Programa de Pós-Graduação em Biotecnologia. Núcleo de Pesquisas em Ciências Biológicas, Pró-Reitoria de Pesquisa de Pós Graduação, Universidade Federal de Ouro Preto. / Submitted by giuliana silveira (giulianagphoto@gmail.com) on 2016-03-22T17:27:01Z
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Previous issue date: 2014 / Probióticos são microrganismos vivos que, quando administrados de forma adequada,
agregam benefícios à saúde do hospedeiro. Várias espécies do gênero Lactobacillus
apresentam efeito probiótico comprovado e são importantes moduladoras do sistema
imune intestinal. Os probióticos estimulam as células dendríticas (DCs) a produzirem
citocinas que diferenciam as células T em Th1, Th2, Th17 ou Treg. As
ectonucleotidases são enzimas capazes de hidrolisar nucleotídeos di e trifosfatados.
Essas ectoenzimas são importantes para a modulação da resposta imune intestinal
devido à hidrólise de ATP, que quando aumentada no meio extracelular é considerada
uma molécula inflamatória. Por outro lado o acúmulo de adenosina, através da
hidrólise de ATP em AMP, pela 5’-nucleotidase, estimula a resposta anti-inflamatória.
O objetivo do trabalho foi relacionar a atividade ectonucleotidásica de diferentes
linhagens de Lactobacillus com a capacidade de ativação de DCs e a produção de
citocinas. Os Lactobacillus foram incubados com ATP, ADP ou AMP e os níveis de
hidrólise foram avaliados através da liberação de fosfato inorgânico (Pi). Demonstrouse
que os lactobacilos hidrolisam ATP diferentemente, dependendo da linhagem,
sendo que Lactobacillus mali L.11 e Lactobacillus acidophilus L.36 apresentaram
maior capacidade de hidrólise de ATP. Não foi observado hidrólise significativa de
ADP e AMP. Ao agruparmos as linhagens com e sem atividade, foi possível verificar o
aumento significativo da atividade de L. mali L.11 e L. acidophilus L.36 quando
comparado às linhagens que apresentaram pouca atividade ectonucleotidasica. Além
disso, as DCs foram estimuladas com os lactobacilos, por 20 horas e os resultados
dessa estimulação demonstrou que as linhagens não alteraram. Além disso, as DCs
foram estimuladas com Lactobacillus, por 20 horas e não demonstrou alteraração na
expressão de CD40, CD86 e MHCII. Por fim observou-se a produção de citocinas
após a estimulação por 20 horas. Houve um aumento de IL-6, TNF- α e IL-10 em
relação às DCs não estimuladas. De maneira interessante, IL-12 teve a produção
aumentada quando da estimulação de DC com L. mali L.10, que também mostrou
baixa capacidade de hidrolisar ATP. Curiosamente, L. mali L.11 e L. acidophilus L.36
mostraram uma diminuição significativa da produção de IL-12, o que pode está
relacionado com a alta capacidade de hidrólise dessas cepas. Conclui-se então que
Lactobacillus possuem capacidade ectonucleotidásica diferenciada e que a hidrólise
de ATP pode ser relacionada com a produção de citocinas por DCs e,
consequentemente, com a diferenciação de linfócitos T durante a resposta imune
intestinal. __________________________________________________________________________________________________________________________ / ABSTRACT : Probiotics are live microorganisms which, when administered properly, add health
benefits to the host. Several species of the genus Lactobacillus have proven probiotic
effect and are important modulators of the intestinal immune system. Probiotics
stimulate dendritic cells (DCs) to produce cytokines that T cells differentiate into Th1,
Th2, Treg and Th17. The ectonucleotidases are enzymes that hydrolyze nucleotide diand
triphosphates. These ectoenzymes are important for the modulation of intestinal
immune response due to ATP hydrolysis, which when raised in the extracellular
medium is considered an inflammatory molecule. On the other hand, the accumulation
of adenosine by hydrolysis of ATP to AMP by 5'-nucleotidase, stimulates antiinflammatory
response. The objective was to relate the ectonucleotidásica activity of
different strains of Lactobacillus with the ability of DCs activation and cytokine
production. Lactobacilli were incubated with ATP, ADP or AMP and hydrolysis levels
were assessed by the release of inorganic phosphate (Pi). It has been shown that
lactobacilli hydrolyze ATP differently, depending on the strain, and Lactobacillus
acidophilus and Lactobacillus mali L.11 L.36 showed greater capacity for ATP
hydrolysis. No significant hydrolysis of ADP and AMP was observed. When we group
the strains with and without activity, we observed a significant increase in activity of L.
acidophilus and L. mali L.11 L.36 compared to strains that showed little
ectonucleotidasica activity. Furthermore, DCs were stimulated with lactobacilli for 20
hours and the results of stimulation showed that the strains do not change.
Furthermore, DCs were stimulated with Lactobacillus for 20 hours and showed no
alteraração expression of CD40, CD86 and MHCII. Finally the observed production of
cytokines after stimulation for 20 hours. There was an increase in IL-6, TNF-α and IL-
10 compared to non-stimulated DCs. Interestingly, IL-12 production was increased
when the stimulation of DC with L. mali l.10, which showed poor ability to hydrolyze
ATP. Interestingly, L. acidophilus and L. mali L.11 L.36 showed a significant decrease
of IL-12, which can associated with high hydrolysis capability of these strains. It is
concluded that Lactobacillus ectonucleotidásica have different capabilities and the
hydrolysis of ATP may be related cytokine production by DCs and therefore with the
differentiation of T lymphocytes in the intestinal immune response.
Keywords: Probiotics,
| Identifer | oai:union.ndltd.org:IBICT/oai:localhost:123456789/6350 |
| Date | January 2014 |
| Creators | Pereira, Hellem Crhistina Damazo |
| Contributors | Afonso, Luiz Carlos Crocco, Neumann, Elisabeth |
| Source Sets | IBICT Brazilian ETDs |
| Language | Portuguese |
| Detected Language | English |
| Type | info:eu-repo/semantics/publishedVersion, info:eu-repo/semantics/masterThesis |
| Source | reponame:Repositório Institucional da UFOP, instname:Universidade Federal de Ouro Preto, instacron:UFOP |
| Rights | Autorização concedida ao Repositório Institucional da UFOP pelo autor, 29/02/2016, com as seguintes condições: disponível sob Licença Creative Commons 4.0, que permite copiar, distribuir e transmitir o trabalho, desde que seja citado o autor e licenciante. Não permite o uso para fins comerciais nem a adaptação desta., info:eu-repo/semantics/openAccess |
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