Submitted by Fabiana Gomes (fabianaaj63@gmail.com) on 2017-11-10T14:58:26Z No. of bitstreams: 1 DISSERTAÇÃO DE MESTRADO - PABLO ROCHA - VERSÃO FINAL.pdf: 1806327 bytes, checksum: a0141dc19880422b732febe415fa7d62 (MD5) / Approved for entry into archive by Divisão de Documentação/BC Biblioteca Central (ddbc@ufam.edu.br) on 2017-11-10T18:23:26Z (GMT) No. of bitstreams: 1 DISSERTAÇÃO DE MESTRADO - PABLO ROCHA - VERSÃO FINAL.pdf: 1806327 bytes, checksum: a0141dc19880422b732febe415fa7d62 (MD5) / Approved for entry into archive by Divisão de Documentação/BC Biblioteca Central (ddbc@ufam.edu.br) on 2017-11-10T18:26:52Z (GMT) No. of bitstreams: 1 DISSERTAÇÃO DE MESTRADO - PABLO ROCHA - VERSÃO FINAL.pdf: 1806327 bytes, checksum: a0141dc19880422b732febe415fa7d62 (MD5) / Made available in DSpace on 2017-11-10T18:26:52Z (GMT). No. of bitstreams: 1 DISSERTAÇÃO DE MESTRADO - PABLO ROCHA - VERSÃO FINAL.pdf: 1806327 bytes, checksum: a0141dc19880422b732febe415fa7d62 (MD5) Previous issue date: 2017-06-21 / The present work had the objective of validating a chemometric methodology for extraction and quantification of anonaine, glaziovine, norglaucine and glaucine from samples of 1 gram of leaves of Unonopsis duckei R.E.Fr (annonaceae). These compounds belong to the class of aporphinic alkaloids, substances widely explored in the literature and of important therapeutic properties. For the extraction process a planning with modified simplex-centroid mixtures consisting of four solvents was developed: methanol, chloroform, n-hexane, and acetone. In total, 23 extractive solutions were prepared in order to identify the solution with the best extraction efficiency: 4 unit solutions of 100% in proportion, 6 binary solutions of 50% in proportion, 4 tertiary solutions of 33.33% in proportion, 4 Quaternary solutions of 62.5% + 12.5% in proportion and 5 quaternary solutions of 25% in proportion to represent the central point of the planning. Each sample was extracted for a period of 48 hours and dried with nitrogen gas (N2). From the dry extracts 23 methanol solutions of 1 mg / mL concentration were prepared, which were submitted to the exploratory and quantitative analysis. The exploratory analysis was developed in a UHPLC-ESI+/Q-TOF system while the quantitative analysis was developed in a UHPLC-ESI+/QqQ system. For the chromatographic run, the retention and resolution time parameters were adjusted in order to optimize the chromatographic separation processes. For the optimization of the spectrometric detection and identification process, the potential of the hole, collision energy, collision cell output potential and the transmission of the analyzers were adjusted. The methodology was submitted to validation where the merit figures were validated: selectivity, linearity, precision (interday test), accuracy (percentage of recovery) and limits of detection and quantification. The results indicated that the nº 5 sample of binary methanol/chloroform composition showed the best yield per gram of leaf allowing to obtain 6.79 μg g-1 of anonaine, 131.10 μg g-1 of glaziovine, 40.58 μg g-1 of norglaucine and 20.54 μg g-1 of glaucine. / O presente trabalho teve por objetivo validar uma metodologia quimiométrica para extração e quantificação de anonaína, glaziovina, norglaucina e glaucina a partir de amostras de 1 grama de folhas de Unonopsis duckei R.E.Fr (annonaceae). Tais compostos pertencem a classe dos alcaloides aporfínicos, substâncias bastante exploradas na literatura e de importantes propriedades terapêuticas. Para o processo de extração foi desenvolvido um planejamento com misturas do tipo simplex-centroide modificado constituído por quatro solventes: metanol, clorofórmio, n-hexano, e acetona. No total foram preparadas 23 soluções extratoras a fim de identificar a solução com a melhor eficiência de extração: 4 soluções unitárias de 100% em proporção, 6 soluções binárias de 50% em proporção, 4 soluções terciárias de 33,33% em proporção, 4 soluções quaternárias de 62,5% + 12,5% em proporção e 5 soluções quaternárias de 25% em proporção para representar o ponto central do planejamento. As 23 amostras foram extraídas por um período de 48 horas e secadas a gás nitrogênio (N2). A partir dos extratos secos preparou-se 23 soluções metanólicas de concentração 1 mg/mL que foram submetidas às análises exploratória e quantitativa. A análise exploratória foi desenvolvida em um sistema UHPLC-ESI/Q-TOF enquanto que a análise quantitativa foi desenvolvida em um sistema UHPLC-ESI+/QqQ. Para a corrida cromatográfica foram ajustados os parâmetros tempo de retenção e resolução afim de otimizar os processos de separação cromatográfica. Para a otimização do processo de detecção e identificação espectrométrica foram ajustados o potencial do orifício, energia de colisão, potencial de saída da cela de colisão e a transmissão dos analisadores. A metodologia foi submetida à validação onde foram validadas as figuras do mérito: seletividade, a linearidade, a precisão (ensaio interdia), a exatidão (percentual de recuperação) e os limites de detecção e quantificação. Os resultados indicaram que a amostra de nº 5 de composição binária metanol/clorofórmio apresentou o melhor rendimento por grama de folha permitindo obter 6,79 μg g-1 de anonaína, 131,10 μg g-1 de glaziovina, 40,58 μg g-1 de norglaucina e 20,54 μg g-1 de glaucina.

