Submitted by Fabio Sobreira Campos da Costa (fabio.sobreira@ufpe.br) on 2016-06-13T14:01:27Z No. of bitstreams: 2 license_rdf: 1232 bytes, checksum: 66e71c371cc565284e70f40736c94386 (MD5) Thiago Ubiratan Lins e Lins - Tese de Doutorado.pdf: 3503659 bytes, checksum: 9ffe7a8c957730db868f05707e01fef4 (MD5) / Made available in DSpace on 2016-06-13T14:01:27Z (GMT). No. of bitstreams: 2 license_rdf: 1232 bytes, checksum: 66e71c371cc565284e70f40736c94386 (MD5) Thiago Ubiratan Lins e Lins - Tese de Doutorado.pdf: 3503659 bytes, checksum: 9ffe7a8c957730db868f05707e01fef4 (MD5) Previous issue date: 2014-01-23 / FACEPE / Os derivados tiazacridínicos (Z/E)-5-(acridin-9-il) metileno-3-(3-cloro-benzil)-tiazolidin-2,4-diona (LPSF/AC-34) e (Z)-5-(acridin-9-il) metileno-3-(3-cloro-benzil)-4-tioxo-tiazolidin-2-ona (LPSF/AC-129) foram sintetizados. O produto da reação continha 72% do derivado (Z) LPSF/AC-129 e 22% do derivado (Z/E) LPSF/AC-34, com rendimento de 94%. As estruturas químicas dos derivados foram determinadas por espectroscopia no infravermelho, espectroscopia de ressonância magnética nuclear de hidrogênio e espectrometria de massas e a pureza por HPLC-MS. A citotoxicidade da mistura LPSF/AC-34 + LPSF/AC-129 foi avaliada frente a linhagens de células tumorais aderentes e não-aderentes pelo método de MTT. Os valores obtidos para o IC50 foi de 3,98 μM (linfoma de Burkitt - RAJI); 35,6 μM (leucemia de células T - Jurkat); 8,05 μM (leucemia promielocítica aguda - HL-60); 14,27 μM (leucemia linfoblástica aguda - CCRF-CEM); 55,77 μM (glioblastoma - NG97); >100 μM (mama - T47D). A seletividade dos compostos foi avaliada em células mononucleadas do sangue periférico (PBMC) de voluntários sadios e apresentou uma IC50>100μM. Em seguida, avaliou-se por citometria de fluxo o efeito dos derivados no ciclo celular e indução de morte. Observou-se que a mistura LPSF/AC-34 + LPSF/AC-129 na dose de 3,98 μM não causou alterações significativas no ciclo celular e induziu a morte por apoptose na linhagem de linfoma RAJI. Em paralelo, avaliou-se por RT-PCR o efeito dos derivados na expressão dos genes GADD153, PPARγ, Bcl-2, SOD1, Beclin, Bid, p21 e RIP3 nas linhagens HL-60 e CCRF-CEM em comparação às células não tratadas. Após 10 horas de exposição da linhagem HL-60 aos derivados, na dose de 8,05 μM (n=3), observou-se a modulação dos genes GADD153 (12,47 vezes, p=0,0808) e PPARγ (4,82 vezes, p=0,2277). Na linhagem CCRF-CEM (dose de 14,27 μM; n=3) observou-se a modulação dos genes Bcl-2 (0,97 vezes, p=0,4409), Bid (1,62 vezes, p=0,3911), RIP3 (0,97 vezes, p=0,3722) e SOD1 (1,29 vezes, p=0,0172) indicando interferência no estresse oxidativo. Avaliou-se também o efeito dos derivados na expressão protéica de NFkB, Bax, pPTEN e GADD153 por Western Blotting. Observou-se na linhagem HL-60 a modulação de NFkB (p=0,3012; n=3) e de Bax (p=0,9221; n=3). Na linhagem CCRF-CEM observou-se o aumento de NFkB (p=0,0053; n=3) e Bax (p=0,6956; n=3). Os resultados mostraram que os derivados LPSF/AC-34 + LPSF/AC-129 apresentam atividade frente às linhagens de tumores hematopoiéticos e sólidos, modulando expressão gênica e proteica. / The (Z / E) -5- (acridin-9-yl) methylene-3- (3-chloro-benzyl) thiazolidin-2,4-dione (LPSF / AC-34) and (Z) -5 - (acridin-9-yl) methylene-3- (3-chloro-benzyl) -4-thioxo-thiazolidin-2-one (LPSF / AC-129) thiazacridinic derivatives were synthesized. The reaction product contained (Z) LPSF / AC-129 (72%) and (Z / E) LPSF / AC-34 (22%), with 94% of yield. The derivatives chemical structures were determined by infrared spectroscopy, nuclear magnetic resonance spectroscopy and mass spectrometry hydrogen and the purity was determined by HPLC-MS. The mixture LPSF / AC-34 + LPSF / AC-129 cytotoxicity was evaluated against adherent and non-adherent tumor cell lines throught MTT method. The IC50 values obtained was 3,98 μM (Burkitt lymphoma - RAJI); 35,6 μM (T-cell leukemia - Jurkat); 8,05 μM (acute promyelocytic leukemia - HL-60); 14,27 μM (acute lymphoblastic leukemia - CCRF-CEM); 55,77 μM (glioblastoma - NG97); > 100 μM (breast - T47D). The compounds selectivity was assessed in peripheral blood mononuclear cells (PBMC) of healthy volunteers and showed an IC50> 100μM. Then, the derivative effect on cell cycle and induction of death was assayed by flow cytometry. It was observed that the 3,98 μM dose of mixture LPSF / AC-34 + LPSF / AC-129 caused no significant changes in cell cycle and induce death by apoptosis in lymphoma cell line RAJI. In parallel through RT-PCR, it was evaluated the derivatives effect on GADD153, PPAR gamma, Bcl-2, SOD1, Beclin, Bid, RIP3, p21 genes expression in HL-60 and CCRF-CEM tumor cell lines compared to untreated cells . After submitting HL-60 line to 10 hours exposure of 8.05 μM derivatives dose (n = 3), we observed the modulation of GADD153 (12,47 fold, p=0.0808) and PPAR gamma (4,82 fold, p=0.2277) genes. On CCRF-CEM cell line (14,27 μM dose; n=3) it was observed modulation of Bcl-2 (0,97 fold, p = 0,4409), Bid (1,62 fold, p = 0,3911), RIP3 (0,97 fold, p=0,3722) and SOD1 (1,29 fold, p=0,0172) genes indicating interference on oxidative stress. It is also evaluated the derivatives effect on protein expression of NFkB, Bax, GADD153 and pPTEN by Western blotting. It was observed, in HL-60 cell line, the NFkB (p=0,3012; n=3) and Bax (p=0,9221; n=3) modulation. In CCRF-CEM cell line was observed NFkB (p=0,0053; n=3) and Bax (p=0.6956; n=3) increase. The results showed that the derivatives LPSF / AC-34 + LPSF / AC-129 had activity against hematopoietic and solid tumor cell lines by modulating gene and protein expression.