Made available in DSpace on 2014-12-17T14:10:29Z (GMT). No. of bitstreams: 1 AndrewDMoura_DISSERT.pdf: 2171367 bytes, checksum: f41e94b4a019b04f63123834b3af9d4c (MD5) Previous issue date: 2013-04-02 / Conselho Nacional de Desenvolvimento Cient?fico e Tecnol?gico / Toxoplasmosis is a zoonosis of worldwide distribution caused by the protozoan Toxoplasma gondii, triggering dangerous complications in immunocompromised patients and pregnant women, as well as having great economic impact for the livestock. So far the control of toxoplasmosis is made primarily by chemotherapy. However, most drugs used routinely have some limitations. In order to control this disease, several research groups, including ours, has been working to develop a medical-veterinary vaccine based on parasite antigens, vectors and protocols of immunization. In this study were implemented and standardized methodologies for amplification and cloning of recombinant immunogens in the system for the development of a prototype vaccine, based on the surface antigens of T. gondii and recombinant adenovirus encoding these antigens. Genes encoding BAG1, GRA2 and SAG1 proteins were amplified. We established a strategy for cloning SAG1, SAG2, SAG3 and TgAMA1- genes in recombinant system. The genes encoding SAG1 and SAG2 were cloned and their sequences showed high similarity with sequences from GenBank. The virtual translation of these proteins showed polymorphisms in the amino acid sequence, which can be correlated with levels of antigenicity. Simultaneously, the adenovirus encoding the SAGs (HAdSAGs) were expanded, purificated and characterizated. Immunization of C57bl/6 mice, using viral supernatant was not enought to elicit immune responses at high levels, being required HAdSAGs titration for future immunizations. Therefore, this study allowed the cloning of the two genes important for the development of a prototype vaccine. Besides, implementations methodologies that permit advancements in the development of a vaccine against toxoplasmosis using adenovirus to express proteins of the parasite / A toxoplasmose ? uma zoonose de distribui??o mundial causada pelo protozo?rio Toxoplasma gondi podendo desencadear graves complica??es em pacientes imunossuprimidos e gestantes; bem como acarretando grande impacto econ?mico para a pecu?ria. At? o momento o controle da toxoplasmose ? feito basicamente pela quimioterapia. Contudo, a maioria das drogas utilizadas na rotina apresentam alguma limita??o. No intuito do controle dessa parasitose, diversos grupos de pesquisas, inclusive o nosso, v?m trabalhando para o desenvolvimento de uma vacina m?dico-veterin?ria com base em ant?genos do parasito, vetores e protocolos para imuniza??o. Nesse estudo foram implantadas e padronizadas metodologias para amplifica??o e clonagem de imun?genos em sistema recombinante visando o desenvolvimento de um prot?tipo vacinal, tendo como base os ant?genos de superf?cie de T. gondii e adenov?rus recombinante codificando esses ant?genos. Os genes que codificam as prote?nas BAG1, GRA2 e SAG1 foram amplificados. Foi estabelecida uma estrat?gia de clonagem dos genes SAG1, SAG2, SAG3 e TgAMA-1 em sistema recombinante. Os genes que codificam SAG1 e SAG2 foram clonados e suas sequ?ncias apresentaram grande similaridade com sequ?ncias depositadas no GenBank. A tradu??o virtual dessas prote?nas apresentou polimorfismos no n?vel de amino?cidos, que poder?o ser correlacionadas com n?veis de antigenicidade. Paralelamente, foi realizada a expans?o, purifica??o e caracteriza??o dos adenov?rus que codificam as SAGs (HAdSAGs). A imuniza??o de camundongos C57BL/6, utilizando o sobrenadante viral, n?o foi suficiente para desencadear respostas imunol?gicas em altos n?veis, sendo necess?ria a titula??o dos HAdSAGs para futuras imuniza??es. Portanto, esse estudo permitiu a clonagem de dois genes importantes para o desenvolvimento de um prot?tipo vacinal, al?m de implementa??es de metodologias que permitir?o avan?os para o desenvolvimento de uma vacina contra a toxoplasmose usando adenov?rus que expressem prote?nas do parasito