Conselho Nacional de Desenvolvimento Científico e Tecnológico / The role of local factors in follicular selection in mammals is not fully understood. The aim of
the present study was to identify local factors, receptors and intracellular signaling pathways involved
in bovine dominant follicle selection and subordinate follicles atresia. In the first study, the pattern of
mRNA expression and function of FGF10 and its receptor FGFR2b was evaluated during bovine
follicle deviation. FGF10 and FGFR2b were significantly more expressed in theca and granulosa cells
retrieved from subordinate follicles, respectively. Intrafollicular FGF10 treatment in the larger follicle
dose-dependently inhibited follicle growth and significantly reduced estradiol secretion. In granulosa
cells, FGF10 treatment decreased CYP19A1 and cyclin D2 mRNA expression whereas FGFR2b
tended to be more expressed after treatment. In theca cells, a significant increase in FGF10 expression
was observed in FGF10-treated follicles. In a second study, BMPRs, BMP15 and GDF9 expression
was evaluated in cows ovariectomized when the size of the largest and second largest follicle did not
have a significant difference (D2), had slight difference (D3) or marked difference (D4). At day 2 of
follicular wave, it was observed a significant increase in BMPR1A expression whereas BMPR-2 and -
1B tended to be more expressed in future subordinate follicles. At day 3, when dominant and
subordinate follicles are reliably identified, BMPR-2 and 1B were more expressed in subordinate
follicles. At day 4, BMPR1B (mRNA and protein) was significantly more expressed in granulosa cells
from atretic follicles. The increased BMPR1B expression during atresia was confirmed in granulosa
cells from follicles induced to atresia with FGF10 or estradiol receptor antagonist treatment. Similar
levels of BMP15 and GDF9 proteins were observed in follicular fluid from dominant and subordinate
follicles. In a third study, we aimed to identify intracellular signaling pathways differentially activated
in granulosa cells during deviation. Phosphorylated MAPK was more abundant in the future dominant
follicle, but did not differ between follicles at the expected moment and after follicular deviation.
Subordinate follicles phosphorylated STAT3 levels tended to increase at day 3 and were significantly
greater at day 4 in comparison to dominant follicles. In conclusion, present results suggest that
decreased FGF10 and FGFR2b expression allows dominant follicle growth and differentiation
whereas increased FGF10 signaling in the subordinate follicle induces atresia. The patterns of BMPR-
2, -1B and -1A indicate that these receptors play roles during follicle deviation. Phosphorylated
MAPK abundance is an early marker of follicle dominance, but is not differentially regulated during
and after deviation. The functional status of STAT3 suggests that this pathway is involved in
granulosa cell death. / O controle local da seleção folicular em mamíferos ainda é pouco compreendido. O objetivo
do presente estudo foi identificar fatores locais, receptores e rotas de sinalização envolvidas na seleção
do folículo dominante e atresia dos subordinados em bovinos. Em um primeiro estudo, avaliou-se a
regulação e função do FGF10 e do seu receptor FGFR2b durante a divergência folicular. A expressão
de FGF10 e FGFR2b foi significativamente maior nas células da teca e granulosa, respectivamente,
provenientes dos folículos subordinados. A injeção intrafolicular de FGF10 inibiu o crescimento
folicular de maneira dose dependente e reduziu significativamente a síntese de estradiol. Nas células
da granulosa, a injeção de FGF10 diminuiu a expressão de RNAm de CYP19A1 e ciclina D2,
enquanto que uma tendência de aumento da expressão do receptor FGFR2b foi observada. Nas células
da teca, um aumento significativo na expressão de FGF10 foi observado nos folículos tratados com
FGF10. Em um segundo estudo, o padrão de expressão dos receptores de BMPs e das proteínas
BMP15 e GDF9 foram avaliados em vacas ovariectomizadas em diferenes dias em relação ao inicio da
onda folicular, comparando os dois maiores folículos antes (dia 2), durante (dia 3) ou após a
divergência folícular (dia 4). No dia 2 da onda folicular, foi observada maior expressão do receptor
BMPR-1A e tendências a maior expressão dos receptores BMPR-2 e -1B nos futuros folículos
subordinados. No dia 3, quando os folículos dominantes e subordinados são identificados, a expressão
de BMPR-1B e -2 foi maior nos folículos subordinados. No dia 4, o receptor BMPR1B (RNAm e
proteína) foi significativamente mais expresso nas células da granulosa de folículos atrésicos. O
aumento da expressão do BMPR1B durante a atresia folicular foi confirmado nas células da granulosa
de folículos induzidos à atresia através do tratamento com FGF10 ou inibidor dos receptores de
estradiol. A abundância de BMP15 e GDF9 no fluído folicular não diferiu entre folículos dominantes e
subordinados. Em um terceiro estudo, buscou-se identificar rotas de sinalização diferentemente ativas
nas células da granulosa durante a divergência. Os níveis de MAPK fosforilada foram
significativamente superiores nos futuros folículos dominantes (dia 2), mas não diferiram entre os dois
maiores folículos durante ou após a divergência. Folículos subordinados apresentaram maiores níveis
de STAT3 fosforilada em relação aos seus respectivos dominantes em todos os pares de folículos
coletados, sendo observado um aumento significativo em folículos atrésicos coletados no dia 4. Em
conclusão, os resultados sugerem que a expressão reduzida de FGF10 e do receptor FGFR2b
possibilitam o crescimento e diferenciação do folículo dominante, enquanto que o aumento da
sinalização do FGF10 no folículo subordinado está associado com a atresia. O perfil de expressão dos
receptores BMPR-2, -1B e -1A indica que os mesmos apresentam funções na regulação da divergência
folicular em bovinos. A fosforilação da MAPK é um marcador inicial de dominância folicular, mas
não é diferentemente regulada durante e após a divergência, enquanto que o padrão de ativação da
STAT3 sugere que essa via está envolvida na morte das células da granulosa.
| Identifer | oai:union.ndltd.org:IBICT/oai:repositorio.ufsm.br:1/4074 |
| Date | 17 August 2012 |
| Creators | Gasperin, Bernardo Garziera |
| Contributors | Gonçalves, Paulo Bayard Dias, Schoenau, William, Comim, Fabio Vasconcellos, Costa, Luís Fabiano Santos da, Mesquita, Fernando Silveira |
| Publisher | Universidade Federal de Santa Maria, Programa de Pós-Graduação em Medicina Veterinária, UFSM, BR, Medicina Veterinária |
| Source Sets | IBICT Brazilian ETDs |
| Language | Portuguese |
| Detected Language | Portuguese |
| Type | info:eu-repo/semantics/publishedVersion, info:eu-repo/semantics/doctoralThesis |
| Format | application/pdf |
| Source | reponame:Repositório Institucional da UFSM, instname:Universidade Federal de Santa Maria, instacron:UFSM |
| Rights | info:eu-repo/semantics/openAccess |
| Relation | 500500000007, 400, 300, 300, 300, 300, 300, 300, fcd33ccc-f08d-428c-b7da-9d3757cf0a96, 030d815b-50d4-446b-9ff4-cea7cd8987f1, 1c8df021-4c5c-4d5a-b661-07a806ffe391, 1251088f-87d7-4b52-baa6-8e5739b3bf79, c4134c6a-7f66-40a5-a3c6-408ee424689c, 524361ed-01c9-4c08-b4d9-53739d37ebd2 |
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