The developments of immunoassay methods for the early stage diagnosis of tuberculosis (TB) are described. These went through two different routes, one through flow injection analysis (FIA), and the other using immunochromatography methodology. The design of a simple longwavelength fluorescence detector to serve the above purposes has also been described. The FIA immunoassay methods involve immobilising antibodies on to beads, either directly or through protein A based solid phases. The beads are then packed into a micro-column reactor for incorporation into the FIA system. In this case reactor-bound molecules are eluted from the system by a change of pH, thus limiting the available fluorophores to those that are reasonably fluorescent in acid solution. Sandwich (reagent excess) assays have been investigated. A couple of long wavelength (600-800) fluorophores have been studied. The bead injection option has also been investigated. The immunochromatographic method uses a lateral flow system and a sandwich (two-site) immunometric assay. Capture antibodies are immobilised on a coated membrane matrix at a pre-determined position and the antigen is analysed after binding to a fluorescence-labelled antibody. Both fluorescent latex preparations and conventional fluorescent labels have been used and compared. The strips are simply immersed in a small volume of sample to start the analysis. The chromatographic step is rapid and extremely simple. The fluorescence detector is fitted with a motor-driven sample holder to allow the length of the immunochromatographic strip to be scanned. The detector utilises a diode laser light source, optical filters in the emission beam and a miniaturised photomultiplier. It can be easily modified for the FIA, and can readily be adapted to operate from batteries, so is suitable for field use.

Made available in DSpace on 2014-06-11T19:25:37Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2010-08-09Bitstream added on 2014-06-13T20:33:24Z : No. of bitstreams: 1 nardo_cdd_me_araca.pdf: 584996 bytes, checksum: d064cf941273079c61aca57c35d57979 (MD5) / Fundação de Amparo à Pesquisa do Estado de São Paulo (FAPESP) / A leishmaniose visceral é uma zoonose causada por um protozoário do gênero Leishmania, cujo agente etiológico no Brasil é a Leishmania chagasi. O primeiro caso canino autóctone no Estado de São Paulo, Brasil, foi identificado em 1998 no município de Araçatuba. Desde então a doença vem se espalhando por todo o Estado. O objetivo do presente estudo foi determinar a freqüência de ocorrência de anticorpos anti-Leishmania chagasi em amostras de soro de 584 cães de São José do Rio Preto, São Paulo, área não endêmica para a doença e que dista 160 Km de Araçatuba. Asoroprevalência foi de 0,86% por ELISA e 0,17% por imunocromatografia. Areação de imunofluorescência indireta foi utilizada em 138 amostras eidentificou 1,45% de soropositividade. O ELISA identificou cinco cães positivos,a RIFI dois e um cão foi identificado pela imunocromatografia. Um dos cãespositivo pela RIFI havia sido vacinado para leishmaniose visceral. Dois cãesque foram considerados positivos pelo ELISA indireto foram testados por PCRpara detecção da presença de Leishmania chagasi, mas os resultados foram negativos, não confirmando a doença. Somente um cão foi soropositivo em todos os métodos. Ele apresentava sinais clínicos inespecíficos e foi adquirido pelo proprietário em uma área endêmica para a doença. O diagnóstico não pôde ser confirmado por exame parasitológico direto ou PCR porque o cão morreu antes dos resultados dos exames sorológicos. Os resultados obtidos na população do presente estudo permitem concluir que São José do Rio Preto deve ser, ainda, área não endêmica para leishmaniose visceral canina. / Visceral leishmaniasis is a zoonosis caused by a protozoa of the genus Leishmania, whose etiological agent in Brazil is Leishmania chagasi. The first canine autochthonous case of the disease in the São Paulo State, Brazil, was identified in 1998 in Araçatuba. Since then, the disease has spread to great part of the State. The aim of the present study was to determine the frequency of occurrence of anti-Leishmania chagasi antibodies in serum samples of 584 dogs from São José do Rio Preto, São Paulo, a non endemic area for the disease, 160km far from Araçatuba. Seroprevalence was 0,86% by ELISA and 0,17% by imunochromatography. IFAT, used to test 138 samples, identified 1,45% of seropositivity. ELISA identified five positive dogs, IFAT two, and immunochromatography one. One of the dogs that were considered positive by IFAT has been vaccinated for visceral leishmaniasis. Two dogs that were considered positive by indirect ELISA were tested by PCR for the presence of leishmania chagasi, but the results were negative, not confirming the disease. Only one dog was seropositive by all methods. He presented inespecific clinical signs and was acquired by his owner in an endemic area for the disease. The diagnoses could not be confirmed by direct parasitological test or PCR, because the dog has died before serologic results. The population results achieved in this study allow us to conclude that São José do Rio Preto city still must be a canine visceral leishmaniasis non-endemic area.

