CoordenaÃÃo de AperfeÃoamento de Pessoal de NÃvel Superior / A doenÃa de chagas à um grande problema de saÃde pÃblica, afeta cerca de 6 milhÃes de pessoas em todo o mundo e causa altos Ãndices de morbidade e mortalidade nas populaÃÃes afetadas. O benzonidazol (BZ), fÃrmaco utilizado no tratamento apresenta eficÃcia limitada e provoca sÃrios efeitos adversos. O transporte de fÃrmacos por meio de nanopartÃculas tem demonstrado eficiÃncia quanto à liberaÃÃo controlada e direcionada de molÃculas farmacolÃgicas, alÃm de apresentar propriedades desejÃveis, como boa biocompatibilidade e biodegradabilidade. O objetivo do presente trabalho foi avaliar a citoxicidade de nanopartÃculas de benzonidazol em carbonato de cÃlcio (BZ@CaCO3) sobre cÃlulas de hospedeiras LLC-MK2; determinar o efeito tripanocida sobre as formas epimastigotas, tripomastigotas e amastigotas da cepa Y de T. cruzi e comparar ao efeito do BZ, bem como, caracterizar o mecanismo de morte. Os testes de citotoxicidade utilizando o mÃtodo do MTT realizados com cÃlulas LLC-MK2 cultivadas com meio DMEM a 10% de SBF demonstraram IC50 de 55 Âg/mL para BZ@CaCO3 e 160 Âg/mL para BZ. Formas epimastigotas foram cultivadas em meio LIT a 10% de SBF a 28ÂC na presenÃa de BZ@CaCO3 por 24, 48 e 72 horas. BZ@CaCO3 mostrou atividade tripanocida sobre formas epimastigotas nos trÃs tempos de tratamento (CI50 24h = 8,72 Âg/mL; CI50 48h = 8 Âg/mL; CI50 72 h = 4,8 Âg/ml) sendo esse efeito mais significativo que o do BZ (CI50 24h = 56,7 Âg/mL CI50 48h = 15,9 Âg/mL; CI50 72h = 4,3 Âg/ml). Formas tripomastigotas foram obtidas a partir dos sobrenadantes de cÃlulas LLC-MK2 infectadas, ressuspensas em meio DMEM com 2% de SBF e tratadas durante 24 h. As formas tripomastigotas foram mais susceptÃveis a BZ@CaCO3 (IC50 = 1,8 Âg/mL) do que ao BZ (CI50= 67 Âg/mL). Esses ensaios tambÃm foram realizados com nanopartÃculas de carbonato de cÃlcio livres de fÃrmacos (@CaCO3) utilizadas como controle negativo. Nos ensaios com as formas amastigotas obtidas por infecÃÃo de cÃlulas LLC-MK2 BZ@CaCO3 foi capaz de reduzir o % de cÃlulas infectadas, o nÃmero de amastigotas por cÃlulas infectadas e o Ãndice de sobrevivÃncia em 24h de incubaÃÃo. Ensaios de citometria de fluxo utilizando os marcadores de fluorescÃncia 7- amino actinomicina D, anexina V- PE e rodamina 123 mostraram que o efeito tripanocida tanto da BZ@CaCO3 quanto do BZ està relacionado a morte por necrose com alteraÃÃo do potencial mitocondrial. Assim, conclui-se que a BZ@CaCO3 apresenta efeito tripanocida in vitro sobre as trÃs formas de Trypanossoma cruzi, sendo esse efeito potencialmente maior do que o observado para BZ. / A doenÃa de chagas à um grande problema de saÃde pÃblica, afeta cerca de 6 milhÃes de pessoas em todo o mundo e causa altos Ãndices de morbidade e mortalidade nas populaÃÃes afetadas. O benzonidazol (BZ), fÃrmaco utilizado no tratamento apresenta eficÃcia limitada e provoca sÃrios efeitos adversos. O transporte de fÃrmacos por meio de nanopartÃculas tem demonstrado eficiÃncia