Dissertação (mestrado)—Universidade de Brasília, Faculdade de Ciências da Saúde, Programa de Pós-Graduação em Ciências Farmacêuticas, 2018. / Submitted by Raquel Viana (raquelviana@bce.unb.br) on 2018-07-12T18:07:51Z No. of bitstreams: 1 2018_GleiceRochaFerreiraBorges.pdf: 4033638 bytes, checksum: bdf4bec06138b02aaabefb94f878dbde (MD5) / Approved for entry into archive by Raquel Viana (raquelviana@bce.unb.br) on 2018-07-14T20:17:47Z (GMT) No. of bitstreams: 1 2018_GleiceRochaFerreiraBorges.pdf: 4033638 bytes, checksum: bdf4bec06138b02aaabefb94f878dbde (MD5) / Made available in DSpace on 2018-07-14T20:17:47Z (GMT). No. of bitstreams: 1 2018_GleiceRochaFerreiraBorges.pdf: 4033638 bytes, checksum: bdf4bec06138b02aaabefb94f878dbde (MD5) Previous issue date: 2018-07-06 / Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior (CAPES). / Doenças metabólicas como o diabetes tipo 2 têm crescido em prevalência em todo o mundo. Diversas alternativas farmacológicas têm sido usadas, porém com importantes efeitos adversos, como exemplo, a hipoglicemia. Os receptores de ácidos graxos 1 e 4 (FFAR1 e FFAR4) têm sido investigados como possíveis alvos para o tratamento de diabéticos, porém, até o momento, nenhum fármaco com alvo nestes receptores atingiu sucesso em todas as fases clínicas. Com objetivo de encontrar novos ligantes, diversos compostos foram testados para atividade agonista e antagonista nos receptores FFAR1 e FFAR4 em ensaios de recrutamento de β-arrestina e de mobilização de cálcio. Foram encontrados quatro antagonistas e um agonista com atividade moderada para o receptor FFAR1, e um agonista moderado para FFAR4. A análise de estrutura-atividade (SAR)dos derivados de diindolilmetano mostrou que substitutos longos não foram bem tolerados na ponte de metileno e apenas substitutosaltamente eletronegativos deflúor foram tolerados na posição 4 de cada indolda molécula. Os ligantes foram também testados para a atividade adipogênica in vitro. Desses, apenas Yazh 357 mostrou um potencial adipogênicocom aumento da expressão gênica de Fabp4, Pparge Ffar4 durante o processo de diferenciação. Estudos adicionais são necessários para esclarecer o possível alvo desse ligante no processo de maturação do adipócito. / Metabolic diseases, liketype 2 diabetes, are increasing in prevalence worldwide. Several pharmacologic alternatives have been used, however with side effects such as the hypoglycemia. The free fatty acids receptor 1 and 4 (FFAR1 and FFAR4)have been investigatedas possible alternatives for the treatment of these patients, but so far none medicine targeting these receptors could reachsuccess in all the clinical trials. Aiming to find new ligands, many compounds were testedfor agonist and antagonist activity at FFAR1 and FFAR4 using β-arrestin recruitment and calcium mobilization assays. Four antagonists and one agonist were found with moderate activity atFFAR1, while forFFAR4 one moderate agonist was found. The structure activity relationship (SAR)of diindolylmethane derivatives showed that longsubstitutes were not well tolerated in the methylene bridge, and only the highly electronegative substitute fluorine was tolerated at position 4of each distal aromatic system of the molecule. The ligands were also testedfor their adipogenic activity in vitro. Only Yazh 357 showed an adipogenic potential, increasing the gene expression of Fabp4, Pparge Ffar4 during the differentiation process. Additional studies are necessary to clarify the possible target of this ligandin the process of adipocyte maturation.

