Submitted by Alice Araujo (alice.caraujo@ufpe.br) on 2018-04-13T22:40:15Z No. of bitstreams: 1 DISSERTAÇÃO Amanda Costa de Lima.pdf: 1322322 bytes, checksum: 726fb58b721f569c6b8bead2aec546ec (MD5) / Made available in DSpace on 2018-04-13T22:40:15Z (GMT). No. of bitstreams: 1 DISSERTAÇÃO Amanda Costa de Lima.pdf: 1322322 bytes, checksum: 726fb58b721f569c6b8bead2aec546ec (MD5) Previous issue date: 2015-03-02 / CAPES / O consumo de dieta hiperlipídica e hipercalórica durante o período perinatal induz a disfunções metabólicas como desenvolvimento de adiposidade precoce, alterações de crescimento e hiperfagia. O presente estudo avaliou os efeitos da utilização perinatal de dieta hiperlipídica/hipercalórica sobre gestantes, nutrizes e prole. Ratos Wistar foram divididos em dois grupos, de acordo com a manipulação nutricional realizada do 1º dia de gestação ao 21º dia de lactação: Grupo Controle (GC) e Grupo Hiperlipídico/ Hipercalórico (GH). O GC (n=10) foi alimentado com dieta Nuvilab® (calorias: 357,11kcal/100g e lipídios: 5,63g/100g) durante gestação e lactação. O GH recebeu dieta hiperlipídica/hipercalórica durante o mesmo período (calorias: 489,61kcal/100g e lipídios: 25,37g/100g). Nas ratas prenhas e lactantes foram analisados, peso corporal, composição corporal e ingestão alimentar. Na prole, até os 21 dias de vida pós-natal, foram analisados desempenho na lactação, evolução ponderal e medidas murinométricas. Aos 30 dias de vida, os filhotes foram avaliados em relação à composição corporal e medidas murinométricas. Também foi analisado o consumo alimentar dos filhotes após a lactação. O presente trabalho demonstrou que a manipulação nutricional com dieta rica em gorduras não afetou o desempenho da lactação aos dias 7, 14 e 21 dias de vida, porém, levou a alterações nas medidas murinométricas na prole do GH que apresentou menor circunferência torácica, menor circunferência abdominal e menor comprimento naso-anal. Os efeitos tardios da ingestão perinatal de dieta hiperlipídica foram evidenciados com a redução no consumo alimentar aos 30 dias de vida. Em relação às medidas murinométricas no 30º dia pós-natal, o único parâmetro que foi diferente entre os grupos foi o comprimento naso-anal, estando diminuído no GH. Houve maior adiposidade no grupo submetido à dieta hiperlipídica/hipercalórica. Em conjunto, os resultados desse trabalho mostram que um ambiente perinatal composto por um excesso de calorias e lipídeos é capaz de afetar parâmetros relacionados ao desenvolvimento e aumentar a adiposidade corporal, sendo fator de risco para obesidade a longo prazo. / The consumption of high fat and high calorie diet during the perinatal period induces metabolic dysfunctions such as development of early adiposity, growth changes and hyperphagia. This study evaluated the effects of perinatal use of high fat / high calorie diet for pregnant women, nursing mothers and offspring. Wistar rats were divided into two groups according to nutritional manipulation performed the 1st day of gestation to 21 days of lactation: Control Group (CG) and hyperlipidic Group / hipercalórico (GH). The GC (n = 10) was fed Nuvilab® diet (calories: 357,11kcal / 100g and lipids: 5,63g / 100g) during pregnancy and lactation. The GH received high fat / high calorie diet during the same period (calories: 489,61kcal / 100g and lipids: 25,37g / 100g). In pregnant and lactating rats were analyzed, body weight, body composition and food intake. In the offspring, up to 21 days of postnatal life, were analyzed performance in lactation, weight gain and murinométricas measures. At 30 days of age, the pups were assessed for body composition and murinométricas measures. Also analyzed the food intake of puppies after lactation. This study demonstrated that nutritional manipulation with high-fat diet did not affect the performance of lactation on days 7, 14 and 21 days of life, however, led to changes in murinométricas measures in the offspring of GH showed lower chest circumference, smaller circumference abdominal and lower naso-anal length. Late effects of perinatal intake of fat diet were highlighted with reduced food intake at 30 days of life. Regarding murinométricas measures on the 30th postnatal day, the only parameter that differed between the groups was the naso-anal length and is decreased in the GH. There was a greater adiposity in the group submitted to high fat / high calorie diet. Taken together, the results of this work show that a perinatal environment composed of an excess of calories and lipids can affect parameters related to the development and increase body fat, being risk factor for long-term obesity.

