Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior / Prostate cancer is the second cause of death in men by tumor, surpassed
only by lung cancer. Its occurrence is estimated to be 51 to 100,000 cases per
year. The increasing incidence levels observed may be partially explained by the
evolution of diagnostic methods, quality of information systems and longer life
expectancy. The identification of new cancer specific antigens and genes may
provide important biomarkers for diagnosis and instruments for the development of
new treatment strategies. The Phage Display technology may be able to select
peptides with different aims, such as the discovery of mimetic antigens that are
recognized by specific antibodies. Selected peptides may become potential tumor
biomarkers for prostate cancer diagnosis. It could be possible to use this
technology to identify proteins that are able to detect cancer earlier than the
conventional methods, to predict disease staging, and to develop new treatment
strategies based on more efficient biological targets.
The immunization of SPF (specific pathogen free) male chickens with total
proteins of tissues of prostate cancer has generated polyclonal specific IgY sera,
which were used in biopanning procedures against random peptide libraries.
Selected phages were characterized by sequencing and bioinformatics, and
subsequently by dot immunoblotting and ELISA to validate their specificity.
Selected peptides were mimotopes of putative proteins involved in the
carcinogenesis process. These peptides were further tested for their possible use
in the immune response diagnostics associated with tumor processes.
In this work, we have also successfully developed a general immunosensor
for diagnostics, performed on an exclusion liquid chromatography system based
on a micro column resin separation, using the selected bacteriophages as carriers
of antigens and antibodies. These phage are coupled to colored latex beads,
which are activated with different chemical groups. The presence of phage in the
process is of fundamental importance, once they favor the formation of the antigen-antibody complex, peptide-protein or peptide-substrate, amplifying the
optical detection during chromatographic separation or by micro-agglutination in
slides for optical microscopy detection. The new technology is practical and
simple, and may also be used for detection of other biomolecules or chemical
substances associated with infectious and genetic diseases, with high precision,
sensitivity, specificity, and rapidity, using low sample volumes and presenting a
low cost. / O câncer de próstata é a segunda causa de óbitos por câncer em homens,
sendo superado apenas pelo câncer de pulmão. A ocorrência estimada é de 51
casos novos para cada 100 mil homens por ano para este tipo de câncer. O
aumento observado nas taxas de incidência pode ser parcialmente justificado pela
evolução dos métodos diagnósticos, pela melhoria na qualidade dos sistemas de
informação do país e pelo aumento na expectativa de vida do brasileiro. A
identificação de novos antígenos ou genes específicos do câncer de próstata
pode prover novos biomarcadores e também fornecer instrumentos para o
desenvolvimento de novas modalidades de tratamento. A tecnologia de Phage
Display é capaz de selecionar peptídeos com diversas finalidades, como
mimetizar antígenos reconhecidos por anticorpos. Peptídeos selecionados por
esta técnica são potenciais marcadores tumorais para o diagnóstico do câncer de
próstata. Por meio desta metodologia pode ser possível identificar proteínas
capazes de detectar a resposta imune contra o tumor mais precocemente do que
os métodos tradicionais, predizer o estadio atual do tumor, além de permitir o
desenvolvimento de tratamentos mais eficientes.
Pela imunização de galos SPF (livre de patógenos específicos) com
proteínas totais de tecidos tumorais da próstata, foram obtidas IgY policlonais
específicas que foram utilizadas no biopanning contra uma biblioteca de
peptídeos recombinantes randômicos. Os fagos selecionados foram
caracterizados por seqüenciamento e subsequentemente testados por dot
immunoblotting e ELISA para validar a especificidade dos mesmos. Selecionou-se
peptídeos que mimetizam proteínas prostáticas, possivelmente proteínas
envolvidas no processo de tumorigênese. Esses peptídeos foram testados quanto
a sua possível utilização no diagnóstico da resposta imune associada a processos
tumorais.
Neste trabalho, também foi desenvolvido com sucesso um imunossensor
para diagnóstico que tem como base de detecção um sistema de cromatografia
líquida por exclusão em micro colunas cromatográficas com bacteriófagos
filamentosos carreadores de antígeno(s) e/ou anticorpo(s), selecionados por
phage display, acoplados microesferas de látex coloridas, ativadas com diferentes
grupamentos químicos. A presença do fago é de grande importância no processo,
pois favorece a formação dos complexos antígeno-anticorpo, peptídeo-proteína
ou peptídeo-substrato, ampliando a detecção ótica durante a separação por
cromatografia ou por microaglutinação em microscopia ótica. A nova tecnologia
pode também ser usada para a detecção de biomoléculas ou substâncias
químicas associados a doenças infecciosas, parasitárias e genéticas, com
rapidez, precisão, sensibilidade e reprodutibilidade, utilizando-se pequenos
volumes de amostras e reagentes, apresentando praticidade e baixos custos. / Doutor em Genética e Bioquímica
| Identifer | oai:union.ndltd.org:IBICT/urn:repox.ist.utl.pt:RI_UFU:oai:repositorio.ufu.br:123456789/15745 |
| Date | 28 November 2006 |
| Creators | Freschi, Ana Paula Peres |
| Contributors | Goulart Filho, Luiz Ricardo, Madurro, Ana Graci Brito, Freitas, Danielo Garcia de, Gimba, Etel Rodrigues Pereira, Arap, Marco Antonio |
| Publisher | Universidade Federal de Uberlândia, Programa de Pós-graduação em Genética e Bioquímica, UFU, BR, Ciências Biológicas |
| Source Sets | IBICT Brazilian ETDs |
| Language | Portuguese |
| Detected Language | Portuguese |
| Type | info:eu-repo/semantics/publishedVersion, info:eu-repo/semantics/doctoralThesis |
| Format | application/pdf |
| Source | reponame:Repositório Institucional da UFU, instname:Universidade Federal de Uberlândia, instacron:UFU |
| Rights | info:eu-repo/semantics/openAccess |
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