Le champignon microscopique Aspergillus fumigatus provoque un nombre important de maladies graves. Parmi elles, l’aspergillose pulmonaire chronique (APC) et l’aspergillose broncho-pulmonaire allergique (ABPA) affectent 3 et 4,8 millions de personnes dans le monde, respectivement.L’APC est très souvent mortelle si elle n’est pas soignée. Elle se développe très souvent après une tuberculose. C’est donc une maladie des pays émergents, où il n’est souvent pas possible de la diagnostiquer à cause du coût trop important des techniques existantes.L’ABPA est une complication très grave de l’asthme et de la mucoviscidose, qui complique fortement ces maladies. Elle est très difficile à diagnostiquer.Notre travail a donc consisté à développer et évaluer deux tests, un test rapide permettant de poser le diagnostic d’APC sans avoir à utiliser de matériel de laboratoire à destination des pays émergents et un western blot qui permet la confirmation du diagnostic d’ABPA. / Aspergillus fumigatus is a microscopic fungus that can cause numerous diseases. Among them, chronic pulmonary aspergillosis (CPA) and allergic broncho-pulmonary aspergilloses (ABPA) affect 3 and 4.8 million people, respectively.CPA is often fatal if left untreated. It is often a complication of tuberculosis and therefore affect low and middle income countries. However, it is difficult to diagnose it in those countries, as the tests are too expansive.ABPA is a severe complication of asthma and cystic fibrosis, worsening those diseases. It’s very hard to diagnose it.Our work was to develop and evaluate two tests, a rapid test for the diagnosis of CPA that does not require laboratory equipment designed for low and middle income countries and a western blot for confirmation of ABPA diagnosis.

Orientador: Mary Marcondes / Banca: Paulo César Ciarlini / Banca: Raimundo Souza Lopes / Resumo: A leishmaniose visceral é uma zoonose causada por um protozoário do gênero Leishmania, cujo agente etiológico no Brasil é a Leishmania chagasi. O primeiro caso canino autóctone no Estado de São Paulo, Brasil, foi identificado em 1998 no município de Araçatuba. Desde então a doença vem se espalhando por todo o Estado. O objetivo do presente estudo foi determinar a freqüência de ocorrência de anticorpos anti-Leishmania chagasi em amostras de soro de 584 cães de São José do Rio Preto, São Paulo, área não endêmica para a doença e que dista 160 Km de Araçatuba. Asoroprevalência foi de 0,86% por ELISA e 0,17% por imunocromatografia. Areação de imunofluorescência indireta foi utilizada em 138 amostras eidentificou 1,45% de soropositividade. O ELISA identificou cinco cães positivos,a RIFI dois e um cão foi identificado pela imunocromatografia. Um dos cãespositivo pela RIFI havia sido vacinado para leishmaniose visceral. Dois cãesque foram considerados positivos pelo ELISA indireto foram testados por PCRpara detecção da presença de Leishmania chagasi, mas os resultados foram negativos, não confirmando a doença. Somente um cão foi soropositivo em todos os métodos. Ele apresentava sinais clínicos inespecíficos e foi adquirido pelo proprietário em uma área endêmica para a doença. O diagnóstico não pôde ser confirmado por exame parasitológico direto ou PCR porque o cão morreu antes dos resultados dos exames sorológicos. Os resultados obtidos na população do presente estudo permitem concluir que São José do Rio Preto deve ser, ainda, área não endêmica para leishmaniose visceral canina. / Abstract: Visceral leishmaniasis is a zoonosis caused by a protozoa of the genus Leishmania, whose etiological agent in Brazil is Leishmania chagasi. The first canine autochthonous case of the disease in the São Paulo State, Brazil, was identified in 1998 in Araçatuba. Since then, the disease has spread to great part of the State. The aim of the present study was to determine the frequency of occurrence of anti-Leishmania chagasi antibodies in serum samples of 584 dogs from São José do Rio Preto, São Paulo, a non endemic area for the disease, 160km far from Araçatuba. Seroprevalence was 0,86% by ELISA and 0,17% by imunochromatography. IFAT, used to test 138 samples, identified 1,45% of seropositivity. ELISA identified five positive dogs, IFAT two, and immunochromatography one. One of the dogs that were considered positive by IFAT has been vaccinated for visceral leishmaniasis. Two dogs that were considered positive by indirect ELISA were tested by PCR for the presence of leishmania chagasi, but the results were negative, not confirming the disease. Only one dog was seropositive by all methods. He presented inespecific clinical signs and was acquired by his owner in an endemic area for the disease. The diagnoses could not be confirmed by direct parasitological test or PCR, because the dog has died before serologic results. The population results achieved in this study allow us to conclude that São José do Rio Preto city still must be a canine visceral leishmaniasis non-endemic area. / Mestre

