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Previous issue date: 2016-02-29 / FACEPE / Devido à crescente resistência de isolados clínicos de Staphylococcus spp. a
antimicrobianos e a consequente diminuição de opções terapêuticas eficazes, este
estudo investigou a influência in vitro de sub-Concentrações Inibitórias Mínimas
(sub-CIM) de oxacilina e tigeciclina, isoladamente e em combinação, no crescimento
bacteriano e na expressão dos genes mecA, ica e tst em isolados clínicos de
Staphylococcus spp.Para realização da primeira etapa deste estudo 45
isolados,identificados quanto a espécie de Staphylococcus spp. e susceptibilidade
pelo Vitek2, foram obtidos de dois hospitais públicos de Recife-PE e avaliados pelas
técnicas de MALDI-TOF MS e sequenciamento do rDNA 16S para confirmação das
espécies bacterianas. A relação clonal dos isolados de Staphylococcus spp. foi
determinada pela análise da Região Intergênica 16S-23S para posterior
determinação do tipo de SCCmec e do perfil de virulência. O MALDI-TOF MS e
sequenciamento do 16S se mostraram mais concordantes na identificação das
espécies bacterianas quando comparadas ao Vitek2, sendo identificados isolados de
Staphylococcus aureus, S. epidermidis, S.hominis, S. haemolyticus e S.
saprophyticus. Trinta e um ribotipos foram determinados, demonstrando grande
variabilidade genética. Os ribotipos foram encontrados dispersos nos diferentes
setores dos dois hospitais investigados. A maioria dos isolados apresentaram
SCCmec tipo IV (51%), seguido pelo tipo III (26%), tipo II (16%) e tipo V (7%). Foi
possível encontrar nove perfis de virulência, onde o gene luk foi observado em 80%
dos isolados, seguido de 51% para o gene ica, 35,5% para o hlg e 33,3% para o
tstratificando a crescente evidência da presença de isolados tradicionalmente
comunitários no ambiente hospitalar. Na segunda fase do estudo quatro isolados
clínicos com diferentes tipos de SCCmece baixa relação clonal foram analisados in
vitro para a determinação da CIM frente a oxacilina e tigeciclina. A influência in vitro
destes antimicrobianos no crescimento bacteriano foi avaliada isoladamente e em
associação, assim como a expressão dos genes mecA, ica e tst por RT-qPCR. O
ensaioin vitro dos diferentes isolados de Staphylococcus spp. frente a tigeciclina
associada à oxacilina resultou em inibição de crescimento bacteriano maior em
relação a utilização isolada dos antimicrobianos, além de não influenciar ou diminuir
a expressão de todos os genes analisados, dando suporte à ideia de que o uso
associado da tigeciclina e oxacilina no tratamento de infecções por isolados MRS
portadores dos genes tst e ica possivelmente poderiam promover benefícios na
modulação destes genes. / Due to the increasing resistance of clinical isolates of Staphylococcus spp. to
antimicrobial and the consequent decrease of effective therapeutic options, this study
determined the in vitro influence of sub-minimum inhibitory concentrations (sub-MIC)
of oxacillin and tigecycline, alone and in combination, on bacterial growth and
expression ofvirulence genes in clinical isolates of Staphylococcus spp. To perform
the first stage of this study 45 isolates of Staphylococcus sppwere obtained from two
public hospitals of Recife-PE and evaluated by MALDI-TOF MS techniques and 16S
sequencing for confirmation of bacterial species. The clonal profile Staphylococcus
spp. isolates was determined by PCR-Ribotyping for subsequent determination of the
type of SCCmec and virulence profile. The MALDI-TOF MS and sequencing of 16S
were more effective in the identification of bacterial species when compared to
Vitek2, being identified Staphylococcus aureus, S. epidermidis, S.hominis, S.
haemolyticus e S. saprophyticus.Thirty-one ribotypes could be determined among
the strains tested, with most harboring the SCCmec type IV (51%), followed by type
III (26%), type II (16%) and type V (7%).%). 80% of the isolates presented the luk
gene, 51% icaAD, 35.5% hlg and 33.3% tst. These results demonstrate a wide
variability and dispersion of the isolates analysed, in different sectors of the hospitals
confirming the growing evidence of the presence of traditionally community isolates
in the hospital environment. In the second phase of the study, four clinical isolates
were selected according to different types of SCCmec were analyzed in vitro to
determine the MIC front oxacillin and tigecycline. The antimicrobial effect in vitro tests
on bacterial growth was evaluated separately and in combination, as well as the
expression of the mecA, ica and tst genes by RT-qPCR. Subjecting the different
Staphylococcus spp. isolates in vitro to tigecycline in association with oxacillin
resulted in inhibition of bacterial growth that was more potent than subjecting them to
the antimicrobials separately, and this also did not influence or decrease the
expression of any of the genes analyzed. The present study supports the idea that
the associated use of tigecycline and oxacillin for treating infections caused by
methicillin-resistant Staphylococcus that is positive for tst and ica could promote
possible benefits in modulating these genes.
| Identifer | oai:union.ndltd.org:IBICT/oai:repositorio.ufpe.br:123456789/17556 |
| Date | 29 February 2016 |
| Creators | MANGUEIRA, Eduarda Vanessa Cavalcante |
| Contributors | http://lattes.cnpq.br/7464633588638483, SANTOS, Fábio André Brayner dos, LEAL, Nilma Cintra |
| Publisher | Universidade Federal de Pernambuco, Programa de Pos Graduacao em Medicina Tropical, UFPE, Brasil |
| Source Sets | IBICT Brazilian ETDs |
| Language | Breton |
| Detected Language | English |
| Type | info:eu-repo/semantics/publishedVersion, info:eu-repo/semantics/doctoralThesis |
| Source | reponame:Repositório Institucional da UFPE, instname:Universidade Federal de Pernambuco, instacron:UFPE |
| Rights | Attribution-NonCommercial-NoDerivs 3.0 Brazil, http://creativecommons.org/licenses/by-nc-nd/3.0/br/, info:eu-repo/semantics/openAccess |
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