CoordenaÃÃo de AperfeiÃoamento de Pessoal de NÃvel Superior / Falciform Anemia (FA) is a hereditary hemoglobinopathy resulting from a β-globin gene mutation (α2β26 GLU→ VAL) that originates a hemoglobin variant called S (HbS). Its polymerization promotes hemolytic and vaso-occlusive crises (VOC). Nowadays it is known that these reactions are initial FA events that unleash a chain reaction that ends with the generation of oxygen reactive types (ORT) nitric oxide (NO) bioavailability reduction, endothelial lesion, susceptibility to infections and a chronic inflammatory process with direct involvement of neutrophils in the development of such mechanisms. Neutrophils of FA patients, besides developing more rigid, non-deformable structures, also show alterations in the expression of adhesion molecules and the production of cytokines and other mediators that may induce or aggravate clinical events observed in the disease. Hydroxyurea (HU) is the most important improvement in FA treatment and the only medicine with a strong impact on the patientsâ quality of life, reducing the number of VOC, hospitalizations and deaths resulting from this condition. However, not much is known about the effects of this medicine on neutrophils and on the functionality of these cells. The present study aimed at investigating cytotoxicity, inflammation and oxidative stress markers in neutrophils of FA patients, as well as the effect of HU treatment over these parameters in hematology ambulatory patients from a university hospital and a blood center, both reference centers in Fortaleza â CearÃ. The sample included 101 adult patients of both sexes diagnosed with FA through molecular study and it was divided into two groups: the SS Group â composed of 47 FA patients and the SSHU Group â composed of 54 FA patients under HU treatment. A control Group AA was composed of 50 healthy individuals, voluntary blood donors matched by age and sex. Neutrophils were isolated from whole blood by differential gradient and used to measure test. In toxicity tests carried out, it was observed that HU did not have any cytotoxic effect on patientsâ neutrophils, however, was shown a cytoprotective action when compared to group AA and SS patients, with a significant reduction (p<0,001) in lactate dehydrogenase (LDH) levels and an increase in the percentage of viable cells through the metil tiazol tetrazolium (MTT) (p<0,001) and the Trypan Blue exclusion tests. Analyzing neutrophil involvement in inflammatory and oxidative stress processes and in FA, there was a significant elevation in the levels of cytokines and pro-inflammatory markers (TNF-α, MPO) and reduced antiinflammatory interleukin IL-10 group SS, as well as a significant decrease in the activity of antioxidant enzymes (SOD and GSH-Px). Patients under medical treatment with the tested medicine showed similar levels to those found in group AA. Oxidative damage were analyzed through malonaldehyde measurement (MDA), which was evidenced statistical differences between all studied groups (p<0,001), however with a higher average value in the non-treated group of patients. The present study ratified the important role of neutrophils in the inflammatory response promoted by the AF, and shown in an unprecedented way, with the Northeast-BR patients, treatment with HU did not reduce the viability of neutrophils, and modulates its mechanisms pro-inflammatory and pro -oxidants at levels comparable to those of healthy individuals. / Anemia Falciforme (AF) Ã uma hemoglobinopatia hereditÃria resultante de uma mutaÃÃo pontual do gene da β-globina (α2β26 GLU→ VAL), originando a hemoglobina S (HbS), cuja polimerizaÃÃo promove crises hemolÃticas e vaso-oclusivas (CVO). Atualmente, sabe-se que as mesmas sÃo eventos iniciais na AF desencadeando uma cascata de reaÃÃes que culmina com geraÃÃo de espÃcies reativas