A patogênese e o estadiamento do melanoma são clinicamente bem caracterizados, entretanto, muitas variações são observadas no que diz respeito à progressão e respostas terapêuticas. Mecanismos intrínsecos das células de melanoma contribuem para esse fenômeno, como a plasticidade fenotípica e a expressão de determinadas moléculas, como a galectina-3. Galectina-3 tem papel fundamental para o crescimento do tumor, metástase e montagem de uma rede vascular funcional. Dessa forma, o melanoma possui mecanismos alternativos de vascularização, onde células endoteliais e células tumorais formam a superfície luminal dos vasos e são expostas às forças fluídicas do sangue, o shear stress. Nós hipotetizamos que o shear promove a adaptação celular e células de melanoma se comunicam com (1) outras células tumorais para sustentar a progressão do tumor, ou (2) com células endoteliais para garantir a manutenção vascular. Para isso, comparamos dois modelos de geração do shear denominados pela agitação de placas concêntricas e rotação de um cone sobre placa, que é o modelo padrão dos estudos em células endoteliais. O modelo de placas concêntricas gerou resultados mais robustos, pois garantiu a viabilidade e a adesão celular em até 24h. Também investigamos o potencial angiogênico das células de melanoma após monitorar a ativação de células endoteliais em contato com o meio condicionado (MC) do shear. O shear aumentou significativamente a secreção de Angiopoietina-2, IL-8 e PLGF num contexto independente de galectina-3. Além disso, o shear diminuiu a taxa de crescimento das células que expressam galectina-3, o que não foi observado no tratamento com o MC. Já a capacidade de sobreviver em longo prazo foi maior quando as células tumorais são expostas ao MC derivado do shear, sem influência da expressão de galectina-3. Em relação ao efeito do MC liberado após shear para o remodelamento vascular, nós não observamos alteração na proliferação das células endoteliais. Entretanto, o MC do shear parece acelerar a formação de túbulos e favorecer a desorganização das fibras de actina, além de diminuir a fosforilação de ERK nas células endoteliais. Juntos, esses resultados mostram que o shear induz a secreção de moléculas pró-angiogênicas e pró-inflamatórias que promovem a sobrevivência e proliferação a longo prazo das células tumorais naive. Nas células endoteliais, o MC derivado do shear altera a sinalização de ERK e o rearranjo do citoesqueleto / Melanoma pathogenesis and staging are clinically well characterized, although a large variation is observed in progression and therapeutic responses. Intrinsic mechanisms of melanoma cells contribute to this phenomenon, such as phenotypic plasticity and the expression of certain molecules as galectin-3. Galectin-3 plays a prominent role in tumor growth, metastasis, and to build a functional vascular network. In this way, melanoma has alternative mechanisms of vascularization, in which both endothelial cells and tumor cells form the luminal surface of vessels and are in contact with flowing blood. Here, we postulated that shear stress promotes cell adaptation and melanoma cells communicate with (1) other tumor cells in order to support tumor progression; or (2) with endothelial cells to ensure vascular maintenance. We compared two methods for generating shear stress, namely revolution of concentric plates and stirring of a suspended cone on a plate, which is the gold standard method for studies on endothelial cells. The concentric plates model yielded more reliable results, since it ensured the greater viability and adhesion of cells up to 24h, as compared to the cone and plate system. We then investigated the angiogenic potential of melanoma cells by monitoring the activation of endothelial cells upon exposure to the conditioned medium (CM) from cells exposed to shear stress. Shear stress significantly increased the secretion of Angiopoietin-2, IL-8 and PLGF, in a galectin-3 independent manner. Also, shear stress decreased the growth rate of galectin-3 positive melanoma cells, but not when galectin-3 was down regulated. No such effect was observed with the shear-derived CM. Instead, we did observed long-term melanoma survival under low density upon treatment with the shear-derived CM. In this scenario, the expression of galectin-3 did not change the results. Regarding the effect of shear-derived CM to vascular remodeling, endothelial cells did not show any change in cell proliferation. However, the CM of melanoma cells upon shear accelerated the endothelial cell tube formation and disorganized the actin stress fibers. CM also decreased the phosphorylation of ERK. Taken together, these data indicate that the production of proangiogenic and proinflammatory molecules by melanoma cells under shear enables long-term survival and proliferation of naïve melanoma cells. To endothelial cells, shear-derived CM led to changes in ERK signaling and cytoskeletal rearrangement