Submitted by Franciele Moreira (francielemoreyra@gmail.com) on 2018-08-14T13:28:54Z No. of bitstreams: 2 Dissertação - Dienny Rodrigues de Souza - 2018.pdf: 2932501 bytes, checksum: b9f00bbcfe53fb6001ad592bd08bbc63 (MD5) license_rdf: 0 bytes, checksum: d41d8cd98f00b204e9800998ecf8427e (MD5) / Approved for entry into archive by Luciana Ferreira (lucgeral@gmail.com) on 2018-08-16T11:24:33Z (GMT) No. of bitstreams: 2 Dissertação - Dienny Rodrigues de Souza - 2018.pdf: 2932501 bytes, checksum: b9f00bbcfe53fb6001ad592bd08bbc63 (MD5) license_rdf: 0 bytes, checksum: d41d8cd98f00b204e9800998ecf8427e (MD5) / Made available in DSpace on 2018-08-16T11:24:33Z (GMT). No. of bitstreams: 2 Dissertação - Dienny Rodrigues de Souza - 2018.pdf: 2932501 bytes, checksum: b9f00bbcfe53fb6001ad592bd08bbc63 (MD5) license_rdf: 0 bytes, checksum: d41d8cd98f00b204e9800998ecf8427e (MD5) Previous issue date: 2018-07-02 / Conselho Nacional de Pesquisa e Desenvolvimento Científico e Tecnológico - CNPq / Leptospirosis is a zoonosis caused by pathogenic spirochetes belonging to the genus Leptospira. The disease may progress to acute renal failure (Weil's Syndrome) and severe pulmonary haemorrhagic syndrome (SPHS), with a mortality rate of > 50%. The highest incidence of the disease occurs among the poorer populations and is associated with the lack of basic sanitation that gets worse during periods of heavy rainfall and flooding. Rodents and dogs are the main sources of transmission of the disease. Therefore, the identification of infected animals is essential towards eliminating reservoir hosts such as dogs and rodents. Therefore, means allowing the identification of leptospira infection in dogs and rodents is essential to permit control actions, decreasing the infection rate in the environment and consequently helping to prevent disease in humans. The objective of this study was to develop prototypes of lateral flow immunochromatographic tests to aid in the diagnosis and control of leptospirosis. The design used in the prototypes was based on a lateral flow immunochromatographic test for direct detection of specific antibodies using a recombinant antigen, known as rLigBrep, attached to the nitrocellulose membrane test line. As an antigen/antibody binding marker, polyvalent antibodies were conjugated to 40 nm colloidal gold, murine anti-mouse immunoglobulin for the murine, anti-canine (Rockland) and anti-canine IgG (Jackson) for canine prototypes. The canine prototypes were tested with 10 positive samples and 10 negative samples previously confirmed by the MAT and ELISA for canine leptospirosis. The staining intensity was recorded on a scale of 0 to 3. Low concentrations of rLigBrep antigen resulted in weak staining intensity. The results of the murine prototype provided the basic specifications to developed the canine prototypes. In the first canine prototype using Rockland conjugate, 5/10 positive samples presented staining intensity of 1. In the canine prototype using Jackson conjugate, 9/10 positive samples presented staining intensity variation of 1 to 3. The results of negative samples 8/10 presented a tenuous staining intensity on the test line, indicating the necessity to reduce the concentration of antigen and/or conjugate on the test. The studied prototypes were not evaluated to determine sensibility and specificity as they didn’t present similar results obtained on ELISA and MAT. Therefore, it has not been defined if the rLigBrep protein can be utilized in the development of a rapid immunochromatography test for the diagnosis of canine leptospirosis and as a marker of infection in rodents. / A leptospirose é uma zoonose causada por espiroquetas patogênicas do gênero Leptospira. A doença pode progredir para falência renal aguda (Síndrome de Weil) e síndrome hemorrágica pulmonar severa (SPHS), com taxa de mortalidade > 50%. A maior incidência da doença ocorre em populações mais carentes, ligada a deficiências em saneamento básico agravando-se em períodos de chuvas constantes e enchentes. Os roedores e os cães são os principais transmissores da doença. Portanto, meios que permitam a identificação de infecção por lepstospira em cães e roedores é essencial para permitir ações de controle, diminuindo a taxa de infecção no meio ambiente e consequentemente auxiliando na prevenção da doença nos humanos. O objetivo desse estudo foi desenvolver protótipos de testes imunocromatograficos de fluxo lateral para auxiliar no diagnóstico e controle da leptospirose. O desenho utilizado nos protótipos se baseiam em um teste imunocromatográfico de fluxo lateral para detecção direta de anticorpos específicos, utilizando antígeno recombinante rLigBrep fixado na linha teste da membrana de nitrocelulose. Como marcador da ligação antígeno/anticorpo foram utilizado nanoparticulas deouro coloidal de 40 nm conjugados a anti-imunoglobulina murina polivalente para o protótipo murino, anticorpo policlonal anti-IgG F(c) canino da Rockland e anticorpo policlonal anti-IgG F(c) canino da Jackson para os protótipos caninos. Os protótipos caninos foram testados com 10 amostras positivas e 10 amostras negativas confirmadas em MAT e ELISA para leptospirose canina. A intensidade de coloração dos resultados foi registrada em escala entre 0 a 3. As especificações dos materiais e concentrações do protótipo murino serviram de base para o desenvolvimento do protótipo canino. No protótipo canino utilizando conjugado Rockland, 5/10 amostras positivas apresentaram intensidade de coloração 1. Com o protótipo canino, utilizando conjugado Jackson, nas 9/10 amostras positivas a intensidade de coloração variou de 1 a 3. Entre resultados das amostras negativas 8/10 apresentaram uma coloração tênue na linha teste, indicando a necessidade de reduzir a concentração de antígeno e/ou conjugado no teste. Os protótipos estudados não foram avaliados para determinar a sensibilidade e especificidade pois ainda não apresentaram resultados semelhantes aos obtidos em ELISA e MAT. Portanto, não foi definido se proteína rLigBrep pode ser utilizada no desenvolvimento de um teste imunocromatográfico rápido para diagnóstico de leptospirose canina e como marcador de infecção por leptospiras em roedores.

