Hannover, University, Diss., 2005.

Hannover, University, Diss., 2004.

Marburg, Universiẗat, Diss., 2004.

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The Arbuscular mycorrhiza (AM) symbiosis is a mutual association formed by plant roots and soil fungi. Most vascular flowering plants have the ability to form AM associations, which show significant impact on ecosystem function and plant health. This association is based on the mutual exchange of nutrients between plant and fungus. Therefore, AM association leads to increased demands for photosynthesis. The main aim of this study was to investigate the pathway used by plants during AM to increase the photosynthetic performance. To achieve this aim, we used the model legume Medicago truncatula. We have found out that AM symbiosis develops in roots, where AM fungi colonize the roots, leading to better plant growth and more biomass. Furthermore, AM symbiosis increases chlorophyll content and photosynthetic electron transport rate in leaves. Based on these results we suggest that AM symbiosis increases both efficiency and capacity of photosynthetic apparatus in Medicago truncatula

This research investigated early transcriptional responses of the model legume, Medicago truncatula, to herbivory by caterpillars of the beet armyworm, Spodoptera exigua. Differentially expressed genes were identified by the differential display technique, cDNA-amplified fragment length polymorphism (cDNA-AFLP). To distinguish between caterpillar-specific responses and general wound responses, a subset of plants was mechanically damaged. Furthermore, to identify responses to salivary elicitors, plants were subject to herbivory by caterpillars with normal salivary secretions and those that had their spinneret, the appendage through which labial saliva is secreted, cauterized shut. Eighteen differentially expressed gene fragments, representing 16 genes, were identified. The expression pattern of 5 of these genes was analyzed by Northern analysis, confirming a caterpillar-specific reduction in transcripts encoding rubisco activase and glyceraldehyde-3-phosphate dehydrogenase. This research shows that plants are able to differentiate between caterpillar herbivory and mechanical damage and that transcriptional response are initiated within one hour after caterpillar infestation.

Arbuscular mycorrhizal (AM) fungi are a group of fungi that are able to establish a symbiotic relationship with the root system of many land plants. This symbiosis improves plant fitness by increasing the uptake of crucial mineral nutrients, particularly phosphorus and nitrogen. In return, the fungi receive organic carbon from the plant host in the form of sugars and lipids. The objective of my research is to assess whether the Nitrate and Peptide Transporter Family (NPF) of transport proteins play a role in mediating AM symbiosis. Firstly, we explored the involvement of NPF genes NPF1B and NPF4.12 by examining the phenotype of Medicago truncatula mutants. Secondly, we employed a modified yeast two-hybrid system to determine the phytohormone import capabilities of these NPF transport systems. Lastly, we employed reporter gene fusions to assess the spatial and temporal expression profiles of these NPF genes. The results of our research do not support our hypothesis that these NPF genes play a role in mediating AMF symbiosis. The results of the modified yeast-two hybrid tests revealed abscisic acid (ABA) and gibberellic acid (GA3) import capabilities of the transport system encoded by the gene NPF4.12. Future study of the diverse mechanisms that underpin AM symbiosis will nonetheless be useful to the agricultural industry by reducing farmer's reliance on chemical fertilizers.