Submitted by Alice Araujo (alice.caraujo@ufpe.br) on 2018-04-13T22:40:15Z No. of bitstreams: 1 DISSERTAÇÃO Amanda Costa de Lima.pdf: 1322322 bytes, checksum: 726fb58b721f569c6b8bead2aec546ec (MD5) / Made available in DSpace on 2018-04-13T22:40:15Z (GMT). No. of bitstreams: 1 DISSERTAÇÃO Amanda Costa de Lima.pdf: 1322322 bytes, checksum: 726fb58b721f569c6b8bead2aec546ec (MD5) Previous issue date: 2015-03-02 / CAPES / O consumo de dieta hiperlipídica e hipercalórica durante o período perinatal induz a disfunções metabólicas como desenvolvimento de adiposidade precoce, alterações de crescimento e hiperfagia. O presente estudo avaliou os efeitos da utilização perinatal de dieta hiperlipídica/hipercalórica sobre gestantes, nutrizes e prole. Ratos Wistar foram divididos em dois grupos, de acordo com a manipulação nutricional realizada do 1º dia de gestação ao 21º dia de lactação: Grupo Controle (GC) e Grupo Hiperlipídico/ Hipercalórico (GH). O GC (n=10) foi alimentado com dieta Nuvilab® (calorias: 357,11kcal/100g e lipídios: 5,63g/100g) durante gestação e lactação. O GH recebeu dieta hiperlipídica/hipercalórica durante o mesmo período (calorias: 489,61kcal/100g e lipídios: 25,37g/100g). Nas ratas prenhas e lactantes foram analisados, peso corporal, composição corporal e ingestão alimentar. Na prole, até os 21 dias de vida pós-natal, foram analisados desempenho na lactação, evolução ponderal e medidas murinométricas. Aos 30 dias de vida, os filhotes foram avaliados em relação à composição corporal e medidas murinométricas. Também foi analisado o consumo alimentar dos filhotes após a lactação. O presente trabalho demonstrou que a manipulação nutricional com dieta rica em gorduras não afetou o desempenho da lactação aos dias 7, 14 e 21 dias de vida, porém, levou a alterações nas medidas murinométricas na prole do GH que apresentou menor circunferência torácica, menor circunferência abdominal e menor comprimento naso-anal. Os efeitos tardios da ingestão perinatal de dieta hiperlipídica foram evidenciados com a redução no consumo alimentar aos 30 dias de vida. Em relação às medidas murinométricas no 30º dia pós-natal, o único parâmetro que foi diferente entre os grupos foi o comprimento naso-anal, estando diminuído no GH. Houve maior adiposidade no grupo submetido à dieta hiperlipídica/hipercalórica. Em conjunto, os resultados desse trabalho mostram que um ambiente perinatal composto por um excesso de calorias e lipídeos é capaz de afetar parâmetros relacionados ao desenvolvimento e aumentar a adiposidade corporal, sendo fator de risco para obesidade a longo prazo. / The consumption of high fat and high calorie diet during the perinatal period induces metabolic dysfunctions such as development of early adiposity, growth changes and hyperphagia. This study evaluated the effects of perinatal use of high fat / high calorie diet for pregnant women, nursing mothers and offspring. Wistar rats were divided into two groups according to nutritional manipulation performed the 1st day of gestation to 21 days of lactation: Control Group (CG) and hyperlipidic Group / hipercalórico (GH). The GC (n = 10) was fed Nuvilab® diet (calories: 357,11kcal / 100g and lipids: 5,63g / 100g) during pregnancy and lactation. The GH received high fat / high calorie diet during the same period (calories: 489,61kcal / 100g and lipids: 25,37g / 100g). In pregnant and lactating rats were analyzed, body weight, body composition and food intake. In the offspring, up to 21 days of postnatal life, were analyzed performance in lactation, weight gain and murinométricas measures. At 30 days of age, the pups were assessed for body composition and murinométricas measures. Also analyzed the food intake of puppies after lactation. This study demonstrated that nutritional manipulation with high-fat diet did not affect the performance of lactation on days 7, 14 and 21 days of life, however, led to changes in murinométricas measures in the offspring of GH showed lower chest circumference, smaller circumference abdominal and lower naso-anal length. Late effects of perinatal intake of fat diet were highlighted with reduced food intake at 30 days of life. Regarding murinométricas measures on the 30th postnatal day, the only parameter that differed between the groups was the naso-anal length and is decreased in the GH. There was a greater adiposity in the group submitted to high fat / high calorie diet. Taken together, the results of this work show that a perinatal environment composed of an excess of calories and lipids can affect parameters related to the development and increase body fat, being risk factor for long-term obesity.