Lymphatic filariasis is a highly impact disease because it can impair workers and make difficult their social life. Early diagnosis is very important for efficacy of the treatment. The aim of this study was to establish, in a defined population, the prevalence of Wuchereria bancrofti, the causative agent of lymphatic filariasis, using rapid immunochromatographic card test and thick blood smears; compare the immunochromatographic test with the thick blood smear parasitological method, and evaluate different parasitological techniques. Inhabitants of lymphatic filariasis endemic area were examined in Maceió, Alagoas State, Northeasth Brazil (at the edge of a channel - Reginaldo Canal - that crosses the city sectors Feitosa, Jacintinho and Pitanguinha). The examination of 3,000 children between 5 and 10 years old by immunochromatographic test revealed 10 (0,33%) antigen-positive, and of 411 individuals older than 10 years of age only one (0,24%) was antigen-positive. By thick blood smear method, in the same endemic area, among 5,261 children examined between 5 and 10 years old 4 (0,076%) microfilaremic were detected, and 25 (0.13%) from 19,875 individuals older than 10 years of age were found to be microfilaraemic. The parasite antigen assay using rapid immunochromatographic for diagnosis made possible to carry out tests during daytime, in opposition of the traditional thick blood smears method. Comparing the results from immunochromatographic test and thick smears, a increased ability for parasite detection by the immunological method was observed when children between 5-10 years old were examined, being odds relative 4.4 (I.C. 95% = 1.3 - 16.6). However, with individuals older than 10 years of age, no significant difference on parasites detection ability between these techniques was observed. All antigen-positive individuals by immunochromatographic test were examined by membrane blood filtration and none of them were microfilaraemic. Positive individuals by immunochromatographic test and thick blood smears were also positive when submitted to the enzyme-linked immunosorbent assay. The enzyme-linked immunosorbent assay was better than immunochromatographic test in detected W. bancrofti antigen. From the results of immunochromatographic test with children between 5 and 10 years old (age group preconized by WHO to verify active transmission of lymphatic filariasis) it was possible to show a very low prevalence of parasitism in the delimited area, meaning that in a short time Maceió can be free from lymphatic filariasis transmission / Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior / A filariose linfática é uma doença de grande impacto, pois pode incapacitar seus portadores para o trabalho e dificultar seu convívio social, sendo de grande importância o diagnóstico ainda na fase inicial para que o tratamento seja eficaz. O objetivo do presente trabalho foi identificar em população definida, a prevalência de Wuchereria bancrofti, causadora de filariose linfática, utilizando testes de imunocromatografia rápida em cartão e gota espessa de sangue; comparar a imunocromatografia rápida frente ao método parasitológico da gota espessa de sangue, e avaliar diferentes técnicas parasitológicas. Foram examinados moradores da região endêmica de filariose linfática, definida anteriormente em Maceió, AL (parte dos bairros centrais e contíguos Feitosa, Jacintinho e Pitanguinha, ao longo do canal do Reginaldo). Através da imunocromatografia rápida foram avaliadas 3.000 crianças com idade entre 5-10 anos, sendo 10 (0,33%) antígeno-positivo; e entre 411 indivíduos > 10 anos examinados, apenas um (0,24%) foi antígeno-positivo. Através da gota espessa de sangue e na mesma área endêmica, foram examinadas 5.261 crianças com idade entre 5-10 anos, sendo 4 (0,076%) microfilarêmicas, e examinados 19.875 indivíduos > 10 anos, sendo 25 (0,13%) microfilarêmicos. A utilização de imunocromatografia rápida como forma de diagnóstico, através da pesquisa de antígenos do parasito, possibilitou a realização dos exames em horários matutino e vespertino, fato que se opõe ao método tradicional através de gota espessa. Fazendo-se uma comparação entre os resultados obtidos pela imunocromatografia rápida com os da gota espessa pode-se observar uma maior capacidade de detecção dos parasitados pelo método imunológico quando avaliadas crianças de 5-10 anos de idade sendo a odds relativa igual a 4,4 (I.C. 95% = 1,3 16,6); já em indivíduos com > 10 anos não houve diferença significativa na capacidade de detecção de parasitados entre essas técnicas. Todos os indivíduos antígeno-positivo pela imunocromatografia rápida foram submetidos a exames pela filtração de sangue em membrana e nenhum foi microfilarêmico. Os indivíduos positivos através da imunocromatografia e da gota espessa de sangue, foram submetidos ao teste imunoenzimático, sendo todos positivos por essa última técnica. A técnica imunoenzimática mostrou igual capacidade na detecção de antígenos circulantes de W. bancrofti quando comparada com a imunocromatografia rápida. Através dos exames realizados, utilizando a imunocromatografia rápida na faixa etária de 5 a 10 anos (idade preconizada pela OMS para verificação de transmissão ativa da filariose linfática), foi detectada uma prevalência muito baixa da parasitose na área demarcada, mostrando que em pouco tempo a cidade de Maceió-AL poderá estar livre da transmissão da filariose linfática

