CoordenaÃÃo de AperfeiÃoamento de Pessoal de NÃvel Superior / The aim of this study was to investigate the activity of TNF-α against Candida albicans biofilm. Therefore, week biofilm producer (49BMv and 51BMv) and strong biofilm producer (ATCC 10231 and CEMM 01.05.006) strains of C. albicans were incubated in RPMI medium in 96-well plates at 35 ÂC for 48 or 96 hours in order to assess biofilm formation and mature biofilm, respectively, in the absence or presence of different concentrations of TNF-α (0.1, 0.5, 1, 10, 20 and 40 ng/ml). TNF-α was added during preparation of the biofilm to assess its effect on biofilm formation or after 48 hours of culture for evaluation in mature biofilm. After incubation, the metabolic activity was assessed using XTT reduction assay. The minimum inhibitory concentration (MIC) of TNF-α against C. albicans was evaluated by broth microdilution technique according to Document M27-A3, recommended by CLSI, using the concentrations 0.5, 1, 10 and 20 ng/mL. An analysis of the hyphae/blastoconidia ratio in biofilm was performed using optical microscopy by couting of filamentous (hyphae and pseudo-hyphae) and yeast cells and then a formula which allowed visualization of the relationship between the amount of filamentous and other structures was applied. The results indicated that TNF-α showed a significant inhibition of biofilm formation in a dose-dependent way and a discrete mature biofilm inhibition. In addition, the analysis of hyphae/blastoconidia ratio showed a statistically significant reduction in the number of filamentous forms in biofilm formation in the presence of TNF-α. However, the growth of C. albicans in planktonic form was not affected by any of the TNF-α concentrations used. These results indicate that TNF-α inhibits the formation of C. albicans biofilms, probably through the suppression of filamentation, a crucial step in biofilm formation. / O presente estudo teve como objetivo investigar a aÃÃo do TNF-α frente ao biofilme de Candida albicans. Para tanto, cepas de C. albicans fracamente produtoras de biofilme (49BMv e 51BMv) e fortemente produtoras de biofilme (ATCC 10231 e CEMM 01.05.006) foram incubadas em meio RPMI em placas de 96 poÃos, a 35 ÂC por 48 ou 96 horas para avaliar o desenvolvimento do biofilme em formaÃÃo e maduro, respectivamente, na ausÃncia ou presenÃa de diferentes concentraÃÃes de TNF-α (0,1, 0,5, 1, 10, 20 e 40 ng/mL). A adiÃÃo do TNF-α foi realizada no momento do preparo do cultivo para avaliar seu efeito no biofilme em formaÃÃo ou apÃs 48 horas de cultura para avaliaÃÃo no biofilme maduro. ApÃs incubaÃÃo, a atividade metabÃlica foi avaliada por meio do ensaio de reduÃÃo de XTT. A concentraÃÃo inibitÃria mÃnima (CIM) do TNF-α em C. albicans foi avaliada, dentre as concentraÃÃes testadas 0,5, 1, 10 e 20 ng/mL, por meio da tÃcnica de microdiluiÃÃo em caldo, segundo documento M27-A3, preconizada pelo CLSI. Foi realizada uma anÃlise da relaÃÃo hifas/blastoconÃdios do biofilme por microscopia Ãptica, por meio de uma contagem das formas filamentosas (hifas e pseudo-hifas) e leveduriformes e em seguida aplicada uma fÃrmula que permitiu visualizar a relaÃÃo entre a quantidade de formas filamentosas e as demais estruturas. Os resultados indicaram uma marcante inibiÃÃo da formaÃÃo do biofilme de forma dose-dependente e uma discreta inibiÃÃo do biofilme maduro pelo TNF-α. AlÃm disso, a anÃlise da relaÃÃo hifas/blastoconÃdios revelou reduÃÃo estatisticamente significativa do nÃmero das formas filamentosas no biofilme em formaÃÃo, quando na presenÃa do TNF-α. No entanto, o crescimento de C. albicans na forma planctÃnica nÃo foi afetado por nenhuma das concentraÃÃes de TNF-α utilizadas. Estes resultados indicam que o TNF-α inibe a formaÃÃo do biofilme de C. albicans, provavelmente atravÃs da supressÃo da filamentaÃÃo, etapa crucial para a formaÃÃo do biofilme.
| Identifer | oai:union.ndltd.org:IBICT/oai:www.teses.ufc.br:10863 |
| Date | 25 January 2016 |
| Creators | Morgana Ramos Martins Xerez |
| Contributors | Francisco Airton Castro da Rocha, VirgÃnia ClÃudia Carneiro GirÃo, Marcos FÃbio Gadelha Rocha |
| Publisher | Universidade Federal do CearÃ, Programa de PÃs-GraduaÃÃo em CiÃncias MÃdicas, UFC, BR |
| Source Sets | IBICT Brazilian ETDs |
| Language | Portuguese |
| Detected Language | English |
| Type | info:eu-repo/semantics/publishedVersion, info:eu-repo/semantics/masterThesis |
| Format | application/pdf |
| Source | reponame:Biblioteca Digital de Teses e Dissertações da UFC, instname:Universidade Federal do Ceará, instacron:UFC |
| Rights | info:eu-repo/semantics/openAccess |
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