Considerando que a SAA é uma proteína de fase aguda e que uma concentração elevada desta proteína é observada em pacientes obesos e com resistência à insulina, estimulou-se pré-adipócitos murinos 3T3-L1 a baixas concentrações de rSAA durante o processo de proliferação e diferenciação. Ensaios de incorporação de [metil-3H]-timidina, ciclo e viabilidade celular por citometria de fluxo foram realizados, assim como genes adipogênicos foram determinados durante a fase de diferenciação. Ainda, investigou-se a participação da rSAA metabolismo da glicose, bem como a expressão do seu receptor GLUT4 e os perfis de lipólise. Como resultados, obteve-se que a rSAA causou um aumento na proliferação celular assim como na porcentagem de células na fase S. Este efeito foi dose dependente e mediado via sinalização da ERK1/2. Ainda, rSAA inibiu a diferenciação por meio da diminuição da expressão de fatores transcrição (PPARγ, C/EBPβ e C/EBPα) e proteínas adipogênicas (FABP4 e perilipina). Em relação à captação de 2-desoxi-[1,2-3H]-D-glicose, a rSAA preveniu este processo, corroborando com os resultados de expressão diminuída receptor GLUT4. Ainda, o aumento da lipólise provocada pela rSAA, favorece resistência à insulina no modelo estudado. Portanto, conclui-se que a SAA aumenta a proliferação mas inibe a diferenciação de células 3T3-L1 sugerindo papel importante desta proteína no processo de adipogênese. / Considering that SAA is an acute phase protein and increased serum levels are associated with chronic hyperglycemia, insulin resistance and obesity, we first examined the possibility that rSAA could affect proliferation and differentiation 3T3-L1 preadipocytes. 3T3-L1 adipocytes were treated with recombinant human SAA and [methyl-3H]-thymidine incorporation, flow cytometric analysis of cell cycle and viability were performed. Also, gene expression profiles of adipogenic factor were performed during differentiation protocol as well as glucose uptake, GLUT4 gene expression and lipolysis assay. rSAA caused an increment in cell proliferation consisted with FACS analysis with a percentage of cells in the S phase. Cell proliferation was mediated by ERK1/2 signaling pathway and in dose-dependent manner. Also, SAA inhibited differentiation process by decreasing adipogenic genes PPARγ, C/EBPβ, C/EBPα, and proteins FABP4, and perilipin expression. Also, rSAA prevented 2-deoxy-[1,2-3H]-glucose uptake and GLUT4 expression. In addiction, lipolysis was increased favoring insulin resistance in 3T3L1 adipogenic model. In conclusion, it was demonstrated that rSAA enhances proliferation but prevents differentiation in 3T3-L1 adipocytes, supporting a even more complex participation, than previously expected, of inflammatory proteins the adipogenic process.

Introdução: A doxorrubicina (DOX) é um quimioterápico que gera efeitos tóxicos no tecido adiposo (T.A.) e reduz a qualidade de vida dos pacientes. Objetivos: Investigar os efeitos metabólicos do tratamento com DOX no T.A. branco e propor terapia adjuvante que atenue efeitos deletérios. Métodos: Procedimento experimental 1: ratos Wistar foram tratados com dose única de DOX (15mg/kg). Cultura de células: 3T3L1 foram incubadas por 24h, 96h e 12 dias com DOX. Procedimento experimental 2: animais C57/BL6 receberam doses fracionadas de DOX associado ao uso de metformina (MET) (300mg/kg, diário) ou não. Conclusão: A DOX gera um alto impacto sobre a homeostasia do T.A. branco tanto no tratamento agudo com dose única, como no tratamento crônico com doses mais baixas. Os processos fisiológicos do tecido adiposo sofreram profundas alterações, o que resultou em menor tamanho do adipócito, maior fibrose, diminuição das vias metabólicas e redução da adiponectina e leptina circulantes, e o tratamento com MET não reverteu esses efeitos, só prevenindo o processo de fibrose do TA. / Introduction: Doxorubicin (DOX) is a chemotherapy that generates toxic effects on adipose tissue (AT) and reduces the quality of life of patients. Objectives: To investigate the metabolic effects of treatment with DOX on AT white and to propose adjuvant therapy to mitigate deleterious effects. Methods: Experimental Procedure 1: Wistar rats were treated with a single dose of doxorubicin (15mg/ kg). Cell Culture: 3T3-L1 were incubated for 24h, 96h and 12 days with doxorubicin. Experimental procedure 2: C57/BL6 mice received fractionated doses of DOX associated with the use of metformin (MET) (300 mg/kg daily) or not. Conclusion: DOX generates a high impact on the homeostasis of white AT in both acute single dose treatment, such as in chronic treatment with lower doses. The physiological processes of AT have undergone major changes, resulting in a smaller of adipocytes, increased fibrosis, reduction in metabolic pathways and decreased circulating adiponectin and leptin, and the treatment with MET did not reverse these effects, only prevent the fibrosis process on AT.

