Orientadora : Profª. Drª. Cyntia M.T. Fadel-Picheth / Co-orientadora : Profª. Drª. Dayane Alberton / Dissertação (mestrado) - Universidade Federal do Paraná, Setor de Ciências da Saúde, Programa de Pós-Graduação em Ciências Farmacêuticas. Defesa: Curitiba, 23/02/2015 / Inclui referências / Área de concentração: Análises clinicas / Resumo: O genero Aeromonas compreende bacilos Gram-negativos, oxidase positiva, fermentadores de glucose. Sao capazes de causar infeccoes intestinais e extra-intestinais em humanos, tais como sepse e infeccoes de pele. O objetivo deste trabalho foi determinar o comportamento de estirpes de Aeromonas isoladas de amostras clinicas humanas, predominantemente fezes de pessoas com diarreia, em relacao a utilizacao de fontes de carbono, sequenciar parcialmente o genoma da estirpe de A. veronii bv sobria e analisar a resposta a bile dessa bacteria. A utilizacao de microplacas GN2 do sistema BiologR, que contem 95 fontes de carbono incluindo carboidratos, aminoacidos, acidos organicos e nucleotideos, mostrou que todas as estirpes oxidaram 20 dos substratos entre os quais se destacam os carboidratos em detrimento de acidos organicos; para 15 substratos o resultado foi negativo para todas as estirpes analisadas e para 60 o resultado foi variavel entre as bacterias. O sequenciamento do genoma da estirpe A.veronii bv sobria 312M, realizado utilizando a plataforma 454 GS Junior System (RocheR), resultou em um gdrafth genoma de aproximadamente 4,5 Mb alocados em 526 contigs. A cobertura foi de aproximadamente 10 X e o conteudo de C+G foi de 58,7%. A anotacao automatica do genoma foi realizada utilizando o RAST Server, que identificou 4.104 sequencias codificadoras e 115 RNAs. Entre os subsistemas identificados destacam-se o de metabolismo de aminoacidos, ao qual 489 genes foram associados, e metabolismo de carboidratos, 422 genes. Em relacao a virulencia, destacam-se os Sistemas de Secrecao Tipo III e VI, alem de hemolisinas, lipase, adesinas e genes associados com sintese de capsula; tambem foram identificados genes associados com resistencia a antimicrobianos. Para avaliar a resposta de A. veronii bv sobria 312M frente ao sal biliar desoxicolato de sodio (DOC) a bacteria foi cultivada na ausencia ou na presenca de 24ƒÊM e 240 ƒÊM de DOC. Nao houve diferenca em relacao ao numero de colonias nas tres condicoes, entretanto, em presenca de DOC, as colonias apresentaram aumento de aproximadamente 1mm de diametro. A concentracao de 240 ƒÊM de DOC foi utilizada para analisar o efeito do sal biliar sobre o perfil de expressao proteica de A. veronii bv sobria 312M utilizando SDS-PAGE e eletroforese bidimensional. Nas condicoes de analise nao foi detectada nenhuma proteina diferencialmente expressa. Palavras-chave: Aeromonas; Fontes de carbono; Sequenciamento; Genoma; Bile. / Abstract: The genus Aeromonas contains Gram-negative bacilli, oxidase positive, glucose fermenters. Aeromonas are able to cause intestinal and extraintestinal infections in humans, such as sepsis and skin infections. The objective of this study was to determine the behavior of Aeromonas strains isolated from human clinical samples, predominantly feces of people with diarrhea, regarding the use of carbon sources; to sequence the genome of a strain of A. veronii bv sobria and analyze the response to bile of this bacterium. The use of the system Biolog® GN2 microplate containing 95 carbon sources including carbohydrates, amino acids, organic acids and nucleotides, showed that all strains oxidized 20 substrates, being the carbohydrates sources preferred over organic acids; for 15 substrates the result was negative for all strains analyzed and for 60 the result was variable between bacteria. The sequencing of the genome of strain A.veronii bv sobria 312M, performed using the 454 GS Junior System platform (Roche ™), resulted in a "draft" genome of approximately 4.5 Mb allocated in 526 contigs. The coverage was approximately 10 X and the C + G content was 58.7%. The automated genome annotation was performed using RAST Server, which identified 4.104 coding sequences and 115 RNAs. Among the identified subsystems, the amino acid metabolism containing 489 genes, and carbohydrate metabolism 422 genes, exceed the other in number of genes. The Type III and Type VI Secretion Systems, as well as hemolysin, lipase, adhesin and genes associated with capsule synthesis are associated with virulence; genes associated with antimicrobial resistance were also identified. To evaluate the response of A. veronii bv sobria 312M to the bile salt sodium deoxycholate (DOC) the bacteria were cultured in the absence or presence of 24ìM and 240 mM of DOC. There was not difference in the number of colonies among the three conditions tested, however, in the presence of DOC, the colonies diameter increased by approximately 1mm in relation to control. The concentration of DOC of 240 uM was used to examine the effect of bile salt on the protein expression profile of A. veronii bv sobria veronii 312 M using SDS-PAGE and two dimensional electrophoresis. In the analysis conditions no protein differentially expressed was detected. Keywords: Aeromonas; Carbon sources; sequencing; genome; Bile.

