MAGALHÃES, Hemerson Iury Ferreira. Propriedades anticâncer da fenstatina, 4-metoxifenil-3,4,5-trimetoxifenilmetanona (RR07). 2009. 186 f. Tese (Doutorado em Farmacologia) - Universidade Federal do Ceará. Faculdade de Medicina, Fortaleza, 2009. / Submitted by denise santos (denise.santos@ufc.br) on 2012-06-11T13:41:13Z
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Previous issue date: 2009 / The phenstatin, chemically known as 4-methoxyphenyl-3,4,5-trimetoxiphenylmethane, was called in the present study as RR07. This compound is a bisarylketone with stilbenoid skeleton obtained from combretastatin A4, with recognized cytotoxic and antineoplasic activities. Then, a detailed study of RR07 anticancer properties was conducted in several biological models. The cytotoxic activity of eleven compounds (RR01, RR02, RR03, RR04, RR05, RR06, RR07, RR08, RR09, RR10, RR11) was determined against thirteen tumor cell lines by MTT assay. Structure-activity relationship pointed out that the presence of ring A (3,4,5-trimethoxiphenyl) is essential for the cytotoxic potential. The RR07 was one of the most cytotoxic compounds, showing IC50 values ranging from 0.009 to 17.49 µM. Investigations on mechanism of action (0.25, 0.50, 1.00, 2.00 and 4.00 µM) showed a concentration-dependent manner cell viability reduction (trypan blue dye exclusion test) and proliferation decreasing (BrdU assay). Morphological alterations determined by hematoxylin/eosin and acridine orange/ethidium bromide fluorescent double staining methods indicated an increased number of apoptotic cells at lowest concentrations (0.25 and 0.50 µM) and necrotic cells at higher concentrations (1.00, 2.00 and 4.00 µM). Flow cytometry analyses showed that RR07 induced DNA fragmentation and cell cycle arrest at G2/M starting at 0.25 µM. In the comet assay performed with human peripheral blood mononuclear cells (PBMC), RR07 caused DNA strand breaks only at higher concentrations (2.00 and 4.00 µM). Experiments with isolated tubulin, RR07 also induced tubulin polymerization inhibition in a concentration of 10 μM. In vivo antitumor experiments showed that Sarcoma 180 transplanted-mice treated with RR07 intraperitoneally (ip) presented a tumor growth inhibition ratios of 30.9% and 48.19% (20 mg/kg/day and 40 mg/kg/day, respectively) and inhibition of 55.68% in associated treatment (5-Fluoruracil 10 mg/kg/day + RR07 20 mg/kg/day). Histopathological analyses of kidneys, spleen and livers revealed incipient and reversible alterations. In summary, RR07 can be considered as a pharmacological useful tool as well as a lead molecule to obtain novel compounds with low toxicity and promising antitumor properties. / A fenstatina, quimicamente designada de 4-metoxifenil-3,4,5-trimetoxifenilmetanona, denominada RR07, é uma bisarilcetona de esqueleto estilbenóide que pode ser obtida a partir da combretastatina A4, com reconhecida atividade citotóxica, por meio da oxidação de Jacobsen. Dentre as muitas atividades desencadeadas pelos estilbenos destacam-se atividade antiangiogênica, citotóxica e antitumoral. Para avaliar o seu potencial antineoplásico, um estudo farmacológico de suas propriedades anticâncer foi realizado em vários modelos biológicos. Utilizando o ensaio do MTT foi feito um estudo comparativo da citotoxicidade de moléculas estilbenóides com estruturas relacionadas ao composto RR07, onde foi observado que a presença do anel A (3,4,5-trimetoxifenil) é essencial para a atividade citotóxica da molécula. Determinou-se inicialmente a atividade citotóxica, frente a 13 linhagens tumorais pelo ensaio de redução do MTT sendo testados 11 compostos, (RR01, RR02, RR03, RR04, RR05, RR06, RR07, RR08, RR09, RR10, RR11), onde o estilbenóide RR07 destacou-se como um dos mais citotóxicos apresentando valores de CI50 que variaram de 0,009 a 17,49 M. Posteriormente, os estudos de mecanismo de ação com o RR07 nas concentrações de 0,25; 0,50; 1,00; 2,00 e 4,00 M, revelaram redução, de forma concentração-dependente, na viabilidade celular pelos métodos do azul de tripan e de BrdU (bromodeoxiuridina). As análises morfológicas feitas por hematoxilina/eosina mostraram núcleos metafásicos, onde no ensaio de incorporação por brometo de etídio/laranja de acridina evidenciou-se morte celular por apoptose nas concentrações de 0,25 e 0,50 M, com células em necrose nas concentrações de 1,00; 2,00 e 4,00 M, destacando-se alterações como desintegração membranar e picnose nuclear, nas concentrações de 0,25 M e 1,00 M, respectivamente. Nos ensaios por citometria de fluxo foi observado fragmentação do DNA com parada de ciclo na fase G2/M a partir da concentração 0,25 M. A análise pelo ensaio do cometa, para o RR07 revelou atividade genotóxica do tipo concentração-dependente entre células mononucleadas de sangue periférico (PBMC), principalmente em 2,00 e 4,00 M. A avaliação do RR07 no ensaio com tubulina isolada revelou inibição na polimerização da mesma em uma concentração de 10 M. A análise antitumoral evidenciou inibição de 30,9% e 48,19%, respectivamente, para as doses de 20 e 40 mg/kg/dia de RR07 por via intraperitoneal (ip), e 55,68% de inibição para a associação de 10 mg/kg/dia de 5-fluorouracil com 20 mg/kg/dia de RR07 (ip), em camundongos transplantados com Sarcoma 180, onde se verificou redução no crescimento tumoral e alterações renais iniciais e reversíveis. Desta forma, a fenstatina, RR07, apresenta-se como uma proposta de ferramenta farmacológica útil para a pesquisa de novos derivados.
| Identifer | oai:union.ndltd.org:IBICT/oai:www.repositorio.ufc.br:riufc/2725 |
| Date | January 2009 |
| Creators | Magalhães, Hemerson Iury Ferreira |
| Contributors | Pessoa , Cláudia do Ó |
| Source Sets | IBICT Brazilian ETDs |
| Language | Portuguese |
| Detected Language | Portuguese |
| Type | info:eu-repo/semantics/publishedVersion, info:eu-repo/semantics/doctoralThesis |
| Source | reponame:Repositório Institucional da UFC, instname:Universidade Federal do Ceará, instacron:UFC |
| Rights | info:eu-repo/semantics/openAccess |
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