PINHEIRO, R. S. P. Efeito anti-inflamatório e antinociceptivo de proteínas isoladas do látex de Plumeria rubra L. em modelo experimental de artrite induzida por zymosan em camundongos. 2017. 127 f. Tese (Doutorado em Farmacologia) - Faculdade de Medicina, Universidade Federal do Ceará, Fortaleza, 2017. / Submitted by Farmacologia Pós-Graduação (posgfarmacologia@gmail.com) on 2017-09-05T13:25:36Z
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Previous issue date: 2017-07-19 / The Plumeria rubra is a laticifer plant of family Apocynaceae, popularly known as “Jasmim”. It is widely distributed in tropical and subtropical regions, including Brazil. Some studies show that the latex of P. rubra has gastric antiulcer effect,antioxidant and vasodilator activity. The aim of this study was to evaluate the effect of isolated proteins from Plumeria rubra latex (PrLP) in arthritis induced by zymosan (Zy).
METHODOLOGY: This study was approved by the Ethics Committee on Animal Research of the UFC-CEPA (82/14). Arthritis was induced in female Swiss mice (n = 6) by injection of 0.1 mg Zy intra-articular. After 1 hour of Zy injecton, the animals were treated with saline or PrLP (12.5, 25, 50 and 100 mg/kg i.v.); the dexamethasone (2 mg/kg i.v.) was administered thirty minutes before Zy treatment. After six hours of arthritis induction, the animals were euthanized, the joint washing carried and collected for leukocyte count, determination of the myeloperoxidase (MPO) activity and inflammatory mediators (NO, TNF-α, IL-1β, IL-6 and IL-10). The edema was evaluated by measuring the diameter articular and the vascular permeability through extravasation evans blue. In addition, immunohistochemistry was performed for cyclooxygenase 2 (COX-2), NOSi, NfkB e TNF- α in the tissue.The mechanical hypernociception was induced by intra-articular injecton of Zy or intra-plantar injection of carrageenan or prostaglandin E2.The effect antinociceptive of PrLP was evaluated in the absence and in the presence of Naloxone (1 mg / kg; i.v.) and L-arginine (1g / kg; i.p.), which were administered 30 minutes before of the administration of PrLP. The statistical analysis were performed using the ANOVA/ Newman Keuls or Kruskal Wallis/Dunn post hoc test. Values of p <0.05 was considered statistically significant.
RESULTS PrLP at doses of 25, 50 and 100 mg /kg iv reduced the leukocyte count (899.8 x 106 / ml ± 148; 1225 x 106 / ml ± 89.59 and 890 x 106 / ml ± 165.7, respectively), the neutrophil count (860.3 ± 97.57; 1108 ± 127.6 and 908.7 ± 159.9, respectively) and the MPO activity (12.1 ± 1.3;14.3 ± 0.6 and 8.9 ± 3.5 UMPO / ml, respectively). PrLP (25 mg/kg) modulated the concentrations of the inflammatory mediators such as NO, IL-1β, TNF-α and IL-6 (71.84 ± 9.1 mM;, 4569 ± 712.5;, 1409 ± 221.6 and 847.3 ± 260.4 pg/ml respectively) when compared to the saline group. PrLP (25 mg/kg). Reduced the edema, which significantly reduced joint diameter in the third (0.89 ± 0.001 mm) and in the sixth hour (0.99 ± 0.02 mm) and also reduced the extravasation of evans blue to the joint (40.46 ± 3.6 μg/g). In the tissue histopathological study, PrLP (25 mg / kg) significantly reduced the inflammatory infiltrate (with reduction in the neutrophil count), edema, synovial membrane involvement and haemorrhage. PrLP (25 mg / kg) was also able to reduces the immunohistochemistry labeling for COX-2, NOSi, TNF-α and NFkB.
In mechanical hypernociception, PrLP (25 mg / kg) significantly reduced both the third (0.86 ± 1.3) and the sixth hour (1.08 ± 2.3), and this effect was reversed by the administration of L-arginine (1g / kg, ip) and naloxone (1mg / kg, iv). In addition, PrLP (25 mg / kg) significantly reduced carrageenin-induced plantar hypernociception in the third (1.74 ± 0.4) and fifth hour (1.5 ± 0.4) and prostaglandin-induced hypernociception in the third hour (1.4 ± 0.4).
CONCLUSION: PrLP has antinociceptive and anti-inflammatory activity in the model of arthritis induced by Zy. The effect seems to be related to the decreased migration of neutrophils and the release of inflammatory mediators, reducing damage to the synovial membrane and hypernociception. / Plumeria rubra L. é uma planta laticífera que pertence à família Apocynaceae. Conhecida popularmente como jasmim, jasmim-manga, frangipani ou árvore-pagode, é originária da América Central e encontra-se amplamente distribuída pelas regiões de clima tropical do mundo, inclusive no Brasil. Estudos com a fração do látex de Plumeria rubra demonstraram apresentar efeito antiulcera gástrica, antioxidante e atividade vasodilatadora. O presente trabalho teve como objetivo avaliar o efeito da fração proteica isolada do látex de Plumeria rubra (PrLP) na artrite induzida por zymosan (Zy) em camundongos.