Orientador : Prof. Dr. Roberto Pontarolo / Orientador : Prof. Dr. João Cleverson Gasparetto / Dissertação (mestrado) - Universidade Federal do Paraná, Setor de Ciências da Saúde, Programa de Pós-Graduação em Ciências Farmacêuticas. Defesa: Curitiba, 03/03/2015 / Inclui referências / Área de concentração: Insumos, medicamentos e correlatos / Resumo: O objetivo deste trabalho foi avaliar qualitativamente os produtos de excreção da cumarina em urina humana. Participaram do presente estudo cinco voluntários adultos, que receberam via oral cápsulas contendo 500 mg de cumarina após jejum de oito horas. A urina dos voluntários foi coletada por um período de 24 horas. Para análise da amostra biológica, um método de screening de metabólitos rápido e facilmente executável por cromatografia líquida de ultra eficiência acoplada à espectrometria de massas de alta resolução foi desenvolvido. O pré-tratamento da amostra consistiu na ultracentifugação da urina por 15 minutos a 14000 rpm e a 4ºC seguida de filtração em filtro de poliéster (0,2 ?m) antes da injeção no cromatógrafo. Após aquisição dos dados, estes foram tratados com o auxílio do software MetaboLynx para a procura dos metabólitos oriundos da cumarina. Para que a confirmação estrutural pudesse ser realizada, os principais metabólitos encontrados passaram por um processo de isolamento e purificação através da coleta de picos cromatográficos, cromatografia em camada delgada e cromatografia em coluna. Foram encontrados 12 metabólitos, dos quais apenas quatro já haviam sido citados na literatura como parte do metabolismo humano da cumarina. Com o auxílio do software MetaboLynx, todas as biotransformações ocorridas na cumarina foram identificadas, porém, não foi possível confirmar por espectrometria de massas em quais locais da molécula as biotransformações ocorreram. Duas substâncias foram confirmadas pela comparação com padrão analítico (7-hidroxicumarina e ácido ohidroxifenilacético) e, com o auxílio da espectroscopia de ressonância magnética nuclear, as estruturas de dois metabólitos isômeros foram propostas: 7- hidroxicumarina glucoronida (sabidamente o principal metabólito da cumarina) e 5- hidroxicumarina glucoronida. Também foram encontrados dois isômeros hidroxilados e sulfatados da cumarina e dois isômeros di-hidroxilados e sulfatados. Outros metabólitos minoritários da cumarina também foram detectados. Não foi evidenciada a presença de cumarina livre ou do ácido o-cumárico na urina dos voluntários. O presente estudo mostrou que, apesar de a cumarina ser uma substância simples e já muito estudada, suas rotas de metabolização se encontravam incompletas. Isso nos levou à conclusão que o uso de ferramentas modernas é de extrema relevância para complementar o conhecimento do metabolismo de diversas drogas, especialmente porque os metabólitos ainda desconhecidos podem apresentar algum tipo de atividade biológica. Palavras-chave: cumarina, 7-hidroxicumarina, metabólitos, urina, excreção. / Abstract: The purpose of this work was to qualitatively evaluate the excretory products of coumarin in the human urine. Five adult volunteers were enrolled in this study. Each one orally received a capsule containing 500 mg of coumarin after a fasting period of eight hours. The urine was collected for 24 hours. To analyze the biological sample and identify coumarin metabolites, a fast and easily executable screening method by ultra performance liquid chromatography coupled with high resolution mass spectrometry was developed. The sample pretreatment consisted in urine ultracentrifugation for 15 minutes (14000 rpm, 4ºC), followed filtration in polyester filter (0.2 ?m) before injection in the chromatograph. The acquired data were processed with MetaboLynx software to search for coumarin metabolites. To perform the structural confirmation, the major metabolites found have undergone an isolation and purification process through chromatographic peak collection, thin layer chromatography and column chromatography. Twelve metabolites were found, and only four had been previously described in the literature as part of the human metabolism of coumarin. With MetaboLynx software, all coumarin biotransformations were identified, however, it was not possible to confirm by mass spectrometry where in the molecule the biotransformation occurred. Two substances were confirmed by comparison to analytical standard (7-hydroxycoumarin and o-hydroxyphenylacetic acid) and, by nuclear magnetic resonance spectroscopy, the structures of two isomers metabolites were proposed: 7-hydroxycoumarin glucuronide (already know as the major metabolite of coumarin) and 5-hydroxycoumarin glucuronide. Two hydroxylated and sulfated coumarin isomers and two dihydroxylated and sulfated isomers were also found. Other minor coumarin metabolites were detected as well. Free coumarin or o-coumaric acid were not identified in volunteers' urine. This study showed that, although coumarin is a simple and well-studied substance, its metabolism routes were incomplete. This led us to the conclusion that the use of modern tools for drug metabolism identification is of extreme relevance, especially because the unknown metabolites can possess biological activity. Keywords: coumarin, 7-hydroxycoumarin, metabolites, urine, excretion.

Orientador : Prof. Dr. Obdulio Gomes Miguel / Co-orientadora : Profª. Drª. Marilis Dallarmi Miguel / Dissertação (mestrado) - Universidade Federal do Paraná, Setor de Ciências da Saúde, Programa de Pós-Graduação em Ciências Farmacêuticas. Defesa: Curitiba, 24/02/2015 / Inclui referências / Área de concentração: Insumos, medicamentos e correlatos / Resumo: Este trabalho teve como objetivo avaliar o perfil fitoquímico e atividades biológicas de Cestrum intermedium, uma espécie de solanácea nativa do Brasil, muito utilizada como ornamento por suas flores atraentes de odor agradável. É considerada a planta tóxica de maior importância em regiões do sul do país, desenvolvendo quadro hepatotóxico em gado bovino que ingere suas folhas, ocasionando morte na maioria dos casos. Os extratos brutos e frações de folhas e cascas da espécie foram avaliados quanto à toxicidade aguda em microcrustáceos e larvas de Aedes aegypti, quanto ao potencial hemolítico, antimicrobiano e antioxidante, além de traçar o perfil fitoquímico da espécie. Os bioensaios traçaram um perfil ecotoxicológico e de atividades biológicas preliminares da espécie, evidenciando ecotoxicidade aos organismos testados, potencial hemolítico, fraco potencial antimicrobiano contra C. albicans, S. epidermidis e S. aureus, moderada capacidade antioxidante comparável à rutina e butil-hidroxi-tolueno. Os resultados dos bioensaios foram avaliados juntamente com o perfil fitoquímico obtido pela realização de ensaio sistemático fitoquímico, possibilitando inferir quais classes de metabólitos secundários são os responsáveis pela atividade. Palavras-chave: Coerana. Ecotoxicidade. Potencial hemolítico. Perfil fitoquímico. Aedes aegypti. / Abstract: This work presents as objective to evaluate Cestrum intermedium’s phytochemical profile and biological activities, a Brazil native Solanaceae species, broadly used as ornament for its attractive and pleaseant odor releasing flowers. Some country’s southern regions it’s considered to be the most important toxic plant, for causing liver toxicity in cattle which ingest its leaves, resulting in death most of the times. Leaves’ and barks’ gross extracts and it’s fractions were evaluated for acute toxicity in microcrustaceans and Aedes aegypti larvae, for hemolytic, antimicrobial and antioxidant potentials, besides outlining species’ phytochemical profile. Bioessays outlined species’ preliminary ecotoxicological and biological activities prolife, showing toxicity for microcrustaceans tested, hemolytic potential, weak antimicrobial potential against C. albicans, S. epidermidis and S. aureus, comparable to rutin and butyl-hydroxi-toluen moderate antioxidant capacity. Bioessays’ results were evaluated observing phytochemical essays’ results, providing an active secondary metabolites panorama. Key words: Coerana. Ecotoxicity. Hemolytical Potencial. Phytochemical profile. Aedes aegypti.

