Orientadora : Profª. Drª. Francinete R. Campos / Co-orientador : Prof. Dr. Roberto Pontarolo / Dissertação (mestrado) - Universidade Federal do Paraná, Setor de Ciências da Saúde, Programa de Pós-Graduação em Ciências Farmacêuticas. Defesa: Curitiba, 28/02/2014 / Inclui referências / Área de concentração: Insumos, medicamentos e correlatos / Resumo: A epilepsia é uma doença caracterizada por crises convulsivas, cujo tratamento é realizado com drogas chamadas de anticonvulsivantes. O topiramato é um anticonvulsivante de nova geração que tem seu uso geralmente associado com outros anticonvulsivantes de terapia já bem estabelecida, como fenitoína e fenobarbital. A terapia combinada é uma das formas mais eficazes de controle da doença, porém podem ocorrer interferências na metabolização desses fármacos visto que apresentam a mesma via de metabolização: hepática. Além disso, fatores intrínsecos de cada paciente podem modificar a resposta esperada para cada um dos fármacos, aumentando a incidência de efeitos colaterais. Assim, há a necessidade de desenvolvimento de métodos capazes de monitorar a concentração de topiramato e suas associações na circulação de cada paciente possibilitando o delineamento de protocolos de tratamento individualizados. A saliva surge como matriz ideal para este tipo de análise, uma vez que permite uma coleta simples, fácil e bem aceita para os pacientes. Assim, foi desenvolvido e validado um método por cromatrografia líquida de alta eficiência acoplada a espectrometria de massas sequencial (CLAE-EM/EM) capaz de monitorar as concentrações de topiramato, fenitoína e fenobarbital em matrizes de plasma e saliva. Para isso 30 ?L de amostra de plasma e saliva branco foram fortificados com topiramato, fenitoína e fenobarbital, seguido do processo de extração por precipitação de proteína com solução acetonitrila:água (90:10 v/v) contendo 1 mM de formiato de amônio. Posteriormente, foram injetados 20 ?L do sobrenadanteem um cromatógrafo Agilent 1200 acoplado ao espectrômetro de massas do tipo triplo quadrupolo API 3200 da ABSciex, provido de fonte de ionização por electrospray (ESI), operado no modo negativo de ionização. Pelo experimento de Multiple Reaction Monitoring (MRM) foram definidas as transições dos íons a serem utilizadas nas análises: m/z 338?78 e m/z 338?96 para o topiramato, m/z 251?102 e m/z 251?77 para fenitoína, m/z 231?85 e m/z 231?188 para o fenobarbital e m/z 357?327 e m/z 357?123 para o padrão interno (prednisona). A separação cromatográfica foi obtida em uma coluna C18 XBridge (150 x 2,1 mm i.d; 5 ?m) e pré-coluna (XBridge C18, 10 x 2,1 mm i.d; 5 ?m), sendo a fase móvel constituída de solução de NH4HCO2 1mM pH7,4 (A) e ACN (B) submetidos ao seguinte gradiente de eluição: t0min.: 50% A; t0,01-4,5 min.: 25% A; t4,5-8,5 min.: 50% Aem um fluxo de 0,2 mL min-1. O método desenvolvido foi validado para as matrizes de plasma e saliva, com excelentes resultados de precisão, exatidão e linearidade (r>0,99) para análises na faixa de 2,5 a 300 ng mL-1 de topiramato, de 5 a 500 ng mL-1 de fenitoína e de 50 a 200 ng mL-1 de fenobarbital. Assim, foi disponibilizado um método confiável, simples, rápido e de baixo custo para monitoramento terapêutico de topiramato e associações em matrizes de plasma e saliva. Palavras chave: topiramato, fenitoína, fenobarbital, epilepsia, saliva, plasma, monitoramento terapêutico, CLAE-EM/EM. / Abstract: Epilepsy is a disorder characterized by seizures and the treatment is performed with drugs called anticonvulsants. Topiramate is an anticonvulsant of new generation which has its use generally associated with other already well established anticonvulsant, such as phenytoin and phenobarbital. Combination therapy is one of the most effective ways to control the disease, but interference may occur in the metabolism of these drugs since they exhibit the same metabolic pathway: liver. In addition, each patient's intrinsic factors can modify the expected response for each drug, increasing the incidence of side effects. Thus, there is a need to develop methods to monitor the concentration of topiramate and their associations in the plasma circulation of each patient allowing the design of individualized treatment protocols. The saliva appears as optimal for this type of array analysis, as it allows a simple, easy and well accepted way to collect samples from the patients. Thus, was developed and validated a method for high efficiency liquid cromatrografia coupled to tandem mass spectrometry (HPLC-MS/MS) able to monitor the concentrations of topiramate, phenytoin and phenobarbital in plasma and saliva matrices. To this 30 ?L of plasma and saliva sample were fortified white topiramate, phenytoin and phenobarbital, followed by the extraction process by protein precipitation solution with acetonitrile: water (90:10 v / v) containing 1 mM ammonium formate. Subsequently, 20 ?L of the supernatant was injected into a liquid chromatograph Agilent 1200 coupled to a triple quadrupole mass spectrometer API 3200 ABSciex, equipped with electrospray ionization source (ESI) operated in the negative ionization mode. For the experiment Multiple Reaction Monitoring (MRM) transitions of ions to be used in the analysis were identified: m / z 338 ? 78 and m / z 338 ? 96 for topiramate, m / z 251 ? 102 and m / z 251 ? 77 to phenytoin , m / z 231 ? 85 and m / z 231 ? 188 for phenobarbital and m / z 357 ? 327 and m / z 357 ? 123 for internal standard (prednisone ) . The chromatographic separation was obtained on a XBridge C18 column (150 x 2.1 mm id, 5 mM) and guard column ( XBridge C18, 10 x 2.1 mm id , 5 mM ), the mobile phase consisting of a solution of 1 mM NH4HCO2 pH 7,4 (A) and ACN (B) subjected to the following elution gradient : t0min : 50% A; t0.01- 4,5min : 25% A; t4,5 - 8,5min.: 50% A at a flow rate of 0.2 ml min- 1. The method was validated for plasma and saliva matrices, with excellent results of precision, accuracy and linearity (r> 0.99) for analysis in the range of 2.5 to 1 to 300 ng ml- 1 topiramate , 5 to 500 ng ml- 1 and phenytoin from 50 to 200 ng ml- 1 of phenobarbital . Thus was provided a reliable, simple, rapid and low cost method for therapeutic drug monitoring of topiramate and associations in plasma and saliva samples. Keywords: topiramate, phenytoin, phenobarbital, epilepsy, saliva, plasma, therapeutic monitoring, LC-MS/MS
| Identifer | oai:union.ndltd.org:IBICT/oai:dspace.c3sl.ufpr.br:1884/36583 |
| Date | January 2014 |
| Creators | Amorim, Juliana Cibi |
| Contributors | Campos, Francinete Ramos, Pantarolo, Roberto, Universidade Federal do Paraná. Setor de Ciências da Saúde. Programa de Pós-Graduação em Ciências Farmacêuticas |
| Source Sets | IBICT Brazilian ETDs |
| Language | Portuguese |
| Detected Language | English |
| Type | info:eu-repo/semantics/publishedVersion, info:eu-repo/semantics/masterThesis |
| Format | 130f. : il. algumas color., grafs., tabs., application/pdf |
| Source | reponame:Repositório Institucional da UFPR, instname:Universidade Federal do Paraná, instacron:UFPR |
| Rights | info:eu-repo/semantics/openAccess |
| Relation | Disponível em formato digital |
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