Submitted by Alexandre Sousa (alexandre.sousa@incqs.fiocruz.br) on 2014-08-01T13:26:04Z No. of bitstreams: 1 Dissertação Claudia.pdf: 3475820 bytes, checksum: 6332703f9ff4576a262fa833bd645549 (MD5) / Made available in DSpace on 2014-08-01T13:26:04Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Dissertação Claudia.pdf: 3475820 bytes, checksum: 6332703f9ff4576a262fa833bd645549 (MD5) Previous issue date: 2014 / Fundação Oswaldo Cruz. Bio-Manguinhos / A AIDS é um problema mundial de Saúde Pública. Com a necessidade de ampliar o acesso ao diagnóstico laboratorial da infecção causada pelo HIV, foi incentivado pelo Ministério da Saúde o desenvolvimento de testes de elevada sensibilidade e especificidade, além de baixo custo para uso em rotina, visando a detecção de anticorpos para o HIV no sangue humano. Esses testes sorológicos são instrumentos para auxiliar no diagnóstico clínico, na proteção do suprimento de sangue e no monitoramento da infecção pelo HIV. Bio-Manguinhos, Unidade Técnica da Fiocruz, voltada para o desenvolvimento e produção de imunobiológicos, biofármacos e reativos para diagnóstico, tem estimulado o estabelecimento de plataformas tecnológicas que permitam o desenvolvimento e a incorporação de novos produtos e processos para a Saúde Pública. Na presente avaliação, amostras de plasma de indivíduos soropositivos e negativos para a infecção pelo HIV e de doadores de sangue, além de um painel comercial de título misto para anticorpos contra o HIV, foram utilizadas na validação de reagentes e insumos disponíveis no mercado nacional em comparação aos importados, em uso, atualmente, na produção do tampão de corrida do Teste Rápido para Diagnóstico de HIV-1/2, de Bio-Manguinhos. O desempenho do tampão de corrida que compõe esse kit, formulado com insumos importados, frente ao tampão preparado com produtos encontrados no mercado nacional foi o mesmo, com relação à intensidade da linha teste e ao tempo da visualização da linha controle, a partir da adição da amostra e do referido tampão de corrida. No presente estudo foi verificado que não houve diferença estatística entre os reagentes analisados em um nível de significância de α=0,05. Além disso, todos os ensaios apresentaram percentuais de sensibilidade e especificidade de 100%, sugerindo que os reagentes nacionais podem ser utilizados em substituição aos importados, sem prejuízo no desempenho da reação imunológica inerente ao processo. Neste estudo não foram verificadas diferenças significativas no custo dos sete reagentes nacionais (Cloreto de sódio; Soro de Galinha; Sulfato de estreptomicina; Tween 20; EDTA Dissódico; Fosfato de Sódio Dibásico e EDTA Tetrassódico) avaliados frente aos importados. Sendo assim, de forma preliminar, podemos dizer que os reagentes nacionais apresentam o mesmo desempenho em relação aos importados, minimizando desta forma, os entraves burocráticos, permitindo maior agilidade no ato da compra e contribuindo para reduzir o período de espera da chegada do produto para o prosseguimento do processo produtivo do kit Teste Rápido por Bio-Manguinhos. / AIDS is a global problem of Public Health. With the need to expand access to the laboratory diagnosis of HIV infection it was encouraged by the Ministry of Health the development of tests of high sensitivity, specitivity and low cost for routine, in order to detect antibodies to HIV in human blood. These serological tests are important tools in clinical diagnosis, have in protecting the blood supply and in monitoring of HIV/AIDS. Bio-Manguinhos, a Technical Unit of Fiocruz on development and manufacturing of immunobiological, biopharmaceutical and reagents for diagnosis, have encouraged the establishment of technological platforms for the development and incorporation of new products and processes for Public Health. In the present study clinical samples from seropositive and nonreactive individuals for the HIV/AIDS infection and blood donors samples together with a mixed titer commercial panel were used in the validation of reagents and supplies obtained in internal market compared to those imported products currently used in the production of the running buffer of Rapid Test for Diagnosis of HIV – 1 / 2 Bio-Manguinhos. The performance of the running buffer of the kit, formulated with imported reagents in comparison with products found in the internal market was the same with respect to the intensity of the test line and to the time line view of control, from the moment of sample and the running buffer addition. In the study it was found that within a range of 95% there was no statistical difference between the reagents tested in α=0,05 significance level. Moreover, all the tests presented sensitivity and specificity percentages of 100% suggesting that the reagents obtained in the internal market may be used to replace imported ones without impairing performance of the immune response inherent to the process. In this study no significant differences in the cost of the seven reagents tested were observed (national or imported ones). Thus, in a preliminary way one can say that national reagents have the same performance in relation to those imported, thus minimizing the bureaucratic obstacles, allowing greater flexibility in the purchase and contributing to reduce the period for the arrival of the product the communication of the productive process Test Kit Rapid Bio-Manguinhos.

