Os esteroides ovarianos modulam a expressão de importantes moléculas no endométrio de fêmeas bovinas, incluindo os eicosanoides. Os eicosanoides sintetizados pelo endométrio controlam uma gama de eventos reprodutivos. A hipótese do presente estudo é que a síntese de eicosanoides pelo endométrio no sétimo dia pós-estro é regulada pelo ambiente endócrino periovulatório. Objetivou-se mensurar a expressão gênica de 23 proteínas envolvidas na síntese, transporte e sinalização de eicosanoides e quantificar uma série de eicosanoides no útero de vacas de corte com diferentes perfis hormonais peri-ovulatórios no início do diestro. O crescimento folicular foi farmacologicamente manipulado para que resultassem grupos apresentando folículo pré-ovulatório e corpo lúteo grande (F/CLG; n=11) ou pequeno (F/CLP; n=11). Vacas Nelores multíparas, não lactantes, pré-sincronizadas, receberam (F/CLG) ou não (F/CLP) uma dose de PGF2α e um dispositivo de progesterona, juntamente com benzoato de estradiol. A remoção dos dispositivos de liberação de progesterona e aplicação de PGF2α foi realizada 60 a 42 horas antes da indução da ovulação no grupo F/CLG e entre 48 a 30 horas no grupo F/CLP. A ovulação foi induzida (GnRH; 10g) no D0. Amostras de sangue foram obtidas entre os dias D-2 a D0 e D0 a D7 para mensuração das concentrações de estradiol os dias progesterona, respectivamente. No dia 7, tecidos e lavados uterinos foram coletados. Em comparação ao grupo F/CLG, os animais do grupo F/CLP apresentaram folículos pré-ovulatórios e CL menores que resultaram em menores concentrações de estradiol e progesterona, respectivamente (P<0,5). A quantificação dos transcritos foi feita por qPCR. A abundância dos genes PTGES, AKR1C3, AKR1C4, CBR1, PTGIS e ALOX12, foi maior para os animais do grupo F/GLG, e PLA2G10 foi menor no mesmo grupo quando comparado com o grupo F/CLP (P<0,10). A concentração de metabólitos foi mensurada no tecido endometrial (pg/g) e lavado uterino (ng/mL) por espectrometria de massas. Maiores concentrações do metabolito 9-HETE foram encontradas no tecido endometrial do grupo F/CLP (P<0,05). Comparações entre médias foram determinadas pelo teste t de Student. Conclui-se que diferentes concentrações de estradiol (proestro) e progesterona (início do diestro) foram capazes de modular a expressão de genes relativos à síntese de eicosanoides, sem influenciar as concentrações dos eicosanoides no endométrio e lavado uterino de fêmeas bovinas no sétimo dia do ciclo. / Ovarian steroids modulate the expression of important molecules on bovine endometrium, including eicosanoids. The eicosanoids synthetized by the endometrium control many reproductive processes. The hypothesis of this study is that the eicosanoids synthesis by the endometrium on day seven after the estrous is regulated by the periovulatory endocrine milieu. The aims of this study were (1) to measure the expression of 23 genes that encode proteins involved in eicosanoids synthesis, transport and signaling and (2) to quantify eicosanoids on beef cows uterus exposed to different periovulatory hormonal profiles. Follicular growth was pharmacologically manipulated to generate two groups presenting large or small preovulatory follicle and corpus luteum (LF/CL and SF/CL respectively; n=11/group). Cyclic, non-lactating Nelore cows received two injections of cloprostenol (PGF2α 0.5mg; i.m.) 14 days apart. Ten days later (D-10), cows received a P4-releasing device along with estradiol benzoate (2mg; i.m.). To modulate the growth of the preovulatory follicles, on D-10, animals received PGF2α (LF/CL) or not (SF/CL). The P4-releasing devices were removed and PGF2α injected 60 to 42 hours before the ovulation induction in the LF/CL group and 48 to 30 hours before the ovulation induction in the SF/CL group. Ovulation was induced with buserelin (GnRH; 10µg; i.m.) on D0. Plasma was obtained for measurement of estradiol concentrations from D-2 to D0 and from D0 to D7 for progesterone measurements. On D7, the animals that ovulated in response to GnRH were slaughtered and uterus flushing and endometrium were collected. Differences between group means were determined by students t test. Animals from LF/CL group presented larger preovulatory follicles, corpus luteum, estradiol and progesterone levels when compared to animals from SF/CL group (P<0.1). The quantification of the transcripts was performed by qPCR. PTGES, AKR1C3, AKR1C4, CBR1, PTGIS and ALOX12 were more abundant and PLA2G10 was less expressed in the endometrium from animals from LF/CL when compared to SF/CL (P<0.10). Metabolites concentration was measured by mass spectrometry in endometrial tissue (pg/g) and uterine flushings (ng/mL). The metabolite 9-HETE was more abundant on uterine flushings from animals with SF/CL (P<0.05). Different concentrations of estradiol (proestrous) and progesterone (beginning of diestrous) modulated the expression of genes related to eicosanoids synthesis, but it did not affect eicosanoids levels in the endometrium and uterine flushing in beef cattle on day 7 of the estrous cycle.
| Identifer | oai:union.ndltd.org:usp.br/oai:teses.usp.br:tde-19122013-101159 |
| Date | 10 July 2013 |
| Creators | Oliveira, Milena Lopes |
| Contributors | Binelli, Mario |
| Publisher | Biblioteca Digitais de Teses e Dissertações da USP |
| Source Sets | Universidade de São Paulo |
| Language | Portuguese |
| Detected Language | English |
| Type | Dissertação de Mestrado |
| Format | application/pdf |
| Rights | Liberar o conteúdo para acesso público. |
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