Submitted by Nathália Neves (nathalia.neves@ufpe.br) on 2015-03-04T18:33:43Z No. of bitstreams: 2 Dissertação Formato digital - Juliana de Castro 2013.1.pdf: 985270 bytes, checksum: 14f3a13c691b9d8853fcfbe2c0c26fe2 (MD5) license_rdf: 1232 bytes, checksum: 66e71c371cc565284e70f40736c94386 (MD5) / Made available in DSpace on 2015-03-04T18:33:43Z (GMT). No. of bitstreams: 2 Dissertação Formato digital - Juliana de Castro 2013.1.pdf: 985270 bytes, checksum: 14f3a13c691b9d8853fcfbe2c0c26fe2 (MD5) license_rdf: 1232 bytes, checksum: 66e71c371cc565284e70f40736c94386 (MD5) Previous issue date: 2013-02-28 / Inhame, macaxeira e batata-doce são vegetais ricos em amido e importantes sócio economicamente para o Nordeste brasileiro. O solo da rizosfera desses tubérculos e raízes é ambiente rico em bactérias que produzem metabólitos com diversas aplicações biotecnológicas, a exemplo de Polihidroxialcanoatos (PHAs), polímeros biodegradáveis produzidos a partir dos produtos da hidrolise do amido e utilizados na produção de plásticos. O objetivo do trabalho foi isolar e identificar do solo da rizosfera e do aderido à superfície desses três vegetais, bactérias potencialmente produtoras de PHAs, selecionando-as por PCR de colônia e avaliando a produção de PHAs por coloração de Sudan Black. Colônias bacterianas isoladas com características morfológicas distintas foram selecionadas para a PCR de colônia. Das 214 bactérias selecionadas, 11 amostras foram positivas para o gene phaC da via de síntese de PHA. Nove bactérias apresentaram resultado satisfatório para produção de grânulos de PHAs após coloração de Sudan Black. Dentre as bactérias positivas na PCR e Sudan Black, oito foram identificadas por seqüenciamento ao nível de gênero ou espécie, tais como: Pseudomonas, Bacillus, Agrobacterium, Stenotrophomonas, Cupriavidus e Microvirga flocculans, sendo esta última descrita pela primeira vez como produtora de PHA. A aplicação da PCR de colônia com coloração por Sudan Black mostrou-se eficiente e rápida para seleção de bactérias potencialmente produtoras de PHAs a partir de amostras de solo.

Mycobacterium avium subspecies paratuberculosis (MAP) is the causative agent of Johne's disease, a chronic enteritis in ruminants, and has recently been linked to Crohn's disease in humans. To generate an effective vaccine against MAP, it is necessary to identify MAP antigens that trigger protective immunity. Unfortunately, not much is known about MAP proteins despite decades of research. We have previously shown that a 4.8 kb insert from MAP will produce a 16 kDa recombinant protein when expressed in Escherichia coli and 19 kDa recombinant protein when expressed in M smegmatis ( smeg 19K). The difference of 3 kDa in size of these expressed proteins may be related to posttranslational modificatjons that occur in Mycobacterium species. We hypothesized that smeg19K is a lipoglycoprotein since blast analysis revealed approximately 76 % amino acid identity between the MAP 19 kDa protein and a known lipoglycoprotein, the 19 kDa protein of M tuberculosis. This prediction was confirmed following positive staining of smeg19K with Sudan Black 4B, a postelectrophoresis dye used to stain for lipids. Smeg 19K has also stained positively for glycosylation with the lectin concavalin A, a highly specific stain for mannose residues. As expected, treatment with tunicamycin (an antibiotic known to inhibit N-glycosylation) and treatment with deglycosylation assay (non-specific for mannose ), showed no reduction in size of 19 kDa glycolipoproteins. Since covalent modification of proteins with acyl or glycosyl moieties alter immunogenicity and/or pathogenicity, the study here provides foundation for future experiments regarding the antigenicity of MAP 19 kDa lipoglycoprotein and its role in disease pathogenicity.