<p>UVOD: Tuberkuloza je odavno poznata bolest koja i danas u 21. veku jo&scaron; uvek predstavlja veliki javnozdravstveni problem, uprkos primeni moćnih antituberkuloznih lekova. Trećina svetske populacije inficirana je bacilom tuberkuloze. Svake godine oboli oko osam miliona, a umre oko dva miliona ljudi, zbog čega je tuberkuloza i dalje infektivno oboljenje sa najvećom stopom smrtnosti. Kasna dijagnoza, multirezistentna tuberkuloza i udruženost sa HIV infekcijom predstavljaju jednu od najvećih prepreka za efikasnu kontrolu ove bolesti u svetu. Rano otkrivanje se oslanja na kvalitetnu bakteriolo&scaron;ku dijagnostiku koja je kamen temeljac svakog nacionalnog programa za kontrolu tuberkuloze. Brza i tačna mikrobiolo&scaron;ka dijagnostika predstavlja osnovu programa kontrole tuberkuloze i zbog toga je uvođenje novih i brzih laboratorijskih testova od veoma velikog značaja. Razvijen je novi komercijalno dostupni imunohromatografski test koji se zasniva na detekciji antigena MPT64 glavnog sekretovanog proteina M. tuberculosis. Test je brz i pouzdan u identifikaciji izolovanih sojeva M. tuberculosis i jeftiniji je od konvencionalnih biohemijskih i molekularnih testova. CILJ: Ciljevi istraživanja su bili da se evaluiraju karakteristike novog brzog imunohromatografskog testa u identifikaciji mikobakterija izolovanih iz respiratornih uzoraka bolesnika sa tuberkulozom pluća i referentnih sojeva klinički značajnih vrsta netuberkuloznih mikobakterija (NTM). MATERIJAL I METODE: Istraživanje je sprovedeno u periodu od 1.1.2010. do 31.12.2013. i obuhvatilo je 43563 respiratornih uzoraka dobijenih od bolesnika hospitalizovanih u Institutu za plućne bolesti Vojvodine. Iz obrađenih respiratornih uzoraka izolovano je 3469 izolata mikobakterija. Identifikacija do nivoa vrste urađena je primenom standardnih biohemijskih testova, molekularnog testa (GenoType&reg; Mycobacterium) i imunohromatografskog testa (BDMGIT Tbc). U istraživanje je uključeno 100 sojeva Gram pozitivnih i Gram negativnih bakterija (n = 19 vrsta) izolovanih iz respiratornih kliničkih uzoraka. Identifikacija do nivoa vrste je potvrđena komercijalnim identifikacionim sistemima. REZULTATI: U toku četvorogodi&scaron;njeg istraživanja izolovano je 3469 izolata mikobakterija iz respiratornih uzoraka. U ispitivanom periodu ne postoji opadajući trend izolacije mikobakterija &scaron;to potvrđuje i koeficijent korelacije (r = 0,31). Svi izolati mikobakterija su identifikovani konvencionalnim biohemijskim ispitivanjima koja pokazuju da je 89% od svih izolata identifikovano kao Mycobacterium tuberculosis (M. tuberculosis), a 11% izolata kao NTM. Mycobacterium xenopi je bila najzastupljenija NTM vrsta identifikovana kod 55,3% izolata. Nakon biohemijske identifikacije kod 300 izolata M. tuberculosis i 100 izolata NTM, identifikacija je potvrđena komercijalno dostupnim molekularnim i imunohromatografskim testom. Na osnovu rezultata testiranja mikobakterija imunohromatografskim testom, senzitivnost, specifičnost, pozitivne i negativne prediktivne vrednosti bile su: 99,7%, 100%, 100% i 99%. U poređenju imunohromatografskog testa sa konvencionalnim biohemijskim ispitivanjima nije nađena statistički značajna razlika (p&gt; 0,5). Kappa vrednost testa je iznosila 0,993, a interval poverenja CI =0,98 &ndash; 1,00. U poređenju imunohromatografskog sa molekularnim testom vrednost kappa je iznosila 0,993, a interval poverenja CI = 0,98 &ndash; 1,00. Slaganje rezultata je potvrđeno i McNemar testom sa vredno&scaron;ću 0,99. Utvrđena je stabilnost sekretovanog antigena MPT64 i posle 5 godina od prvog testiranja. ZAKLJUČAK: Visoka senzitivnost i specifičnost imunohromatografskog testa omogućuju tačnu i preciznu identifikaciju M. tuberculosis kao i pouzdanu diferencijaciju M.tuberculosis od NTM &ndash; a. Imunohromatografski test može da predstavlja zamenu za konvencionalne biohemijske i molekularne testove u identifikaciji M. tuberculosis. Jeftiniji je, jednostavniji za izvođenje i brže se dobijaju rezultati čime seskraćuje vreme za postavljanje dijagnoze.</p> / <p>INTRODUCTION: Tuberculosis (TB) has been known as a disease for a long time, but nevertheless it represents a major public health issue even nowadays in the 21st century, despite potent antituberculous drugs applied. One third of the world population is infected by the TB bacillus. About eight million people get infected and two million die of tuberculosis in a year, so tuberculosis is still an infectious disease with the greatest mortality rate. Late diagnosis, multiresistant tuberculosis and concomitant HIV infection interfere mostly with an efficient control of the disease all over the world. Early TB detection largely depends on the high-quality bacteriological diagnostics, which is the corner stone of each national TB control programme. A fast and accurate microbiological TB diagnosis plays a crucial role in any TB control programme. It is therefore very important to introduce new and fast laboratory tests. A novel commercially available immunochromatographic test has been designed, based on the MPT64 antigen of the major M. tuberculosis &ndash; secreted protein. This is a rapid and reliable test to identify the isolated strains of M. tuberculosis, which is not expensive as conventional biochemical and molecular tests. OBJECTIVE: The objective of the investigation was to evaluate the new immunochromatographic rapid test to identify mycobacteria isolated from respiratory samples from pulmonary TB patients, and referential strains of clinically relevant species of nontuberculous mycobacteria (NTM). MATERIAL AND METHODS: The research was carried out in the period from 1st January, 2010 to 31st December, 2013. It included 43 563 respiratory