Orientadora : Profª. Drª. Tomoe Nakashima / Co-orientadora : Profª. Drª. Jane Manfron Budel / Dissertação (mestrado) - Universidade Federal do Paraná, Setor de Ciências da Saúde, Programa de Pós-Graduação em Ciências Farmacêuticas. Defesa: Curitiba, 28/01/2015 / Inclui referências / Área de concentração: Insumos, medicamentos e correlatos / Resumo: O gênero Baccharis L. é um dos maiores da família Asteraceae, apresentando cerca de 400 espécies. Levantamentos etnobotânicos relatam que espécies de Baccharis são usadas comumente na medicina tradicional, principalmente como analgésico, anti-inflamatório, diurético e anti-infeccioso. O presente trabalho teve como objetivo realizar estudos farmacobotânicos comparativos de partes vegetativas aéreas de Baccharis L., da Região dos Campos Gerais – Ponta Grossa – PR, a saber: B. brevifolia DC., B. cultrata Baker, B. erioclada DC., B. pauciflosculosa DC., B. sphenophylla Herring & Dúsen e B. trilobata A.S. Oliveira & Marchiori. O material vegetal foi analisado, utilizando-se métodos habituais de microscopia fotônica e de microscopia eletrônica de varredura. Com relação às características diferenciais, das espécies estudadas, as folhas de Baccharis brevifolia apresentaram contorno oblanceolado, ápice obtuso, base atenuada, margem inteira com três dentes na porção superior, nervura central com formato plano-convexa e estômatos actinocíticos. Baccharis cultrata possui folhas com contorno obovado, ápice truncado, base foliar atenuada, apresenta nervura central com formato praticamente plano e os estômatos presentes em ambas as faces são do tipo actinocítico. Baccharis erioclada evidenciou folhas de formato oblongo, ápice agudo, base atenuada, margem inteira com 3-4 dentes na porção superior, a nervura central mostrou formato côncavo-convexo, os estômatos presentes apenas na face abaxial são do tipo anomocíticos e apresentou também tricomas tectores ramificados. Baccharis pauciflosculosa possui folhas com contorno espatulado, ápice obtuso, base atenuada e 6-7 dentes na metade superior a nervura central evidencia formato biconvexo. Baccharis sphenophylla apresenta folhas com contorno obovado, ápice truncado, base cuneada, margem foliar denteada com aproximadamente 12 dentes e nervura central com formato côncavo-convexo. Baccharis trilobata possui folhas com contorno obovado, ápice truncado, margem inteira com 4 dentes na porção superior, a nervura central mostrou formato praticamente plano. As características observadas auxiliam na identificação e diferenciação das espécies de Baccharis estudadas, contribuindo para o controle da qualidade da matéria-prima vegetal. Palavras-chaves: Morfologia, Anatomia, Plantas medicinais. / Abstract: Baccharis L. genus is one of the larger of the Asteraceae family, with about 400 species. Ethnobotanic researches report that Baccharis species are commonly used in traditional medicine, particularly as analgesic, anti-inflammatory, diuretic and antimicrobial. This study aimed to conduct comparative morphological and anatomical studies of vegetative aerial parts of Baccharis L., in the region of Campos Gerais - Ponta Grossa - PR, namely: B. brevifolia DC., B. cultrata Baker, B. erioclada DC., B. pauciflosculosa DC., B. sphenophylla Herring & Dúsen and B. trilobata A.S. Oliveira & Marchiori. The plant material was analyzed using standard methods of light microscopy and scanning electron microscopy. Regarding the differential characteristics of the studied species, the leaves of Baccharis brevifolia present contour oblanceolado, obtuse apex, attenuate base, entire margin with three teeth in the upper and central rib with plano-convex shape and actinocytics stomata. Baccharis erioclada show oblong leaves, acute apex, attenuate base and entire margin with 3-4 teeth in the upper portion, showed concave-convex midrib, histomatic leaves, anomocytic stomata and and also presented branched flagelliform non-glandular trichome. Baccharis pauciflosculosa has leaves with spatulate shape, apex obtuse, base attenuate, 6-7 teeth in the upper half and the shows biconvex midrib. Baccharis sphenophylla has leaves with obovate shape, truncated apex, cuneate base and leaf margin toothed with about 12 teeth and center rib with concave-convex shape. Baccharis trilobata has leaves with obovate shape, truncated apex, entire margin with 4 teeth in the upper portion and the midrib show practically flat shape. The characteristics assist in the identification and differentiation of the studied Baccharis species, supporting the quality control. Keywords: Morphology, Anatomy, Medicinal plants.

Orientador : Prof. Dr. José Domingos Fontana / Co-orientadora : Profª. Drª. Adelia Grzybowski / Tese (doutorado) - Universidade Federal do Paraná, Setor de Ciências da Saúde, Programa de Pós-Graduação em Ciências Farmacêuticas. Defesa: Curitiba, 06/03/2015 / Inclui referências / Área de concentração: Insumos, medicamentos e correlatos / Resumo: Oligossacarídeos (OS) prebióticos, que auxiliam na promoção da saúde intestinal, foram produzidos a partir de fitobiomassa, tanto quando se utilizou a técnica de préprocessamento de ligno(hemi)celulósicos, bagaço de cana e serragem de Pinus taeda, por termopressurização com ácido fosfórico diluído, quanto por hidrólise de galactomananas, utilizando enzimas do suco digestivo do molusco Achatina fulica ou de enzimas extra e/ou intracelulares de Aspergillus niger, induzidas pela presença de polissacarídeos. A hidrólise por termopressurização ocorreu com variação do pH de ácido O-fosfórico de 1,75 até 2,5, utilizando água como controle, e também das pressões de 3 atm (144 °C) até 12 atm (192 °C). Quanto à produção de OS, o bagaço propiciou os melhores rendimentos (mg/g) com maior porcentagem de pureza nas condições entre 7 e 8 atm e pH entre 2,2 e 2,5. Já com o Pinus, foram requeridas condições ligeiramente mais brandas, entre 5 e 7 atm e pH entre 2,3 e 2,5. Visando otimizar o processo de produção de OS, uma alteração metodológica foi avaliada, com a proporção biomassa:ácido passando de 1:6 para 1:8 (m/v) e a filtração simples por lã de vidro alterada para funil de placa porosa associada a vácuo. Nestes ensaios o pH variou entre 1,5 e 2,5 e a pressão entre 7 atm (171 °C) e 10 atm (185 °C). Considerando as melhores respostas obtidas, a produção de OS passou de 59,21 para 100,26 mg/g para o bagaço e de 65,68 para 107,26 mg/g para Pinus. Entretanto houve uma redução na pureza dos hidrolisados, de cerca de 90% para 71,87% para o bagaço e 80,40% para Pinus. Analisado os dados através de planejamento fatorial, o pH é a variável mais significativa (do que a pressão/temperatura) para variação das respostas de produção e pureza e que para ambas as