METODOLOGIA: Esse estudo foi aprovado na comissão de ética em pesquisa animal da Universidade Federal do Ceará (n°82/2014). A artrite foi induzida em camundongos fêmeas swiss (n=6) através da administração de 0,1 mg Zymosan (Zy) i.a. Os animais foram tratados com salina ou dexametasona (2 mg/kg e.v.) meia hora antes ou com PrLP (12,5; 25, 50 e 100mg/kg e.v.) 1 hora após o Zy. Seis horas após a indução os animais foram eutanasiados e foi feita a coleta do lavado articular para contagem total e diferencial de leucócitos, atividade da mieloperoxidase (MPO) e concentração de mediadores inflamatórios (NO, TNF-α, IL-1β, IL-6 e IL-10). O edema foi avaliado pela medição do diâmetro transversal da articulação e pela avaliação da permeabilidade vascular com azul de evans. Adicionalmente foi avaliado o efeito de PrLP sobre processo inflamatório na membrana sinovial e sobre a expressão de NOSi, COX, NFkB e TNF- α no tecido. A hipernocicepção mecânica foi estudada utilizando uma versão eletrônica (VonFrey) e foi investigada tanto na hipernocicepção articular induzida por zymosan quanto na plantar induzida por carragenina e prostaglandina. O mecanismo do efeito antinociceptivo de PrLP foi investigado fazendo uma modulação com Naloxona (1 mg/kg; e.v.) ou L-arginina (1g/kg; i.p.) 30 minutos antes da administração de PrLP. Para as análises estatísticas foi utilizado o teste ANOVA/Newman Keuls ou Kruskal Wallis/Dunns; p <0,05 foi considerado significante.
RESULTADOS: O tratamento com PrLP nas doses de 25, 50 e 100 mg/kg e.v. reduziu de forma significativa a contagem de leucócitos (899,8 x 106/ml ± 148; 1225 x 106/ml ± 89,59; 890 x 106/ml ± 165,7, respectivamente), a contagem de neutrófilos (860,3±97,57; 1108±127,6 e 908,7±159,9, respectivamente) e a concentração de MPO (12,1±1,3; 14,3±0,6; 8,9±3,5 UMPO/ml respectivamente). PrLP na dose de 25mg/kg reduziu as concentrações de mediadores inflamatórios tais como NO, IL-1β, TNF-α e IL-6 (71,84±9,1 mM; 4569±712,5; 1409±221,6 e 847,3±260,4 pg/ml respectivamente) quando comparados ao grupo controle. Também foi observado uma redução do edema pela administração de PrLP 25 mg/kg, esse tratamento reduziu de forma significativa o diâmetro articular na terceira (0,89 ± 0,001 mm) e na sexta hora (0,99±0,02 mm) e também reduziu o extravasamento de azul de evans para a articulação (40,46±3,6 µg/g). No ensaio histopatológico do tecido observou-se redução significativa do infiltrado inflamatório (com redução na contagem de neutrófilos), edema, comprometimento da membrana sinovial e hemorragia nos animais que receberam PrLP (25 mg/kg) e na imunohistoquímica houve redução significativa na expressão de COX-2, NOSi, TNF-α e NFkB. Na hipernocicepção mecânica articular o tratamento com PrLP (25 mg/kg) reduziu de forma significativa tanto na terceira (0,86 ± 1,3) como na sexta hora (1,08±2,3) e esse efeito foi revertido pela administração prévia de L-arginina (1g/kg, i.p.) e de naloxona (1mg/kg; e.v.). Adicionalmente, PrLP (25 mg/kg) reduziu de forma significativa a hipernocicepção plantar induzida por carragenina na terceira (1,74±0,4) e na quinta hora (1,5±0,4) e a hipernocicepção induzida por prostaglandina na terceira hora (1,4±0,4).
CONCLUSÃO: PrLP apresenta atividade antinociceptiva e anti-inflamatória no modelo de artrite induzida por zymosan. O efeito parece estar relacionado com a diminuição da migração de neutrófilos e da liberação de mediadores inflamatórios, reduzindo o dano na membrana sinovial e a hipernocicepção.
| Identifer | oai:union.ndltd.org:IBICT/oai:www.repositorio.ufc.br:riufc/25488 |
| Date | 19 July 2017 |
| Creators | Pinheiro, Rachel Sindeaux Paiva |
| Contributors | Alencar, Nylane Maria Nunes de |
| Source Sets | IBICT Brazilian ETDs |
| Language | Portuguese |
| Detected Language | English |
| Type | info:eu-repo/semantics/publishedVersion, info:eu-repo/semantics/doctoralThesis |
| Source | reponame:Repositório Institucional da UFC, instname:Universidade Federal do Ceará, instacron:UFC |
| Rights | info:eu-repo/semantics/openAccess |
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