Η παρεγκεφαλίδα των πτηνών, μια μορφολογικά μοναδική δομή του
εγκεφάλου, αποτελείται από 10 λοβούς (μερικοί από τους οποίους φέρουν
δευτερογενείς υποδιαιρέσεις), οι οποίοι σχηματίζονται κατά τα ενδιάμεσα
εμβρυϊκά αναπτυξιακά στάδια. Ο πολλαπλασιασμός και η μετανάστευση των
κυττάρων της εξωτερικής κοκκώδους στιβάδας είναι το κύριο γεγονός κατά
την διαδικασία ανάπτυξης των παρεγκεφαλιδικών λοβών. Σκοπός της
παρούσας μελέτης είναι η διερεύνηση του μηχανισμού σχηματισμού των
λοβών στην αναπτυσσόμενη παρεγκεφαλίδα. Για τον προσδιορισμό του
ρυθμού του πολλαπλασιασμού των πρόγονων κοκκωδών κύτταρων,
εφαρμόσθηκε η ανοσοϊστοχημική μέθοδος της 5-βρωμο-2-δεοξυουριδίνης
(BrdU). Η BrdU, που ενσωματώνεται στο DNA κατά την S-φάσης του
κυτταρικού κύκλου, ενέθηκε in ovo (100μg/gr βάρους αυγού σε φυσιολογικό
ορό) στις εμβρυικές μέρες E10, E13, E15 και E17, και μετά από
διαφορετικούς χρόνους επιβίωσης, τα έμβρυα θυσιάστηκαν (1, 2 και 3 ώρες
μετά την ένεση), μονιμοποιήθηκαν με ενδοκάρδια έγχυση, και αφαιρέθηκε ο
εγκέφαλος, έγινε κρυο-προστασία, μετά –μονιμοποίηση και φύλαξη του
εγκεφάλου στους -80°C. Την E10 ημέρα, παρατηρήθηκε πλήρως
ανεπτυγμένη πρωτογενής σχισμή, ενώ από την E13 ημέρα, όλοι οι λοβοί της
παρεγκεφαλίδας έχουν σχηματιστεί και μέχρι την E17 μέρα όλες οι
υποδιαιρέσεις τους είναι εμφανείς. Με πειράματα απλής και διπλής
ανοσοϊστοχημείας, σε διατομές 20μm, προσδιορίσθηκε ο αριθμός των
μιτωτικά ενεργών κυττάρων στην S-φάση (BrdU σήμανση), ο αριθμός των
αποπτωτικών κυττάρων (σήμανση κασπάσης 3). Έγινε χαρτογράφηση των
προτύπων πολλαπλασιασμού και απόπτωσης (με τη χρήση camera lucida)
και υπολογίστηκε σε συγκεκριμένους λοβούς ο αριθμός των προγονικών
κοκκωδών κυττάρων σε διαφορετικούς χρόνους επιβίωσης. Μόνο μικρός
αριθμός αποπτωτικών κυττάρων παρατηρήθηκε στη μελλοντική εσωτερική
κοκκώδη στιβάδα, τον τελικό προορισμό των κυττάρων της εξωτερικής
κοκκώδους στιβάδας, και συνεπώς η απόπτωση δεν παίζει καθοριστικό ρόλο
στον σχηματισμό των λοβών. / The cerebellum (Cb), a highly conserved structure of the vertebrate
brain, is a morphologically unique laminated structure made up of a set of folia
separated by fissures. The avian cerebellum consists of ten folia, (some of
them are subdivided in secondary folia) which are mainly developed during
mid and late embryonic stages. External granule cell proliferation is the major
event that coincides with the fissure formation. The present study aimed to
address the question of the mechanisms that underlie the cerebellar fissure
development. For this, the proliferation pattern in the external granule cell
layer of the developing embryonic chick cerebellum was mapped, by means
of 5-bromo-2’-deoxyurinine (BrdU) immunohistochemistry. BrdU, an S-phase
marker was injected in ovo, (100μg/gr egg weight in physiological saline) at
the embryonic days E10, E13, E15 and E17 and embryos were allowed to
survive for different survival times. The embryos were fixed, cryo-protected
and adjacent cerebellar sections were processed for BrdU labelling to
determine proliferating cells, for caspase 3 labelling to determine the pattern
of apoptotic cells and for double immunofluorescence to characterize the
phenotype of BrdU+ cells. Cell proliferation and apoptotic patterns were
determined throughout the individual lobules, by image analysis and camera
lucida mapping. At day E10, mid-sagittal sections of cerebellum showed that
primitive fissure is formed, with well infolded the fissure prima. From day E13,
all primary folia were present and by E17 day all subdivisions were
developed. While mitotic activity characterized all external granule cell layer
folia, low numbers of cells undergoing apoptosis were found mainly in the
future granule cell layer, the site of the final destination of external granule
cells. Estimation of the density of BrdU+ granule cell precursors revealed that
differences determined in the proliferation rate between the fissure’s wall and
floor, but not in the apoptotic cell death, may account for the formation of
fissures and folia.
| Identifer | oai:union.ndltd.org:upatras.gr/oai:nemertes:10889/3938 |
| Date | 07 December 2010 |
| Creators | Κομματά, Βασιλική |
| Contributors | Δερμών, Αικατερίνη, Kommata, Vasiliki, Ζάγκρης, Νικόλαος, Στεφάνου, Γεωργία, Δερμών, Αικατερίνη |
| Source Sets | University of Patras |
| Language | gr |
| Detected Language | Greek |
| Type | Thesis |
| Rights | 0 |
| Relation | Η ΒΚΠ διαθέτει αντίτυπο της διατριβής σε έντυπη μορφή στο βιβλιοστάσιο διδακτορικών διατριβών που βρίσκεται στο ισόγειο του κτιρίου της. |
Page generated in 0.0027 seconds