A patogênese e o estadiamento do melanoma são clinicamente bem caracterizados, entretanto, muitas variações são observadas no que diz respeito à progressão e respostas terapêuticas. Mecanismos intrínsecos das células de melanoma contribuem para esse fenômeno, como a plasticidade fenotípica e a expressão de determinadas moléculas, como a galectina-3. Galectina-3 tem papel fundamental para o crescimento do tumor, metástase e montagem de uma rede vascular funcional. Dessa forma, o melanoma possui mecanismos alternativos de vascularização, onde células endoteliais e células tumorais formam a superfície luminal dos vasos e são expostas às forças fluídicas do sangue, o shear stress. Nós hipotetizamos que o shear promove a adaptação celular e células de melanoma se comunicam com (1) outras células tumorais para sustentar a progressão do tumor, ou (2) com células endoteliais para garantir a manutenção vascular. Para isso, comparamos dois modelos de geração do shear denominados pela agitação de placas concêntricas e rotação de um cone sobre placa, que é o modelo padrão dos estudos em células endoteliais. O modelo de placas concêntricas gerou resultados mais robustos, pois garantiu a viabilidade e a adesão celular em até 24h. Também investigamos o potencial angiogênico das células de melanoma após monitorar a ativação de células endoteliais em contato com o meio condicionado (MC) do shear. O shear aumentou significativamente a secreção de Angiopoietina-2, IL-8 e PLGF num contexto independente de galectina-3. Além disso, o shear diminuiu a taxa de crescimento das células que expressam galectina-3, o que não foi observado no tratamento com o MC. Já a capacidade de sobreviver em longo prazo foi maior quando as células tumorais são expostas ao MC derivado do shear, sem influência da expressão de galectina-3. Em relação ao efeito do MC liberado após shear para o remodelamento vascular, nós não observamos alteração na proliferação das células endoteliais. Entretanto, o MC do shear parece acelerar a formação de túbulos e favorecer a desorganização das fibras de actina, além de diminuir a fosforilação de ERK nas células endoteliais. Juntos, esses resultados mostram que o shear induz a secreção de moléculas pró-angiogênicas e pró-inflamatórias que promovem a sobrevivência e proliferação a longo prazo das células tumorais naive. Nas células endoteliais, o MC derivado do shear altera a sinalização de ERK e o rearranjo do citoesqueleto / Melanoma pathogenesis and staging are clinically well characterized, although a large variation is observed in progression and therapeutic responses. Intrinsic mechanisms of melanoma cells contribute to this phenomenon, such as phenotypic plasticity and the expression of certain molecules as galectin-3. Galectin-3 plays a prominent role in tumor growth, metastasis, and to build a functional vascular network. In this way, melanoma has alternative mechanisms of vascularization, in which both endothelial cells and tumor cells form the luminal surface of vessels and are in contact with flowing blood. Here, we postulated that shear stress promotes cell adaptation and melanoma cells communicate with (1) other tumor cells in order to support tumor progression; or (2) with endothelial cells to ensure vascular maintenance. We compared two methods for generating shear stress, namely revolution of concentric plates and stirring of a suspended cone on a plate, which is the gold standard method for studies on endothelial cells. The concentric plates model yielded more reliable results, since it ensured the greater viability and adhesion of cells up to 24h, as compared to the cone and plate system. We then investigated the angiogenic potential of melanoma cells by monitoring the activation of endothelial cells upon exposure to the conditioned medium (CM) from cells exposed to shear stress. Shear stress significantly increased the secretion of Angiopoietin-2, IL-8 and PLGF, in a galectin-3 independent manner. Also, shear stress decreased the growth rate of galectin-3 positive melanoma cells, but not when galectin-3 was down regulated. No such effect was observed with the shear-derived CM. Instead, we did observed long-term melanoma survival under low density upon treatment with the shear-derived CM. In this scenario, the expression of galectin-3 did not change the results. Regarding the effect of shear-derived CM to vascular remodeling, endothelial cells did not show any change in cell proliferation. However, the CM of melanoma cells upon shear accelerated the endothelial cell tube formation and disorganized the actin stress fibers. CM also decreased the phosphorylation of ERK. Taken together, these data indicate that the production of proangiogenic and proinflammatory molecules by melanoma cells under shear enables long-term survival and proliferation of naïve melanoma cells. To endothelial cells, shear-derived CM led to changes in ERK signaling and cytoskeletal rearrangement