biomassas avaliadas a condição ótima foi de pH 2,5 e 2,25 a 7 atm. Os OS produzidos foram utilizados como fonte de carbono em cultivos de Lactobacillus casei Shirota e de Bifidobacterium animalis havendo biossíntese de ácidos graxos de cadeia curta (ácido lático e/ou acético) atingindo ápice após 72 h de cultivo com pH final de 4,7 para OS de bagaço e 4,5 para OS de Pinus. Considerando a sacarificação enzimática da celulose residual proveniente do pré-tratamento fosfórico com celulases industriais, comparativamente aos controles nativos, todas as condições avaliadas revelaram-se benéficas e nos melhores casos, em cinco vezes para o bagaço e três vezes para o caso de Pinus. A obtenção de enzimas a partir de indução com galactomananas e pectina cítrica, realizada por cultivo em meio líquido e agitação, ocorreu de maneira satisfatória com a formação de pellets de Aspergillus niger. Foram obtidas <130 ?g e <250 ?g de proteínas totais/mL para as amostras extra e intracelulares, respectivamente. A coleta do suco digestivo do Achatina fulica (SDAf) foi realizada a partir de moluscos considerados jovens e adultos (conchas >3 cm) e mostrou alta concentração proteica, na ordem de 202 mg/mL. Testes de atividade enzimática com P-nitrofenilglucosídeos indicaram alta atividade de ?-galactosidase e ?-glucosidase para as amostras de A. niger e ?-manosidase e ?-glucosidase para o SDAf. A porcentagem de hidrólise com polissacarídeos diversos em 24 h, 35 °C e 140 rpm (0,33 g), mostrou que as enzimas mais eficientes de A. niger foram as extra e intracelulares induzidas com goma de guar, respectivamente, ensaiadas com os substratos alfarroba (3,65 e 4,87%), guar (5,88 e 4,33%) e bracatinga (3,83 e 3,25%) com liberação de OS. As enzimas induzidas com goma de alfarroba liberaram apenas as unidades de ?-galactose das ramificações. O SDAf mostrou potencial para a hidrólise de todos os polissacarídeos avaliados, mas por conter baixa atividade ?- galactosidase, não conseguiu hidrolisar com eficiência galactomananas mais substituídas como as da bracatinga (apenas 4,36%). Conforme o grau de substituição reduz, ocorre aumento do poder hidrolítico com goma guar (8,54%) e alfarroba (33,66%). Os OS de alfarroba, obtidos por hidrólise dom SDAf, foram capazes de promover o crescimento dos micro-organismos probióticos, com a produção dos ácidos láctico, acético e propiônico com o crescimento de L. casei e destes mesmos ácidos mais o ácido succínico com B. animalis. Palavras-Chave: Hidrólise ácida e enzimática. Ligno(hemi)celulósicos. Achatina fulica. Aspergillus niger. Lactobacilos. Bifidobactérias. / Abstract: Prebiotic oligosaccharides (OS), which assist in the intestinal health promotion, were produced from phytobiomass, both when using sugar cane bagasse or pine sawdust ligno(hemi)celluloses thermo-pressurization pre-processing technique with diluted phosphoric acid, or galactomannans hydrolysis using the digestive juice of Achatina fulica or Aspergillus niger intra- and extra-cellular enzymes induced by polysaccharides. The thermo-pressurization hydrolysis occurred varying the phosphoric acid pH from 1.75 to 2.5, using water as control, and pressures of 3 atm (144 °C) to 12 atm (192 °C). OS production showed best yields (mg/g) with the highest purity percentages when obtained from sugarcane bagasse hydrolysis in conditions between 7 to 8 atm and pH between 2.2 and 2.5. Pinus taeda required slightly milder conditions, between 5 to 7 atm and pH between 2.3 and 2.5. To optimize the production process, a methodological change was adopted with biomass: acid ratio from 1:6 to 1:8 (w/v) and the simple glass wool filtration replacement for a fritted glass funnel with vacuum. For these assays the pH ranged from 1.5 to 2.5 and the pressure of 7 atm (171 °C) and 10 atm (185 °C). OS production best responses increased from 59.21 to 100.26 mg/g for bagasse and from 65.68 to 107.26 mg/g for Pinus. However, there was a purity reduction of the hydrolysates from about 90% to 71.87% in the case of bagasse and 80.40% in case of Pinus. A factorial design analysis showed that the pH is more significant (than the pressure/temperature) for the production and purity changes for both biomass, confirming an optimal condition of pH 2.5 and 2.25 with 7 atm. Used as the sole carbon source, these OS supported the growth of Lactobacillus casei Shirota and Bifidobacterium animalis, togheter a peak biosynthesis of short-chain fatty acids (lactic and/or acetic acids) after 72 h cultivation with a final pH of 4.7 for bagasse and 4.5 for Pinus. Considering the residual cellulose, after the phosphoric pre-treatment, its subsequent enzymatic hydrolysis with industrial cellulases, in comparison with the native controls, all the evaluated conditions revealed beneficial for improved hydrolyses and, in the best cases, by factors of five times for bagasse and three times for Pine. Galactomannans degrading-enzymes induction by cultivation of Aspergillus niger in a liquid medium under agitation was satisfactory, leading to mycelia pellets formation. It was found <130 ?g and <250 ?g total protein/mL for extra- and intracellular samples, respectively. Digestive juice of Achatina fulica (DJAf) collection was carried out in young and adults (>3 cm) molluscs, and corresponded to a high protein concentration, 202 mg/mL. Enzymatic activity assays done with P-nitrophenylglycosides, indicated high ?-galactosidase and ?-glucosidase activities for A. niger samples and the same for ?-mannosidase and ?-glucosidase from DJAf. The hydrolysis percentages with various polysaccharides, pursuing oligosaccharides release in 24 hours, 35 °C and 140 rpm (0.33 g) incubation conditions, showed that the most efficient extra and intracellular A. niger enzymes were induced with guar gum, as assayed using locust bean (3.65 and 4.87%) and guar gums (5.88 and 4.33%) and Mimosa scabrella galactomannans (3.83 and 3.25). Carob induced enzymes released only ?-galactose from the branching points. DJAf showed hydrolysis potential for all polysaccharides tested, but contained low ?-galactosidase activity and could not hydrolyze efficiently (4.36%) the more branched galactomannans, such as that from Mimosa scabrella. As the degree of substitution of galactomannans reduces, the hydrolytic power increases as shown with guar (8.54%) and locust bean gums (33.66%). The locust bean OS, produced by DJAf hydrolysis, were able to promote the growth of probiotic microorganisms, leading to lactic, acetic and propionic acids production with L.casei and the same acids more succinic acid with B. animalis. Keywords: Acid and enzymatic hydrolysis. Ligno(hemi)Cellulose. Achatina fulica. Aspergillus niger. Lactobacilli. Bifidobacteria.