quanto à liberaÃÃo controlada e direcionada de molÃculas farmacolÃgicas, alÃm de apresentar propriedades desejÃveis, como boa biocompatibilidade e biodegradabilidade. O objetivo do presente trabalho foi avaliar a citoxicidade de nanopartÃculas de benzonidazol em carbonato de cÃlcio (BZ@CaCO3) sobre cÃlulas de hospedeiras LLC-MK2; determinar o efeito tripanocida sobre as formas epimastigotas, tripomastigotas e amastigotas da cepa Y de T. cruzi e comparar ao efeito do BZ, bem como, caracterizar o mecanismo de morte. Os testes de citotoxicidade utilizando o mÃtodo do MTT realizados com cÃlulas LLC-MK2 cultivadas com meio DMEM a 10% de SBF demonstraram IC50 de 55 Âg/mL para BZ@CaCO3 e 160 Âg/mL para BZ. Formas epimastigotas foram cultivadas em meio LIT a 10% de SBF a 28ÂC na presenÃa de BZ@CaCO3 por 24, 48 e 72 horas. BZ@CaCO3 mostrou atividade tripanocida sobre formas epimastigotas nos trÃs tempos de tratamento (CI50 24h = 8,72 Âg/mL; CI50 48h = 8 Âg/mL; CI50 72 h = 4,8 Âg/ml) sendo esse efeito mais significativo que o do BZ (CI50 24h = 56,7 Âg/mL CI50 48h = 15,9 Âg/mL; CI50 72h = 4,3 Âg/ml). Formas tripomastigotas foram obtidas a partir dos sobrenadantes de cÃlulas LLC-MK2 infectadas, ressuspensas em meio DMEM com 2% de SBF e tratadas durante 24 h. As formas tripomastigotas foram mais susceptÃveis a BZ@CaCO3 (IC50 = 1,8 Âg/mL) do que ao BZ (CI50= 67 Âg/mL). Esses ensaios tambÃm foram realizados com nanopartÃculas de carbonato de cÃlcio livres de fÃrmacos (@CaCO3) utilizadas como controle negativo. Nos ensaios com as formas amastigotas obtidas por infecÃÃo de cÃlulas LLC-MK2 BZ@CaCO3 foi capaz de reduzir o % de cÃlulas infectadas, o nÃmero de amastigotas por cÃlulas infectadas e o Ãndice de sobrevivÃncia em 24h de incubaÃÃo. Ensaios de citometria de fluxo utilizando os marcadores de fluorescÃncia 7- amino actinomicina D, anexina V- PE e rodamina 123 mostraram que o efeito tripanocida tanto da BZ@CaCO3 quanto do BZ està relacionado a morte por necrose com alteraÃÃo do potencial mitocondrial. Assim, conclui-se que a BZ@CaCO3 apresenta efeito tripanocida in vitro sobre as trÃs formas de Trypanossoma cruzi, sendo esse efeito potencialmente maior do que o observado para BZ.
| Identifer | oai:union.ndltd.org:IBICT/oai:www.teses.ufc.br:11053 |
| Date | 18 February 2016 |
| Creators | Louise Donadello Tessarolo |
| Contributors | Alice Maria Costa Martins, Maria de Fatima Oliveira, Eveline Matias Bezerra, Ticiana Praciano Pereira |
| Publisher | Universidade Federal do CearÃ, Programa de PÃs-GraduaÃÃo em CiÃncias FarmacÃuticas, UFC, BR |
| Source Sets | IBICT Brazilian ETDs |
| Language | Portuguese |
| Detected Language | Portuguese |
| Type | info:eu-repo/semantics/publishedVersion, info:eu-repo/semantics/masterThesis |
| Format | application/pdf |
| Source | reponame:Biblioteca Digital de Teses e Dissertações da UFC, instname:Universidade Federal do Ceará, instacron:UFC |
| Rights | info:eu-repo/semantics/openAccess |
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