Die Mykorrhiza (griechisch: mýkēs für „Pilz”; rhiza für „Wurzel”) stellt eine Symbiose zwischen Pilzen und einem Großteil der Landpflanzen dar. Der Pilz verbessert durch die Symbiose die Versorgung der Pflanze mit Nährstoffen, während die Pflanze den Pilz mit Kohlenhydraten versorgt. Die arbuskuläre Mykorrhiza (AM) stellt dabei einen beson-dere Form der Mykorrhiza dar. Der AM-Pilz bildet dabei während der Symbiose die namensgebenden Arbuskeln innerhalb der Wurzelzellen als Ort des primären Nährstoff- austausches aus. Die AM-Symbiose (AMS) ist der Forschungsschwerpunkt dieser Arbeit. Als Modellorganismen wurden Medicago truncatula und Glomus intraradices verwendet. Es wurden Transkriptionsanalysen durchgeführt um u.a. AMS regulierte Transkriptions- faktoren (TFs) zu identifizieren. Die Aktivität der Promotoren von drei der so identifizier-ten AMS-regulierten TFs (MtOFTN, MtNTS, MtDES) wurde mit Hilfe eine Reportergens visualisiert. Der Bereich der größten Promotoraktivität waren in einem Fall nur die ar- buskelhaltigen Zellen (MtOFTN). Im zweiten Fall war der Promotor auch aktiv in nicht arbuskelhaltigen Zellen, jedoch am stärksten aktiv in den arbuskelhaltigen Zellen (MtNTS). Ein weiterer Promotor war in arbuskelhaltigen Zellen und den diesen benach-barten Zellen gleich aktiv (MtDES). Zusätzlich wurden weitere Gene als AMS-reguliert identifiziert und es wurde für drei dieser Gene (MtPPK, MtAmT, MtMDRL) ebenfalls eine Promotor::Reporter-Aktivitäts- studie durchgeführt. Die Promotoren der Kinase (MtPPK) und des Ammoniumtrans-porters (MtAmt) waren dabei ausschließlich in arbuskelhaltigen Zellen aktiv, während die Aktivität des ABC-Transporters (MtMDRL) keinem bestimmten Zelltyp zuzuordnen war. Für zwei weitere identifizierte Gene, ein Kupfertransporter (MtCoT) und ein Zucker- bzw. Inositoltransporter (MtSuT), wurden RNA-Interferenz (RNAi)-Untersuchungen durchgeführt. Dabei stellte sich in beiden Fällen heraus, dass, sobald ein RNAi-Effekt in den transformierten Wurzeln vorlag, diese in einem deutlich geringerem Ausmaß wie in der Wurzelkontrolle von G. intraradices kolonisiert worden sind. Im Falle von MtCoT könnte das aus dem selben Grund geschehen, wie im Falle von MtPt4. Welche Rolle MtSuT genau in der Ausbildung der AMS spielt und welche Rolle Inositol in der Aus- bildung der AMS spielt müsste durch weitere Untersuchungen am Protein untersucht werden. Weitere Untersuchen an den in dieser Arbeit als spezifisch für arbuskelhaltige Zellen gezeigten Genen MtAmT, MtPPK und MtOFTN könnten ebenfalls aufschlussreich für das weitere Verständnis der AMS sein. Dies trifft auch auf die TFs MtNTS und MtDES zu, die zwar nicht ausschließlich arbuskelspezifisch transkribiert werden, aber auch eine Rolle in der Regulation der AMS innerhalb von M. truncatula Wurzeln zu spielen scheinen. / The mycorrhiza (Greek: mýkēs for "mushroom"; rhiza for "root") is a symbiosis between fungi and the vast majority of land plants. The fungus improves the nutrient supply of the plant, while the plant provides the fungus with carbohydrates. The arbuscular my-corrhiza (AM) represents a special type of mycorrhiza. The AM forms during the sym-biosis eponymous arbuscules within the root cells as the supposed site of the major nu-trient exchange. The AM symbiosis (AMS) is the research focus of this work. Medicago truncatula and Glomus intraradices were used as model organisms. During the project several transcription analysis were performed to identify AMS re-gulated transcription factors (TFs). The activity of the promoters of three of the identified AMS regulated TFs (MtOFTN, MtNTS, MtDES) were visualised using a reporter gene. Cells with promoter activity were in one case the arbuscle containing cells (MtOFTN). In the another case, the promoter was also weakly active in non arbuscle containing cells, however the major site of activity were the arbuscle containing cells (MtNTS). Another promoter was active in arbuscle containing and adjacent cells (MtDES). In addition, other genes were identified as AMS regulated and for three of these genes (MtPPK, MtAmT, MtMDRL) a promoter::reporter activity study was conducted, too. The promoters of the kinase (MtPPK) and the ammonium transporter (MtAmT) were active exclusively in arbuscle containing cells, whereas the activity of the ABC-transporter (MtMDRL) could not be assigned to a specific cell type. For two other identified genes (a copper transporter (MtCoT) and a sugar/ inositol transporter (MtSuT)) RNA-interference (RNAi) studies were carried out. The studies revealed in both cases that, once an RNAi effect was present in the transformed roots, the roots were colonised by G. intraradices in a much lesser extent as in the vector-control. In the case of MtCoT it maybe has the same basic principle as in the case of the phosphate transporter MtPt4. Which role MtSuT and inositol plays during the fo-rmation of the AMS has to be reviewed. Further examinations on the genes MtAmT, MtPPK and MtOFTN could also be reveal-ing for the understanding of the AMS, as their promotors, as shown in this thesis, are exclusively active in arbuscle containing cells The same can be said for the TFs MtNFTS and MtDES. They are not exclusively transcripted in arbuscle containing cells, but nevertheless seem to play a role in the formation of the AMS within M. truncatula roots.

