El melanoma cutáneo es una neoplasia maligna de los melanocitos que se caracteriza por un curso clínico a menudo indeseable. Aunque actualmente la detección precoz y la cirugía ofrecen una alta tasa de curación, este tumor puede eludir la vigilancia inmunológica del huésped favoreciendo su evolución. Esto puede deberse ciertas interacciones entre los antígenos leucocitarios humanos (HLA) y células T citolíticas específicas de antígeno (CTL) o las células asesinas naturales (NK), las cuales son importantes por su acción anti-tumoral frente al melanoma. En contraste con otras células tumorales, las células de melanoma se consideran altamente inmunogénicas debido a que expresan antígenos que pueden desempeñar un papel decisivo en el reconocimiento de células tumorales y el rechazo por el sistema inmunológico del huésped. OBJETIVOS: Hasta la fecha no han sido completamente dilucidados los mecanismos inmunológicos implicados en el melanoma cutáneo. Se han hecho esfuerzos para encontrar marcadores de susceptibilidad o pronóstico y posibles dianas para las terapias inmunológicas, pero no han dado frutos aún. Por lo tanto, los objetivos de este estudio han sido investigar si: 1. La susceptibilidad o evolución del melanoma están influenciadas o no por los loci HLA A, HLA B, HLA C, HLA E, HLA-DRB1 o HLA-DQB1. 2. Si los cambios tempranos de las células T CD8+ y CD56+ NK que expresan receptores NK participan en la susceptibilidad o curso del melanoma en diferentes grupos de pacientes definidos por su dimorfismo HLA-C (Lys80/Asn80). DISEÑO EXPERIMENTAL: 1. El tipaje de HLA-A y HLA-B con el método de microlinfocitotoxicidad estándar. El tipaje HLA C para analizar el dimorfismo en la posición 80 de la hélice α1 (Asn80/Lys80) capaz de mediar con las células que expresan KIR, se realizó PCR-SSO. 2. El tipaje HLA-DRB1 y HLA-DQB1 y las confirmaciones de HLA de clase I se realizó mediante PCR-SSP. 3. Las células T CD8+ y CD56+ NK de pacientes y controles con diferentes genotipos HLA-C (Asn80/Lys80) se analizaron por citometría de flujo. RESULTADOS: 1. En este estudio, no se ha encontrado una asociación negativa o positiva de los alelos HLA-A, HLA-B, HLA-DRB1, HLA-DQB1 y HLA E con la susceptibilidad o evolución del melanoma melanoma. 2. Este estudio demuestra, por primera vez, que la presencia del epítopo Asn80 podría contribuir a la protección de la enfermedad, en particular el alelo HLA C*07. 3. Este estudio muestra, también por primera vez, que la presencia de HLA-C portadores de Lys80 en homocigosis puede ser considerado como un factor predisponente para el desarrollo de metástasis linfáticas tempranas. 4. Según nuestro conocimiento, describimos por primera vez, una evidencia “in vivo” de la existencia de un estado de activación en pacientes con melanoma en etapas no metastásicas de la enfermedad, determinada por un aumento del número absoluto de linfocitos T de sangre periférica con fenotipo CD8+CD28+DR+ o CD8+CD28-CD161+, que podría estar asociada con una estimulación de la respuesta inmune en las primeras etapas de melanoma cutáneo. 5. Se detecta, por primera vez también, una expansión selectiva de una subpoblación de células T que expresan receptores KIR2DL1/S1 (CD8+CD28CD158a+) junto con un aumento de las células CD56+ NK KIR2DL1/S1 en pacientes de melanoma, mucho más pronunciado en los pacientes portadores del ligando HLA-CLys80 en homocigosis, lo que indica un particular papel regulador inmunológico de las células que expresan receptores KIR2DL1/S1 en el melanoma. 6. Por lo tanto, es tentador especular sobre la posibilidad de la apertura de nuevas vías terapéuticas para el control de la progresión del melanoma, tomando en consideración a estas células como posibles dianas para la intervención inmunológica mediante el bloqueo o la estimulación de sus receptores inhibidores/activadores. / Cutaneous melanoma is a malignant neoplasm of melanocytes characterized by an often undesirable clinical outcome. Although current early detection and surgery offer a high cure rate, this tumor can be elusive for the host immune surveillance, especially if a state of tolerance against tumor is induced. The clinical outcome