Orientadora: Profa Dra Fernanda Dias da Silva / Dissertação (mestrado) - Universidade Federal do ABC, Programa de Pós-Graduação em Biotecnociência, 2016. / A microplusina e um peptideo antimicrobiano (PAM), quelante de cobre e ferro,
presente no carrapato bovino Riphicephalus microplus. Possui estrutura globular,
arranjada em cinco ¿¿-helices e e rica em residuos de cisteina e histidina. As histidinas
His-2 e His-74 estao entre os possiveis residuos de aminoacidos envolvidos na formacao
do sitio de ligacao ao cobre, de acordo com dados de RMN. Seu amplo espectro de
atividade contra bacterias Gram-positivas e fungos pode estar associado a sua capacidade
de quelar cobre e estudos com Micrococcus luteus e Cryptococcus neoformans,
mostraram que a adicao de cobre ao meio anula o seu efeito bacteriostatico e fungistatico,
respectivamente. A microplusina ao ligar cobre, possivelmente, diminui a disponibilidade
deste metal, o que pode afetar a atividade de enzimas dependentes de cobre. Culturas de
M. luteus e C. neoformans tratadas com o peptideo apresentaram uma reducao no seu
consumo de oxigenio e dados sugerem que a deplecao de cobre pode ter afetado a
atividade de heme cobre oxidases pertencentes a uma das vias da cadeia transportadora
de eletrons. A microplusina tambem interfere na sintese de melanina de C. neoformans,
o que pode estar relacionado a uma diminuicao da atividade da lacase, uma enzima cobre
dependente. Esses dados indicam o enorme potencial da microplusina como farmaco e
estudos sobre quais aminoacidos de sua sequencia sao importantes para manutencao de
sua estrutura e atividades tornam-se essenciais. Sendo assim, o presente projeto propos
como objetivo principal avaliar o efeito da substituicao das histidinas amino-terminais
His-1 e His-2 por residuos de alanina, utilizando-se para isso, a expressao recombinante
de duas variantes da microplusina (MPmH1A e MPmH2A). Os resultados
demonstraram o surgimento inesperado de mais de uma molecula com atividade
antimicrobiana para a variante MPmH1A, indicando que mais estudos serao necessarios
para avaliar a atividade destes peptideos. Por sua vez a variante MPmH2A teve sua
atividade antimicrobiana mantida mesmo sem a presenca do residuo de histidina 2 (His-
2). Porem em ambas nao foi possivel detectar a atividade quelante de cobre, indicando
assim que atividade antimicrobiana pode ter ocorrido por outras vias, bem como que o
residuo de histidina 2 pode ser essencial para a atividade quelante de cobre. / Microplusin is an antimicrobial and chelating peptide (AMP) for both copper II
and iron II, present in the cattle tick Riphicephalus microplus. Its structure is globular,
with five alpha helices and rich in cysteine and histidine residues. The histidines His-2
and His-74 are the possible amino acids involved in the copper-binding site. Its broad
activity spectrum against Gram-positive bacteria and fungi may be associated with its
ability to chelate copper and studies with Micrococcus luteus and Cryptococcus
meoformans have shown the copper addition in the media abrogate its bacteriostatic and
fungistatic effect, respectively. The binding of microplusin to copper, possibly decreases
the metal availability in the media, which may affect the activity of copper dependent
enzymes. In fact, M. luteus and C. neoformans cultures treated with microplusin, shown
a reduction in their oxygen consumption and data suggest the copper depletion may have
affected the activity of heme copper oxidases, belonging to one of the transport chain of
electrons.This peptide also affects the melanization of C. neoformans. The melanization
reduction is related to a lacase activity decrease, a copper dependent enzyme. Microplusin
activities indicate its huge potential as a promising therapeutic and studies about which
amino acids in its sequence are important to its structure maintenance and activities
become essential. Therefore, the main objective of this project was evaluate the effect of
amino-terminal histidines His-1 e His-2 substitution for alanine residues, using, for that,
a recombinant expression of two microplusin variants (MPmH1A e MPmH2A). The
results showed the unexpected onset of more than one molecule with antimicrobial
activity for MPmH1A variant, indicating that more studies are necessary to evaluate the
activity of these peptides. In turn, the MPmH2A variant had its antimicrobial activity
maintained even without the presence of histidine residue 2 (His-2). However in both has
not been possible detect the chelating activity of copper, indicating that antimicrobial
activity may have happened by other means well as the residue of histidine 2 can be
essential for the chelating activity of copper.
| Identifer | oai:union.ndltd.org:IBICT/oai:BDTD:102485 |
| Date | January 2016 |
| Creators | Lima, Julia Aparecida da Siva |
| Contributors | Silva, Fernanda Dias da, Silva, Carlos Alberto da, Esteves, Eliane Virgínia da Silva |
| Source Sets | IBICT Brazilian ETDs |
| Language | Portuguese |
| Detected Language | Portuguese |
| Type | info:eu-repo/semantics/publishedVersion, info:eu-repo/semantics/masterThesis |
| Format | application/pdf, 78 f. : il. |
| Source | reponame:Repositório Institucional da UFABC, instname:Universidade Federal do ABC, instacron:UFABC |
| Rights | info:eu-repo/semantics/openAccess |
| Relation | http://biblioteca.ufabc.edu.br/index.php?codigo_sophia=102485&midiaext=72686, Cover: http://biblioteca.ufabc.edu.brphp/capa.php?obra=102485 |
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