Orientador : Prof. Dr. Cid Aimbiré de Moraes Santos / Co-Orientadora : Profª. Drª. Jane Manfron Budel / Dissertação (mestrado) - Universidade Federal do Paraná, Setor de Ciências da Saúde, Programa de Pós-Graduação em Ciências Farmacêuticas. Defesa: Curitiba, 30/03/2015 / Inclui referências / Área de concentração: Insumos, medicamentos e correlatos / Resumo: Determinar a autenticidade e a qualidade de matérias-primas vegetais utilizadas na formulação de medicamentos fitoterápicos, chás e cosméticos é essencial no sentido de garantir sua segurança e eficácia para o uso clínico. Algumas espécies de Passiflora são oficiais em compêndios farmacêuticos de vários países e possuem uso terapêutico principalmente como sedativas e tranquilizantes. O grande número de espécies do gênero (cerca de 600), aliado ao fato da maioria ser popularmente conhecida como maracujá, aumenta a probabilidade de erros de identificação da parte usada como droga vegetal (folhas dessecadas de Passiflora sp., Passifloraceae). Dessa forma, o objetivo do trabalho foi realizar a comparação farmacognóstica de espécies de Passiflora, a fim de estabelecer um perfil morfoanatômico e cromatográfico que contribua com o controle de qualidade da droga na produção fitoterápicos contendo maracujá. Para isso, folhas de doze espécies pertencentes ao gênero Passiflora (P. actinia, P. alata, P. amethystina, P. capsularis, P. cincinnata, P. edulis f. flavicarpa, P. edulis f. edulis, P. incarnata, P. morifolia, P. urnifolia, P. cocinea e P. setacea) mais três híbridos de P. coccinea e P. setacea, foram coletadas em diferentes localidades e analisadas quanto a seus caracteres morfoanatômicos por microscopia de luz e microscopia eletrônica de varredura e quanto a seus perfis cromatográficos por meio de duas metodologias por cromatografia em camada delgada e uma por cromatografia à liquido de alta eficiência, utilizando como padrões os flavonoides Cglicosilados isoorientina, orientina, vitexina e isovitexina. A análise microscópica permitiu o estabelecimento de um conjunto de caracteres que auxiliam na diferenciação entre as espécies analisadas, entre eles encontram-se o formato da nervura central e do pecíolo, arranjo dos feixes vasculares na nervura central e no pecíolo, formato das nervuras de médio porte, presença/ausência de tricomas tectores e sua descrição, presença de papilas na face abaxial da epiderme e características das células esclerenquimáticas presentes no limbo foliar. No que diz respeito às análises cromatográficas, as metodologias empregadas, simples, foram eficientes em estabelecer perfis específicos para cada espécie. Tanto a análise microscópica, quanto as análises cromatográficas propostas podem ser utilizadas isoladamente ou em conjunto com o objetivo de determinar a autenticidade e qualidade de drogas vegetais oriundas de espécies do gênero Passiflora. / Abstract: Determining the authenticity and quality of plant raw materials used in the formulation of herbal medicines, teas and cosmetics, is essential to ensure their safety and efficacy for clinical use. Some Passiflora species are officially recognized in pharmaceutical compendia of various countries and have therapeutic use, particularly as sedative and tranquilizer. However, the large number of Passiflora species, coupled with the fact that most species are popularly known as passion fruit, increases the misidentification problem. Thus, the purpose of this study is to make a pharmacognostic comparison between various Passiflora species to establish a morphoanatomical and chromatographic profile that could contribute to the quality control of herbal drug products that contain passion fruit. The comparison was conducted by collecting samples from twelve Passiflora species (P. actinia, P. alata, P. amethystina, P.capsularis, P. cincinnata, P. edulis f. flavicarpa, P. edulis f. edulis, P. incarnata, P. morifolia, P.urnifolia, P. coccinea and P. setacea) and three hybrids of P. coccinea and P. setacea from different locations and their morpho-anatomical features were analysed using optical microscopy and scanning electron microscopy. Their chromatographic profiles were obtained by two methods - thin layer chromatography and high-efficiency liquid chromatography, using the flavonoid C-glycosides isoorientin, orientin, vitexin and isovitexin as reference compounds. A microscopic analysis allowed a set of characters to be established that can help to differentiate between species. These include midrib and petiole shape, midrib and petiole vascular pattern, medium vein shape, presence/absence of trichomes (in our description), the presence of papillae on the abaxial epidermis and sclerenchymatic cells adjoining the vascular bundle. With regard to the chromatographic analysis, a simple methodology was employed, which was effective in establishing specific profiles for each species. Both the microscopic and chromatographic analyses discussed here, could be used either alone or together to assist in the determination of herbal drug quality and authenticity derived from a species of Passiflora.