may be influenced by complex interactions that take place between the different human leukocyte antigens (HLA) and antigen-specific cytolytic T cells (CTL) or natural killer (NK) cells, which are believed to be important in eliciting an effective immune protection against melanoma. Nonetheless, in contrast to other tumor cells, melanoma cells are usually considered highly immunogenic because of the expression of antigens that may play a decisive role in tumor cell recognition and rejection by the host immune system. PURPOSE: To date, immune mechanisms involved in cutaneous melanoma have not been fully elucidated. Efforts have been made to find susceptibility or prognosis markers and potential targets for immune therapies, but they have not been entirely fruitful so far. Therefore, the goals of this study were to investigate: 1. If the susceptibility or outcome of the melanoma is influenced by HLA A, HLA B, HLA C, HLA E, HLA-DRB1 or HLA-DQB1 loci. 2. The influence of early changes in CD8 T and CD56 NK cells expressing NK receptors in different HLA-C dimorphism (Lys80/Asn80) groups in the susceptibility or outcome of the melanoma. EXPERIMENTAL DESIGN: All experiments were made in patients and sex- and age-matched controls. 1. HLA-A and HLA-B typing were performed by the standard microlymphocytotoxicity test. 2. Typing of HLA C dimorphism (Lys/Asn) at position 80 in the α1 helix to examine whether it could mediate in the emergence of cells expressing killer-cell immunoglobulin-like receptors was tested by PCR-SSO. 3. HLA class II typing HLA-DRB1 and HLA-DQB1 typing and resolution of HLA class I ambiguities were performed by PCR-SSP 4. CD8 T and CD56 NK cells were analyzed in patients and sex- and age-matched controls with different HLA-C genotypes (Asn80/Lys80) by flow cytometry. RESULTS: 1. In this study, none of the HLA class I antigens (HLA-A and HLA-B), HLA class II alleles (HLA-DRB1 and HLA-DQB1) and HLA E showed positive or negative association with the overall population of melanoma patients. 2. This study shows, for the first time, that the presence of the Asn80 epitope could contribute to the protection against the disease, particularly the HLA-Cw*07 allele. 3. This study shows, also for the first time, that the presence of Lys80 epitope of the HLA-C molecules in homozygosis may be considered as a predictive factor for the development of early LN metastasis. 4. To our knowledge, we have described for the first time an in vivo evidence of the existence of a status of activation in melanoma patients at the nonmetastatic stages of the disease, determined by an increase of the absolute number of T lymphocytes from peripheral blood with phenotype CD8+CD28+DR+ or CD8+CD28-CD161+, which could be associated with a stimulation of the immune response at the early stages of cutaneous melanoma. 5. We have detected, for the first time too, a selective expansion of T cells subpopulation expressing KIR2DL1/S1 (CD8+CD28-CD158a+) together with an increase of CD56+ NK KIR2DL1/S1 cells in patients of melanoma, much more pronounced in patients carrying the corresponding HLA-CLys80 ligand in homozygosis, which point to a particular immune regulatory role of cells expressing KIR2DL1/S1 in melanoma. 6. Thus, it is tempting to speculate about the possibility of opening new therapeutic ways for the control of melanoma progression, taking into consideration these cells as a target for immune intervention by blocking or enhancing their inhibitory/activatory receptors.
| Identifer | oai:union.ndltd.org:TDX_UM/oai:www.tdx.cat:10803/373204 |
| Date | 05 February 2016 |
| Creators | García Alonso, Ana María |
| Contributors | Álvarez López, Rocío, Campillo Marquina, José Antonio, Universidad de Murcia. Departamento de Bioquímica y Biología Molecular B e Inmunología |
| Publisher | Universidad de Murcia |
| Source Sets | Universidad de Murcia |
| Language | Spanish |
| Detected Language | Spanish |
| Type | info:eu-repo/semantics/doctoralThesis, info:eu-repo/semantics/publishedVersion |
| Format | 272 p., application/pdf |
| Source | TDR (Tesis Doctorales en Red) |
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