Made available in DSpace on 2015-04-22T22:02:11Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Felipe_M_A_Silva.pdf: 3616233 bytes, checksum: ce467adbd10803245e8d0c5fdf015ab2 (MD5) Previous issue date: 2011-12-19 / Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior / The neotropical genus Unonopsis, one among the 130 genera belonging to the Annonaceae family, has been a promising source of aporphine alkaloids and derivatives. The antiprotozoal activity of this class of substances, mainly anti-leishmania activity, has aroused the interest of several research groups around the world. In the present work were carried out the analysis from alkaloidal fractions of the leaves, twigs and barks of the trunk from Unonopsis duckei and Unonopsis guatterioides by mass spectrometry, doing an investigation in the alkaloid profile in order to obtain promising structures with activity against Leishmania. The analysis of MSn and LC/APCI/MS of the alkaloidal fractions of U. guatterioides confirmed the presence of some alkaloids previously reported in the literature such as anonaine, asimilobine, liriodenine and lysicamine. It was possible identify the nornuciferine alkaloid which was characterized for the first time in the Unonopsis genus, and suggest the presence of azafluorenone type alkaloid. The spectrometric investigation of U. duckei revealed the presence of aporphine and oxoaporphine alkaloids which were already reported in this genus, as well as guided the isolation of the proaporphine alkaloid glaziovine and the mixture of glaucine and norglaucine alkaloids. These compounds are inedit in the Unonopsis genus. The triterpene polycarpol was isolated from both species, observed U. duckei like the best yield. In the phytochemical investigation of the apolar extracts of U. guatterioides was possible to identify a mixture of sitosterol/stigmasterol steroids. The biological analyses of U. duckei and U. guatterioides alkaloidal fractions showed that four of them were considered highly active, one of them was moderatly active and only one was not showed active against Leishmania amazonensis. Among the substances evaluated, the alkaloid glaziovine showed the most effective activity against Leishmania amazonensis. / O gênero neotropical Unonopsis, um dos 130 gêneros pertencentes à família Annonaceae, tem se mostrado uma fonte promissora de alcalóides aporfínicos e derivados. A atividade antiprotozoário desta classe de substâncias, principalmente a atividade antileishmania, tem despertado o interesse de diversos grupos de pesquisa ao redor do mundo. No presente trabalho foram realizadas as análises das frações alcaloídicas das folhas, galhos e cascas do tronco de Unonopsis duckei e Unonopsis guatterioides por meio de espectrometria de massas, investigando seu perfil alcaloídico com vistas à obtenção de estruturas promissoras em atividade antileishmania. Através das análises de MSn e LC/APCI/MS das frações alcaloídicas de U. guatterioides foi possível confirmar a presença dos alcalóides anonaina, asimilobina, liriodenina e lisicamina, já reportados na literatura da espécie, identificar pela primeira vez no gênero o alcalóide nornuciferina, além de sugerir a presença de um alcalóide do tipo azafluorenona, previamente reportado na espécie U. lindimanii. A investigação espectrométrica de U. duckei revelou a existência de alcalóides aporfínicos e oxoaporfínicos já reportados no gênero, bem como conduziu ao isolamento do alcalóide aporfínico glaziovina e de uma mistura de glaucina e norglaucina, sendo todos esses alcalóides inéditos no gênero. Foi realizado o isolamento do triterpeno policarpol de ambas as espécies, sendo o melhor rendimento observado em U. duckei. A investigação dos constituintes menos polares de U. guatterioides levou ao isolamento de misturas de sitosterol/estigmasterol. Das frações alcaloídicas de U. duckei e U. guatterioides analisadas, quatro foram consideradas altamente ativas, uma ativa e apenas uma não se apresentou ativa frente a Leishmania amazonensis. Entre as substâncias avaliadas, o alcalóide glaziovina apresentou alta atividade frente a Leishmania amazonensis.