L’émergence et la ré-émergence de maladies que nous connaissons depuis ces cents dernières années représentent une véritable crise sanitaire en grande partie due aux perturbations anthropiques qui modifient les écosystèmes et les interactions entre les parasites et leurs hôtes. La prévention et le contrôle des maladies infectieuses nécessitent la compréhension de leur dynamique dans l’ensemble des compartiments dans lesquels elles circulent. Parmi ces maladies, la fasciolose est une maladie particulièrement sensible aux changements liés à l’Homme. Cette zoonose causée par le parasite Fasciola hepatica, est communément reconnue comme un problème vétérinaire, mais aussi de santé publique, dans certaines régions du monde. Notre étude vise à comprendre la dynamique de circulation et les risques d'émergence de la fasciolose dans un contexte de forte anthropisation. Il s'agit (1) d'étudier la dynamique de l’hôte intermédiaire, un mollusque de la famille des lymnaieidae. (2) de comprendre la dynamique et la diversité du parasite entre et au sein de ses différents compartiments hôtes définitifs. Ces travaux ont été menés sur le territoire camarguais sur le domaine de la Tour du Valat, nous permettant d’avoir accès aux hôtes définitifs, sauvages (ragondins et sangliers), domestiques (taureaux traités et non traités) et à l’hôte intermédiaire, Galba truncatula appelé communément limnée tronquée. Dans un premier temps, nous avons caractérisé la végétation des habitats favorables à la présence du mollusque et nous avons trouvé que les mares semblaient être des zones présentant un risque plus important que les canaux d’irrigation pour la transmission de la fasciolose. Puis, nous nous sommes intéressée à l’influence des habitats sur la dynamique de G. truncatula par des approches de génétique des populations. Nos résultats ont permis de montrer que la permanence des habitats et la connectivité influencent le mode de reproduction, la structuration des populations et la dispersion des limnées en Camargue. Dans un second temps, nous avons étudié la dynamique et la circulation du parasite au sein du compartiment hôte définitif. Nos résultats de la génétique des populations du parasite chez les hôtes définitifs, nous ont indiqué qu’il existait sur notre site d’étude plusieurs sites de transmission constituant un seul grand foyer global. Par ailleurs, l’étude de la circulation du parasite entre les hôtes définitifs suggère le rôle des sangliers dans la dispersion de la maladie et le rôle des ragondins dans le maintien du cycle de la fasciolose. Cette étude met en évidence l’intérêt de mener des études à long terme et l’importance de prendre en compte tous les compartiments impliqués pour comprendre l’épidémiologie d’une maladie. Elle souligne également le rôle des activités humaines et de l’écosystème dans la dynamique de la fasciolose. Le but final de cette étude est de proposer une gestion intégrée adaptée au contexte camarguais afin de limiter l’impact sanitaire de la fasciolose mais aussi des autres maladies liées à l’élevage dans cette région. / The emergence and re-emergence of diseases encountered over the last hundred years represent a real health crisis largely due to anthropic disturbances that affect the ecosystems as well as the interactions between parasites and hosts. The prevention and control of emerging infectious diseases require an in-depth understanding of their dynamics in all the compartments in which they occur. Among these diseases, Fasciolosis is particularly sensitive to human related changes. This zoonosis caused by the parasite Fasciola hepatica, is commonly recognized as a veterinary problem and major public health issue in certain countries. Our study aims to understand the circulation dynamics and risks of fasciolosis emergence in a context of high anthropization. Our objective is (1) to study the dynamics of the intermediate host, a mollusc of the lymnaieidae family. (2) to understand the dynamics and diversity of the parasite between and within its different definitive host compartments. This work was carried out in the Camargue in the Tour du Valat estate, allowing us to have access to the definitive hosts, wild (nutria and wild boars), domestic (treated and untreated bulls) and the intermediate host, Galba truncatula. First, we characterized the habitats that are favorable to the intermediate host G. truncatula, presence in Camargue and we found that ponds appear to be areas of higher risk than irrigation channels for fasciolosis transmission. Then, we became interested in the influence of habitats on the dynamics of G. truncatula through population genetics approaches, our results showed that habitat permanence and connectivity influence the reproduction mode, population structure and dispersal of G. truncatula in the Camargue. In a second step, we studied the dynamics and circulation of the parasite within the definitive host compartment. Our results of the population genetic analyses of definitive hosts indicated that there were several transmission sites on our study area that constituted a single large global outbreak. In addition, the study of the circulation of the parasite between wildlife and domestic animals suggests the role of wild boars in the spread of the disease and the role of nutrias in maintaining the fasciolosis cycle. Our work highlights the value of long term studies and the importance of taking into account all the compartments involved to understand the epidemiology of a disease. They also emphasize the role of human activities and ecosystem in the dynamics of fasciolosis. The ultimate goal of this study is to propose integrated management measures adapted to the Camargue context in order to limit the health impact of fasciolosis and other livestock diseases in the region.