samples obtained from the patients hospitalized in the Institute for Pulmonary Diseases of Vojvodina, Sremska Kamenica (Serbia). There were 3 469 mycobacterial isolates obtained from the processed respiratory samples. The species &ndash; level identification was performed by standard biochemical tests, the molecular test (GenoType&reg;Mycobacterium), and the immunochromatographic test (BD MGIT Tbc). The study included one hundred (100) of Gram positive and Gram negative bacteria (n = 19 species) isolated from respiratory clinical samples. The species &ndash; level identification was confirmed by commercial identification systems. RESULTS: During the four &ndash; year investigation, 3 469 mycobacterial isolates were obtained from respiratory samples. No declining tendency of mycobacterial isolation was registered in the examined period, as confirmed by the correlation coefficient (r = 0.31). All mycobacterial isolates were identified by conventional biochemical tests showing that 89% of all isolates were identified as M. tuberculosis, and 11% of the isolates as NTM. Mycobacterium xenopi was the most common NTM species identified in 55.3% of the isolates. Following the biochemical identification in 300 M. tuberculosis isolates and 100 NTM isolates, the identification was confirmed by commercially available molecular and immunochromatographic tests. Based on immunochromatographic testing of mycobacteria, the sensitivity, specificity, positive and negative predictive values of the test were 99.7%, 100%, 100% and 99% respectively. There is no statistically significant difference (p&gt; 0.5) when comparing features of immunochromatographic test with conventional biochemical assay. The kappa test value was 0.993, and the confidence interval CI = 0.98 &ndash; 1.00. Comparing the immunochromatographic with the molecular test, the kappa value was 0.993, and the confidence interval CI = 0.98 &ndash; 1.00. The congruence of the tests findings was also confirmed by the McNemar test, estimated to 0.99. The stability of the secreted MPT64 antigen was registered even five years after the first testing episode. CONCLUSION: The high sensitivity and specificity of the imunochromatographic test enable an accurate and precise identification of M. tuberculosis, as well as a reliable differentiation of M. tuberculosis from NTM. The immunochromatographic test may substitute conventional biochemical and molecular tests to identify M. tuberculosis. It is easier to perform and provides faster test results, thus reducing the time of establishing the diagnosis.</p>

Submitted by Johnny Rodrigues (johnnyrodrigues@ufcg.edu.br) on 2018-04-11T15:23:34Z No. of bitstreams: 1 VALTER PEREIRA DE OLIVEIRA - DISSERTAÇÃO PPG-CEMat 2014..pdf: 1734156 bytes, checksum: 237f9d589d08515acd18211405f32fdd (MD5) / Made available in DSpace on 2018-04-11T15:23:34Z (GMT). No. of bitstreams: 1 VALTER PEREIRA DE OLIVEIRA - DISSERTAÇÃO PPG-CEMat 2014..pdf: 1734156 bytes, checksum: 237f9d589d08515acd18211405f32fdd (MD5) Previous issue date: 2014-12-19 / A quantificação de substâncias em amostras humanas é de grande importância para o diagnóstico, acompanhamento e tratamento de diversas situações que afetam a saúde e condições fisiológicas da população. Entre os analitos cuja quantificação no sangue tem grande importância, encontra-se a ciclosporina que é administrada em pacientes transplantados e que a utilizam no tratamento imunossupressor. As análises para quantificação da droga são atualmente feitas por meio de testes complexos e caros, sendo uma importante fonte de gastos na saúde pública visto que o Brasil possui o maior sistema público de transplantes do mundo e que subsidia 95% do tratamento, incluindo procedimento cirúrgico, medicação e acompanhamento necessários ao pós-transplante. Atualmente dispositivos de testes de utilização simples que dispensa equipamentos e instalações laboratoriais estão sendo utilizados para diversos tipos de diagnósticos. São os denominados testes rápidos que utilizam o princípio da imunocromatografia como metodologia. O estudo teve o objetivo de desenvolver scalffolds a base de quitosana para carrear substâncias semelhantes ao sangue humano e comparar esta capacidade à da nitrocelulose com a finalidade de estabelecer uma possível substituição da nitrocelulose pela quitosana na produção de dispositivos de testes rápidos, possibilitando a confecção de um dispositivo para quantificação de ciclosporina e outros analitos estabelecendo um novo campo de aplicação para a quitosana como material carreador. Os scalffolds foram desenvolvidos pela preparação de uma solução de quitosana a 1% a qual foi filtrada, congelada e liofilizada. Os scalffolds foram então neutralizados, lavados, liofilizados e secos. As tiras de nitrocelulose com registro na Anvisa foram obtidas em farmácia, as amostras foram selecionadas aleatoriamente realizadas as mesmas caracterizações realizadas nos scalffolds. A caracterização foi realizada por meio das técnicas de Espectroscopia na Região do Infravermelho com Transformada de Fourier (FTIR), Microscopia Eletrônica de Varredura (MEV)/ Espectroscopia por Energia Dispersiva de raios X (EDS), Molhabilidade e Intumescimento. Os espectros em infravermelho demonstraram que a nitrocelulose e a quitosana possuem grupos funcionais compatíveis com as características descritas na literatura. As micrografias e espectros mostraram uma composição condizente com as características de absorção e carreamento de líquidos devido à presença de polaridade. Os ensaios de molhabilidade evidenciaram que a nitrocelulose e a quitosana possuem alta hidrofilicidade e os ensaios de intumescimento mostraram um alto grau de intumescimento da nitrocelulose