Orientadora : Profª. Drª. Fabiane Gomes de M. Rego / Co-orientadores : Proª Drª. Suzana Nesi França e Prof. Dr. Geraldo Picheth / Dissertação (mestrado) - Universidade Federal do Paraná, Setor de Ciências da Saúde, Programa de Pós-Graduação em Ciências Farmacêuticas. Defesa: Curitiba, 29/04/2015 / Inclui referências / Área de concentração: Análises clinicas / Resumo: O Diabetes Mellitus é uma doença prevalente no mundo, considerada uma epidemia pela organização Mundial de Saúde (OMS). A estimativa da prevalência mundial está em torno de 8,3 % e, no Brasil em 9,4 % na última avaliação. A forma mais comum de diabetes em crianças e adolescentes é o DM1, correspondendo a 10% de todos os casos. O adequado controle glicêmico no diabetes está relacionado diretamente com a redução no desenvolvimento e na severidade das complicações associadas à patologia como a retinopatia, neuropatia, nefropatia e doença cardiovascular. O 1,5 anidroglucitol, um poliol de origem natural derivado da glucose, está associado com incursões hiperglicêmicas. Um teste diagnóstico que quantifica no soro o 1,5-anidroglucitol (1,5AG) foi recentemente aprovado pelo FDA como um índice de controle glicêmico em pacientes diabéticos. O objetivo deste trabalho foi estudar o efeito do biomarcador 1,5 anidroglucitol e suas associações com variantes genéticas -429 T>C, -374 T>A e a deleção de 63pb da região promotora do gene RAGE, que afetam o controle glicêmico em crianças e adolescentes saudáveis e portadores de DM1. A amostra foi composta por 621 adolescentes e crianças saudáveis para estabelecimento dos valores de referência para o 1,5 AG e composta de 90 pacientes com DM1 e 105 crianças saudáveis para as análises dos polimorfismos. O 1,5AG foi quantificado em sistema automatizado utilizando o ensaio enzimático (GlycoMark).Comparando os resultados obtidos para a concentração do 1,5 AG no grupo de adolescentes, crianças e DM1, pode se observar uma diferença signifivativa entre os grupos, crianças obteram uma concentração média de 27,9±7,4, adolescentes de 25,4±6,9 e 2,3(1,5-3,4) em pacientes DM1, essa diferença tambem foi significativa entre os gêneros em ambos os grupos. O polimorfismo -374 A tem uma frequência simular a outros estudos com caucasoides em ambos os grupos, DM1 e controle, o -429 C foi similar a euro-brasileiros e menor que caucasoides no grupo controle e menor que euro-brasileiros no grupo DM1e na deleção de 63 pb, os pacientes DM1, obtiveram frequência similar a caucasoides e o grupo controle similar a afro-brasileiros e maior do que caucasoídes em geral. Podemos concluir que os valores de 1,5 AG diminuem com a idade e que meninos apresentam uma concentração significativamente maior do que meninas. O estudo dos polimorfismos se encontra dentro do equilíbrio de Hardy-Weinberg. Os polimorfismos -429 T>C, -374 T>A e 63 pb Del da região promotora do gene RAGE não foram associados com o DM1. Palavras Chave : Diabetes tipo 1, 1,5AG, -429T>C, -374T>A, 63 Pb Del. / Abstract: Diabetes mellitus is a common disease and is considered, an epidemic by the World Health Organization (WHO). The estimated worldwide prevalence is around 8.3% and in Brazil is 9.4% in the last assessment. In diabetes, adequate glycemic control is directly related to the reduction in the development and severity of complications associated with the disease such as retinopathy, neuropathy, nephropathy and cardiovascular disease. The 1.5 anhydroglucitol is a natural polyolthat origin derived from glucose,is associated with hyperglycemicincursions. A diagnostic test that quantifies the serum 1,5-anhydroglucitol (1,5AG) was recently approved by the FDA as an index of glycemic control in diabetic patients.In thisstudy,we analyzed the effect of 1.5 anhydroglucitol biomarkerand its association with genetic variants -429 T> C, -374 T> A and the deletion of 63pb of RAGE gene that affect glycemic control in healthy children and adolescents and with Diabetes mellitus type 1. The sample was consisted of 621 healthy adolescents and children to establish the reference values for the 1.5 AG, and composed of 90 patients with T1DM and 105 healthy children for the polymorphisms analysis. The 1,5AG was quantified using the enzymatic assay system (GlycoMark).Comparing the results obtained for the 1,5 AG concentration on the children, teenagers and DM1 group,can be observed one significative difference between the groups, childrens obtained one average concentration of 27,9±7,4, teenagers of 25,4±6,9 and pacients with DM1 2,3(1,5-3,4), its diference also was sigficative between the genres in both groups. The polymorphism -374 A have a frequence similar with others studies with caucasoids in both groups, the -429 C it was similar with euro-brasiliens in the control group and smaller than caucadoids, on the DM1 group smaller than euro-brasilien andonpolymorphism 63 pb Deletion, the DM1 pacients, obteined similar frequence with caucasoidsand the control group similar with afro-brasiliens and bigger than euro-brasiliens. We conclude that 1,5 AG value decrease with age and boys have a significantly higher concentration than girls. The studied polymorphisms were in the Hardy-Weinberg equilibrium. The Polymorphisms -429 T>C, -374 T> A, 63 pb Del, in the promoter region of the RAGE gene were not associated with DM1. Keywords:Diabetes type 1,1,5 AG, -429T>C, -374T>A, 63 Pb Del

Orientador : Prof. Dr. Roberto Pontarolo / Co-orientadora : Profª. Drª. Josélia Borba Daher / Dissertação (mestrado) - Universidade Federal do Paraná, Setor de Ciências da Saúde, Programa de Pós-Graduação em Ciências Farmacêuticas. Defesa: Curitiba, 19/02/2015 / Inclui referências / Área de concentração: Insumos, medicamentos e correlatos / Resumo: Introdução. O diabetes mellitus (DM) é uma doença crescente. Atualmente, há 382 milhões de pacientes com diabetes no mundo e, no Brasil, estima-se o número de 12 milhões, constituindo-se um dos principais problemas de saúde pública no país. Por ser uma doença crônica o DM requer atenção continuada envolvendo uma equipe multiprofissional treinada e comprometida. No tratamento, os principais pontos estratégicos são a educação para o autocuidado, as mudanças no estilo de vida e o uso correto das insulinas. Objetivos. Avaliar a qualidade de vida (QV) de pacientes com diabetes mellitus tipo 1 (DM1) em tratamento com análogos de insulina e verificar a influência do acompanhamento farmacoterapêutico no controle glicêmico e adesão ao tratamento. Metodologia. Esse foi um estudo transversal no qual foram incluídos 140 pacientes registrados na 3ª Regional de Saúde de Ponta Grossa-PR, maiores de 18 anos e que receberam acompanhamento farmacoterapêutico por pelo menos um ano. Os dados sociodemográficos, clínicos e do tratamento foram obtidos a partir de três fontes: do sistema eletrônico do Componente Especializado da Assistência Farmacêutica do Ministério da Saúde, dos arquivos físicos e mediante entrevista. Foi realizado um estudo retrospectivo para avaliar a influência do acompanhamento farmacoterapêutico no controle glicêmico, sendo considerados valores de HbA1c antes e um ano após o serviço. Avaliou-se a qualidade de vida através do instrumento DQOL-Brasil. As análises estatísticas foram realizadas utilizando o programa SPSS versão 17.0, estipulando-se níveis de confiança de 95% escolhendo os testes apropriados para cada análise. Resultados e Conclusões. 