L’interaction symbiotique légumineuses-rhizobium nécessite l'infection des racines de la plante par les bactéries et l’initiation de divisions cellulaires dans le cortex racinaire.Les cytokinines sont des hormones végétales agissant via une signalisation par phosphotransfert qui conduit à l’activation de Régulateurs de Réponse de type B (RRBs), des facteurs de transcription régulant l'expression des gènes de réponse primaire aux cytokinines. Une étude phylogénétique menée sur plusieurs espèces de légumineuses a révélé une expansion génique de la famille des RRBs et l’apparition de formes non-canoniques de ces facteurs de transcription. Chez Medicago truncatula,MtRRB3 est le RRB le plus fortement exprimé dans les racines et les nodosités et est impliqué dans la nodulation. En effet, les plantes dont l’expression de MtRRB3 a été réduite par ARNi ainsi que des mutants rrb3 présentent une diminution significative du nombre de nodosités formées. De plus, l’expression de gènes associés à la nodulation, tels que "Nodulation Signalling Pathway 2" (MtNSP2) et "Cell Cycle Switch 52A"(MtCCS52A), est réduite en réponse aux cytokinines dans ces mutants. Des fusions transcriptionnelles avec le rapporteur GUS montrent que MtRRB3, MtNSP2 et MtCCS52Aprésentent un profil d’expression spatiale largement chevauchant dans les racines et lesnodosités. Des expériences de ChIP-qPCR et de trans-activation en protoplastes indiquent par ailleurs que MtRRB3 peut respectivement interagir avec et activer les promoteurs des gènesMtNSP2 et MtCCS52A. Cette thèse a donc permis d’établir des mécanismes moléculaires impliqués dans les régulations transcriptionnelles médiées par les cytokinines lors de la mise en place des nodosités symbiotiques fixatrices d’azote. / The legume-rhizobium interaction requires the infection of plant roots by rhizobia and the initiation of cell divisions in the root cortex. Cytokinins, a class of plant hormones acts trough a phosphotranfert signalling leading to the activation of Type-B Response Regulators(RRBs) which are transcription factors regulating the expression of cytokinins primary response genes. Phylogenetic analyses carried out indifferent legume species genomes showed anexpansion of the RRB genes family associated toan increase in non-canonical RRBs. In Medicago truncatula nodules, MtRRB3 is the most expressed RRB in roots and nodules. MtRRB3 islinked to nodulation as MtRRB3 RNAi silencedplants as well as rrb3 mutants display asignificant decrease of nodule number. Inaddition, the expression of the nodulation related genes Nodulation Signalling Pathway 2(MtNSP2) and Cell Cycle Switch 52A(MtCCS52A) is reduced in response to cytokininsin rrb3 mutants. The expression pattern of apMtRRB3-GUS fusion overlaps with thepMtNSP2-GUS and pMtCCS52A-GUS fusions in roots and nodules. Finally, ChIP-qPCR and protoplast trans-activation experiments showed that MtRRB3 can respectively interacts with and activate MtNSP2 and MtCCS52A promoters. This thesis have thus established molecular mechanisms associated to transcriptional regulations mediated by cytokinins during the legume symbiotic nitrogen-fixing nodulation.