polidispersão, - 7,3 1,1 mV de potencial zeta, 3,2 0,04 de pH e uma eficiência de encapsulação de 19 1,1 %. O teor de AA inicial do LIP-A foi de 1 mg/mL, e a atividade antioxidante inicial do LIP-A para o radical DPPH foi de 12,0 1,1 μMol de TE/mL e para o ABTS 11,4 1,4 μMol de TE/mL. O teor e a atividade antioxidante variaram de acordo com a condição em que os LIP-A foram armazenados (câmara climática, temperatura ambiente ou geladeira), pois a estabilidade do AA depende da temperatura em que ele é armazenado. Durante as análises de estabilidade foi possível perceber que o LIP-B na condição de câmara climática ficou instável a partir do 15º, enquanto o LIP-A permaneceu estável até o dia 30, sugere-se que o AA por ser um antioxidante deixou os lipossomas mais estáveis. A melhor condição para o armazenamento do LIP-A foi em geladeira, nesta condição os lipossomas se mantiveram estáveis em relação ao seu diâmetro médio, IPD, potencial zeta e pH por 30 dias. E apresentou um maior teor e atividade antioxidante por mais tempo que nas outras condições.