140 pacientes participaram da pesquisa, sendo a maioria mulheres (55,7%), adultos jovens (57,8% - entre 20 e 39 anos), e 52,1% não possui cônjuge, sendo solteiros, divorciados ou viúvos. A formação escolar predominante é "Ensino Superior Completo" (32,9%), a renda média é de R$ 3.198,00 e a maior parte residente em Ponta Grossa (88,6%). A avaliação do acompanhamento farmacoterapêutico mostrou que após sua inclusão houve redução significativa da HbA1c, sugerindo que esse serviço é capaz auxiliar no controle glicêmico de pacientes que utilizam análogos de insulina. O DM1 pode levar à pior percepção da qualidade de vida, sendo vários os fatores que interferiram significativamente nos pacientes desse estudo: gênero, idade, estado civil, idade no diagnóstico, internamentos, frequência de hipoglicemias, presença de complicações do DM1, realização da aplicação correta das insulinas, realização de atividade física regular e controle glicêmico adequado (HbA1c). O tratamento do DM1 visa o controle glicêmico e redução das complicações crônicas e para ser efetivo necessita de compromisso em todos os seus aspectos. Através do acompanhamento farmacoterapêutico o farmacêutico pode contribuir com o alcance das metas terapêuticas e melhoria da QV de pacientes com DM1. Palavras-chave: Diabetes mellitus tipo 1; Acompanhamento farmacoterapêutico; Qualidade de Vida; DQOL-Brasil; Adesão ao tratamento. / Abstract: Introduction. Diabetes mellitus (DM) is a growing disease. There are 382 million people with diabetes in the world. In Brazil the number of diabetic people is estimated in 12 million and it is one of the main health problems in the country. DM is a chronic condition and needs continued follow-up which involves a compromised multiprofessional team. The key points to have a good treatment are education to self-care, changes in lifestyle and the correct use of insulin. Objectives. This study aimed to evaluate the quality of life (QoL) of patients with DM 1 being treated with insulin analogues and to verify the influence of pharmacotherapy follow-up on glycemic control and treatment compliance. Methodology. This was a transversal study that included 140 patients registered at the 3rd Health Regional of Ponta Grossa-PR who were over 18 years old and receiving pharmaceutical care for at least one year. Sociodemographic, clinic and treatment data were obtained from three sources: electronic system of Specialized Component of Pharmaceutical Assistance of Health Ministry, physical files and by interview. A retrospective study was done to evaluate the influence of pharmacotherapeutic follow-up in glycemic control and were considered HbA1c values before and after one year of follow-up. The DQOL-Brazil was used to evaluate QoL. Statistical calculations were performed using SPSS version 17.0 with a 95% confidence levels and the appropriated testes were selected. Results and Conclusions. 140 patients were included at this research. Mosto f them were women (55.7%), Young adults (57.8% - between 20 and 39 years old) and 52.1% don't have a partner - are single, divorced or widow. Prevalent schooling is Complete University Education (32.9%), mean income R$ 3,198,00 and most lives in Ponta Grossa (88.6%). Analysis of pharmacotherapeutic follow-up showed that after its inclusion there were a significant reduction of HbA1c values, suggesting that this service can improve glycemic control of patients using insulin analogues. DM1 can worse QoL perception and the responsible factors that reduced significantly QoL were: gender, age, marital status, age at diagnoses, hospitalizations, frequency of hypoglycemia episodes, presence of DM1 chronic complications, correct application of insulins, make regular physical activities and good glycemic control (HbA1c). Treatment of DM1 aims good glycemic control and reduces chronic complications of the disease and to be effective requires compliance to all its aspects. Pharmacists can contribute to patients through pharmacotherapeutic follow-up helping them to reach therapeutic targets and get a better QoL perception. Keywords: Diabetes mellitus type 1; Pharmacotherapeutic follow-up; Quality of Life; DQOL-Brazil; Adherence to treatment.

Orientadora : Profª. Drª. Sandra Mara Woranovicz Barreira / Co-orientador : Prof. Dr. Carlos Eduardo Rocha Garcia / Dissertação (mestrado) - Universidade Federal do Paraná, Setor de Ciências da Saúde, Programa de Pós-Graduação em Ciências Farmacêuticas. Defesa: Curitiba, 11/08/2014 / Inclui referências / Área de concentração: Insumos, medicamentos e correlatos / Resumo: O Jerked Beef (JB) é um produto cárneo salgado e desidratado, derivado do charque tradicional, diferenciando-se deste pelo uso de nitrito e embalagem a vácuo, além do maior controle dos parâmetros físico-químicos previstos na legislação. No entanto, estudos demonstram que o nitrito pode se associar a aminas biológicas resultando na formação compostos carcinogênicos. Diversos estudos têm avaliado alternativas para substituir os sais de cura por substâncias naturais e de maior segurança ao consumidor. O urucum (Bixa orellana L.) é um vegetal cuja semente possui altas concentrações dos carotenoides utilizados para elaboração de um corante amarelo pela indústria alimentícia. Este trabalho teve como objetivo investigar o uso do sal de bixina extraído do urucum como antioxidante e promotor da cor vermelha em substituição ao nitrito de sódio no JB. Amostra de bixina extraída do urucum por Soxhlet e saponificada utilizando solução de KCl 0,9 M. Posteriormente, foram avaliados o efeito da substituição do nitrito por bixinato de potássio sobre a rancidez oxidativa, parâmetros de cor e aceitação sensorial visual de JB elaborado em escala laboratorial, além do acompanhamento dos níveis residuais de nitrito durante 90 dias de armazenamento. Foram avaliados os tratamentos: NIT (150 ppm NaNO2: 0 ppm bixinato); N/B (75 ppm NaNO2: 250 ppm bixinato); BIX (0 ppm NaNO2: 500 ppm bixinato) e CTRL (0 ppm NaNO2: 0 ppm bixinato). Apresentações comerciais de JB (quatro diferentes marcas) adquiridas em triplicata junto ao varejo de Curitiba-PR também foram avaliadas quanto aos mesmos parâmetros para caracterização do produto industrializado. Amostras formuladas com concentração integral de nitrito apresentaram os menores níveis de oxidação e maior aceitação sensorial visual. Por outro lado, sobretudo quando utilizado como substituinte parcial do nitrito, o bixinato proporcionou a maior intensidade de cor vermelha (a*) e, quando comparado ao controle, significativo efeito antioxidante. O uso do sal de bixina se mostrou uma alternativa viável a ser explorada para minimizar o uso do nitrito. No entanto, estudos complementares são necessários para adequar as concentrações e condições de processamento às características finais desejadas para o JB. Palavras-chave: antioxidante, charque, cor, cura, oxidação / Abstract: Jerked Beef (JB) is a salted and dried meat product derived from the traditional charqui meat, differing from this by the use of nitrite and vacuum packaging, in addition to control of physico-chemical parameters according to the Brazilian legislation. However, studies have shown that nitrite may be associated with organic amines resulting in the formation carcinogenic compounds. Several studies have evaluated alternatives in order to substitute curing salts by natural substances and consequently improve the consumer safety. Annatto (Bixa orellana L.) is a plant containing seeds with high concentration of carotenoids used for preparation of a yellow dye in food industries. The goal of this work is to investigate the use of salt extracted from annatto bixin as antioxidant and also as a promoter of red color replacing sodium nitrite in JB. Bixin extracted from annatto was saponified using 0.9 M KCl. After, the following parameters were analyzed: the effect of replacement of nitrite by potassium bixinate under oxidative rancidity, color and visual sensory acceptance on JB prepared in laboratory scale. The samples prepared were: NIT (150 ppm NaNO2: bixinate 0 ppm); N/B (75 ppm NaNO2: bixinate 250 ppm); BIX (0 ppm NaNO2: 500 ppm bixinate) and CTRL (0 ppm NaNO2: bixinate 0 ppm). Besides, residual levels of nitrite were evaluated during 90 days. JB sale presentations (four different brands) acquired in triplicate in retailers (Curitiba-PR) were also evaluated on the same parameters to characterize the manufactured product. Samples formulated with full concentration of nitrite showed lower oxidation levels and better visual sensory acceptance. On the other hand, especially when used as a partial replacement of nitrite, bixinate provided the most intense red color (a*). When compared to control sample, significant antioxidant effect was detected. The use of bixinate proved to be a viable alternative to be explored in order to minimize the use of nitrite. However, further studies are necessary to adjust the concentrations and processing conditions for the desired JB final characteristics. Key words: antioxidant, jerked beef, color, curing, oxidation.