Introdução: A doxorrubicina (DOX) é um quimioterápico que gera efeitos tóxicos no tecido adiposo (T.A.) e reduz a qualidade de vida dos pacientes. Objetivos: Investigar os efeitos metabólicos do tratamento com DOX no T.A. branco e propor terapia adjuvante que atenue efeitos deletérios. Métodos: Procedimento experimental 1: ratos Wistar foram tratados com dose única de DOX (15mg/kg). Cultura de células: 3T3L1 foram incubadas por 24h, 96h e 12 dias com DOX. Procedimento experimental 2: animais C57/BL6 receberam doses fracionadas de DOX associado ao uso de metformina (MET) (300mg/kg, diário) ou não. Conclusão: A DOX gera um alto impacto sobre a homeostasia do T.A. branco tanto no tratamento agudo com dose única, como no tratamento crônico com doses mais baixas. Os processos fisiológicos do tecido adiposo sofreram profundas alterações, o que resultou em menor tamanho do adipócito, maior fibrose, diminuição das vias metabólicas e redução da adiponectina e leptina circulantes, e o tratamento com MET não reverteu esses efeitos, só prevenindo o processo de fibrose do TA. / Introduction: Doxorubicin (DOX) is a chemotherapy that generates toxic effects on adipose tissue (AT) and reduces the quality of life of patients. Objectives: To investigate the metabolic effects of treatment with DOX on AT white and to propose adjuvant therapy to mitigate deleterious effects. Methods: Experimental Procedure 1: Wistar rats were treated with a single dose of doxorubicin (15mg/ kg). Cell Culture: 3T3-L1 were incubated for 24h, 96h and 12 days with doxorubicin. Experimental procedure 2: C57/BL6 mice received fractionated doses of DOX associated with the use of metformin (MET) (300 mg/kg daily) or not. Conclusion: DOX generates a high impact on the homeostasis of white AT in both acute single dose treatment, such as in chronic treatment with lower doses. The physiological processes of AT have undergone major changes, resulting in a smaller of adipocytes, increased fibrosis, reduction in metabolic pathways and decreased circulating adiponectin and leptin, and the treatment with MET did not reverse these effects, only prevent the fibrosis process on AT.

Considerando que a SAA é uma proteína de fase aguda e que uma concentração elevada desta proteína é observada em pacientes obesos e com resistência à insulina, estimulou-se pré-adipócitos murinos 3T3-L1 a baixas concentrações de rSAA durante o processo de proliferação e diferenciação. Ensaios de incorporação de [metil-3H]-timidina, ciclo e viabilidade celular por citometria de fluxo foram realizados, assim como genes adipogênicos foram determinados durante a fase de diferenciação. Ainda, investigou-se a participação da rSAA metabolismo da glicose, bem como a expressão do seu receptor GLUT4 e os perfis de lipólise. Como resultados, obteve-se que a rSAA causou um aumento na proliferação celular assim como na porcentagem de células na fase S. Este efeito foi dose dependente e mediado via sinalização da ERK1/2. Ainda, rSAA inibiu a diferenciação por meio da diminuição da expressão de fatores transcrição (PPARγ, C/EBPβ e C/EBPα) e proteínas adipogênicas (FABP4 e perilipina). Em relação à captação de 2-desoxi-[1,2-3H]-D-glicose, a rSAA preveniu este processo, corroborando com os resultados de expressão diminuída receptor GLUT4. Ainda, o aumento da lipólise provocada pela rSAA, favorece resistência à insulina no modelo estudado. Portanto, conclui-se que a SAA aumenta a proliferação mas inibe a diferenciação de células 3T3-L1 sugerindo papel importante desta proteína no processo de adipogênese. / Considering that SAA is an acute phase protein and increased serum levels are associated with chronic hyperglycemia, insulin resistance and obesity, we first examined the possibility that rSAA could affect proliferation and differentiation 3T3-L1 preadipocytes. 3T3-L1 adipocytes were treated with recombinant human SAA and [methyl-3H]-thymidine incorporation, flow cytometric analysis of cell cycle and viability were performed. Also, gene expression profiles of adipogenic factor were performed during differentiation protocol as well as glucose uptake, GLUT4 gene expression and lipolysis assay. rSAA caused an increment in cell proliferation consisted with FACS analysis with a percentage of cells in the S phase. Cell proliferation was mediated by ERK1/2 signaling pathway and in dose-dependent manner. Also, SAA inhibited differentiation process by decreasing adipogenic genes PPARγ, C/EBPβ, C/EBPα, and proteins FABP4, and perilipin expression. Also, rSAA prevented 2-deoxy-[1,2-3H]-glucose uptake and GLUT4 expression. In addiction, lipolysis was increased favoring insulin resistance in 3T3L1 adipogenic model. In conclusion, it was demonstrated that rSAA enhances proliferation but prevents differentiation in 3T3-L1 adipocytes, supporting a even more complex participation, than previously expected, of inflammatory proteins the adipogenic process.