de oxigÃnio, reduÃÃo da biodisponibilidade do Ãxido nÃtrico, lesÃo endotelial, susceptibilidade Ãs infecÃÃes e processo inflamatÃrio crÃnico, com envolvimento direto dos neutrÃfilos nesses mecanismos. Os neutrÃfilos de pacientes com AF exibem estruturas mais rÃgidas e indeformÃveis e alteraÃÃes na expressÃo de molÃculas de adesÃo e produÃÃo de citocinas e outros mediadores que podem induzir ou agravar as manifestaÃÃes clÃnicas da doenÃa. A hidroxiurÃia (HU) constitui o avanÃo mais importante no tratamento da AF, sendo o Ãnico medicamento que, efetivamente, tem forte impacto na melhora da qualidade de vida dos pacientes, reduzindo o nÃmero de CVO, hospitalizaÃÃes e Ãbitos. No entanto, pouco se sabe sobre os efeitos deste medicamento sobre os neutrÃfilos e na funcionalidade dessas cÃlulas. O estudo teve como objetivo principal investigar a citotoxicidade, inflamaÃÃo e estresse oxidativo em neutrÃfilos de pacientes com AF, bem como o efeito do tratamento com HU sobre esses parÃmetros em pacientes atendidos pelos serviÃos ambulatoriais de hematologia de um hospital universitÃrio e de um hemocentro, ambos de referÃncia em Fortaleza-CearÃ. A amostra foi constituÃda por 101 pacientes adultos, de ambos os sexos, diagnosticados por estudo molecular, sendo divididos em dois grupos: Grupo SSâ formado por 47 pacientes com AF, e, Grupo SSHUâ formado por 54 pacientes em tratamento com HU. Um grupo controle, Grupo AA, foi formado por 50 indivÃduos saudÃveis, doadores voluntÃrios de sangue, com idade e sexo pareados. Os neutrÃfilos foram isolados do sangue total por diferenÃa de gradiente e utilizados para mensuraÃÃo dos testes. Nos ensaios de toxicidade, observou-se que a HU nÃo exerceu efeito citotÃxico nos neutrÃfilos dos pacientes, entretanto, foi evidenciado uma aÃÃo citoprotetora sobre os mesmos quando comparados aos pacientes SS e grupo AA, com uma reduÃÃo significativa (p<0,001) na atividade de lactato desidrogenase (LDH) e aumento no percentual de cÃlulas viÃveis pelo teste de exclusÃo por Azul de Tripan e ensaio do metil tiazol tetrazÃlio (MTT) (p<0,001). Analisando o envolvimento dos neutrÃfilos nos processos de inflamaÃÃo e estresse oxidativo na AF, constatou-se uma significativa elevaÃÃo nos nÃveis de citocinas e marcadores prÃ-inflamatÃrios (TNF-α, MPO) e uma reduÃÃo da interleucina anti-inflamatÃria IL-10 no grupo SS, bem como uma diminuiÃÃo significante da atividade das enzimas antioxidantes (SOD e GSH-Px). Os pacientes em terapia com HU apresentaram nÃveis semelhantes aos encontrados no grupo AA. Danos oxidativos foram analisados pela mensuraÃÃo do malonaldeÃdo (MDA), evidenciando diferenÃa estatÃstica entre todos os grupos do estudo (p<0,001), porÃm, com valor de mÃdia superior no grupo SS. O presente estudo ratificou o papel preponderante dos neutrÃfilos na resposta inflamatÃria promovida pela AF, e mostrou de maneira inÃdita, com pacientes do Nordeste-BR, que o tratamento com HU nÃo reduziu a viabilidade de neutrÃfilos, e modulou seus mecanismos prÃ-inflamatÃrios e prÃ-oxidantes a nÃveis comparÃveis aos de indivÃduos sadios.
Identifer | oai:union.ndltd.org:IBICT/oai:www.teses.ufc.br:6446 |
Date | 20 February 2013 |
Creators | Alano Martins Pedrosa |
Contributors | RomÃlia Pinheiro GonÃalves Lemes, Luzia Kalyne Almeida Moreira Leal, ArlÃndia Cristina Lima Nobre de Morais |
Publisher | Universidade Federal do CearÃ, Programa de PÃs-GraduaÃÃo em CiÃncias FarmacÃuticas, UFC, BR |
Source Sets | IBICT Brazilian ETDs |
Language | Portuguese |
Detected Language | English |
Type | info:eu-repo/semantics/publishedVersion, info:eu-repo/semantics/masterThesis |
Format | application/pdf |
Source | reponame:Biblioteca Digital de Teses e Dissertações da UFC, instname:Universidade Federal do Ceará, instacron:UFC |
Rights | info:eu-repo/semantics/openAccess |
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