Orientadora : Profª. Drª. Tania Maria Bordin Bonfim / Co-orientador : Dr. Gildo Almeida da Silva / Tese (doutorado) - Universidade Federal do Paraná, Setor de Ciências da Saúde, Programa de Pós-Graduação em Ciências Farmacêuticas. Defesa: Curitiba, 05/12/2014 / Inclui bibliografia / Área de concentração: Insumos, medicamentos e correlatos / Resumo: A criação de Coleções de Culturas para preservação dos recursos genéticos ganhou grande importância nas discussões realizadas durante a Eco-92 para o estabelecimento da Convenção sobre Diversidade Biológica. As Coleções de Culturas têm a função de isolar, caracterizar, identificar, conservar e disponibilizar microrganismos para o desenvolvimento de processos e obtenção de produtos de interesse econômico. A Embrapa reconhece a importância da conservação dos recursos microbianos para o desenvolvimento científico e tecnológico do país. Hoje, uma das Coleções desta instituição consiste na Coleção de Leveduras da Embrapa Uva e Vinho. Esta Coleção, até pouco tempo atrás, era um banco de manutenção de leveduras para elaboração de vinho, no qual a identidade de poucas era conhecida. A transição para se tornar uma Coleção oficial envolveu a etapa de identificação de todas as leveduras criopreservadas, tendo sido este o objetivo deste trabalho. As identificações microbianas podem ser conduzidas por técnicas convencionais (testes bioquímicos e morfológicos), técnicas de biologia molecular ou por método analítico como a espectrometria de massa. Este último apresenta alto rendimento, o que constitui uma vantagem para grandes demandas de identificações. Assim, as 871 linhagens de leveduras vínicas autóctones analisadas foram identificadas por espectrometria de massa com analisador de tempo de voo e ionização/dessorção a laser assistida por matriz (MALDI-TOF MS). Esta técnica exigiu a construção de uma biblioteca suplementar tendo em vista que os bancos de dados comerciais possuem, na sua maioria, espectros de referência voltados a microrganismos de importância clínica. Previamente a inserção das espécies no banco de dados suplementar, as espécies foram identificadas por técnicas de biologia molecular renomadas como PCR-RFLP e sequenciamento genético. Para a primeira foi amplificado a região ITS do DNA ribossomal com subsequente restrição enzimática usando as endonucleases CfoI, HaeIII, HinfI, DdeI e MboII. Para a segunda técnica utilizou-se o sequenciamento da região D1/D2 do 26S rDNA. O banco de dados comercial usado foi capaz de identificar apenas 65,2% das leveduras analisadas. Ao empregar o Banco de Dados Suplementar todas as linhagens remanescentes foram também corretamente identificadas. Este banco de dados já tem sido utilizado por outros grupos de pesquisa associados a leveduras ambientais, demostrando a aplicabilidade e a extensão da utilidade do mesmo. MALDI-TOF/ MS demonstrou ser uma técnica rápida, precisa e de baixo custo analítico para identificação taxonômica de leveduras ambientais com caráter industrial. Palavras-chave: MALDI-TOF/EM; PCR-RFLP; ITS; Sequenciamento; Taxonomia / Abstract: The creation of Culture Collections to preserve the genetic resources conquered great importance in the discussions carried out during Eco-92 in order to establish the Convention on Biological Diversity. The Culture Collections are intended to isolate, characterize, identify, conserve and distribute microorganisms. Embrapa recognizes the importance of maintaining microbial resources to give support to scientific and technical development of the country. Nowadays, one of Embrapa's Collections consists of Yeast Collection belonging to its subunit Embrapa Grape and Wine. This Collection, short while ago, was considered a local of yeast maintenancebiased to vinification process, in which the identity of just a few was known. The transition to turn into an official Collection comprised an identification step of all cryopreserved yeasts, which became the principal aim of the present study. Microbial identification can be carried out by conventional techniques (biochemical and morphological tests), molecular biology techniques or by analytical methods such as mass spectrometry. The latter has a high yield, which consists in an advantage to large demands on identifications. Thus, 871 autochthonous wine yeast strains were identified by matrix-assisted laser desorption/ionization time of flight (MALDI-TOF) mass spectrometry. This technique demanded the construction of a supplementary database, once the commercial databases available retain its standard spectrum biased towards microorganisms of clinical importance. Previously the step of spectrum insertion in the supplementary database, the species were identified by renowned molecular biology techniques as PCR-RFLP and sequencing. The first method amplified ITS region of ribosomal DNA with subsequently enzymatic restriction employing endonucleases CfoI, HaeIII, HinfI, DdeI e MboII. For sequencing, 26S rDNA D1/D2 region were amplified. The commercial database used were able to identify only 65.2% of the analysed yeast, while using also the Supplementary Database all the remaining strains were correctly identified. This Database has already been used by other research groups associated with environmental yeasts, demonstrating its applicability and usefulness. MALDI-TOF MS has demonstrated to be a fast, precise and a low analytical cost technique for taxonomic identification of environmental yeast strains with an industrial character. Keywords: MALDI-TOF/MS; PCR-RFLP; ITS; Sequencing; Taxonomy