e da quitosana corroborando suas características de material carreador. O produto desenvolvido possui potencial viabilidade para utilização como material carreador em dispositivos diagnósticos. / The quantification of substances in human samples has great importance for the diagnosis, monitoring and treatment for several situations that affect health and physiological conditions of the population. Among the analytes to be quantified, you have cyclosporine that is administered in transplanted patients for immunosuppressive treatment. The drug quantification are currently done by complex and expansive devices and is an important source of costs on public health as Brazil has the Highest Attendance Transplant System of the World and subsidizes 95 % of the treatment , including surgical procedures , medication and monitoring needed in post- transplant. Now a days, simple devices that do not require instruments and laboratory facilities are being used for various types of diagnoses. They are called rapid tests that use immunochromatography, as methodology. The study had the scope to develop a material with chitosan films to carry similar substances human blood and compare this capacity to the nitrocellulose with the goal of establishing a possible replacement of nitrocellulose for chitosan in the productions of a rapid test device, enabling a new field of application for chitosan as a carrier material. The scalffolds had been developed by the preparation of a chitosan 1% solution which was filtered, frozen and lyophilized. The scalffolds were then neutralized, washed, dried and lyophilized again. The strips of nitrocellulose registered with Anvisa were obtained in pharmacy, so samples were selected randomly to be performed the same characterizations performed in scalffolds. The characterization was performed using spectroscopy techniques in the Fourier Transform Infrared Region (FTIR), Scanning Electron Microscopy (SEM) /Energy Dispersive Spectroscopy X-ray (EDS), Wettability and Swelling. The infrared spectra showed that the nitrocellulose and chitosan have functional groups compatible with the features described in the literature. The micrographs and spectra showed a composition compatible for characteristics of absorption and liquid carrying due to the presence of polarity. The wettability tests have shown that the nitrocellulose and chitosan have high hydrophilicity and swelling measurements showed a high degree of nitrocellulose and chitosan swelling and its supporting carrier material characteristics. The product developed has the potential feasibility for use as carrier material in diagnostic devices.

Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior / Prostate cancer is the second cause of death in men by tumor, surpassed only by lung cancer. Its occurrence is estimated to be 51 to 100,000 cases per year. The increasing incidence levels observed may be partially explained by the evolution of diagnostic methods, quality of information systems and longer life expectancy. The identification of new cancer specific antigens and genes may provide important biomarkers for diagnosis and instruments for the development of new treatment strategies. The Phage Display technology may be able to select peptides with different aims, such as the discovery of mimetic antigens that are recognized by specific antibodies. Selected peptides may become potential tumor biomarkers for prostate cancer diagnosis. It could be possible to use this technology to identify proteins that are able to detect cancer earlier than the conventional methods, to predict disease staging, and to develop new treatment strategies based on more efficient biological targets. The immunization of SPF (specific pathogen free) male chickens with total proteins of tissues of prostate cancer has generated polyclonal specific IgY sera, which were used in biopanning procedures against random peptide libraries. Selected phages were characterized by sequencing and bioinformatics, and subsequently by dot immunoblotting and ELISA to validate their specificity. Selected peptides were mimotopes of putative proteins involved in the carcinogenesis process. These peptides were further tested for their possible use in the immune response diagnostics associated with tumor processes. In this work, we have also successfully developed a general immunosensor for diagnostics, performed on an exclusion liquid chromatography system based on a micro column resin separation, using the selected bacteriophages as carriers of antigens and antibodies. These phage are coupled to colored latex beads, which are activated with different chemical groups. The presence of phage in the process is of fundamental importance, once they favor the formation of the antigen-antibody complex, peptide-protein or peptide-substrate, amplifying the optical detection during chromatographic separation or by micro-agglutination in slides for optical microscopy detection. The new technology is practical and simple, and may also be used for detection of other biomolecules or chemical substances associated with infectious and genetic diseases, with high precision, sensitivity, specificity, and rapidity, using low sample volumes and presenting a low cost. / O câncer de próstata é a segunda causa de óbitos por câncer em homens, sendo superado apenas pelo câncer de pulmão. A ocorrência estimada é de 51 casos novos para cada 100 mil homens por ano para este tipo de câncer. O aumento observado nas taxas de incidência pode ser parcialmente justificado pela evolução dos métodos diagnósticos, pela melhoria na qualidade dos sistemas de informação do país e pelo aumento na expectativa de vida do brasileiro. A identificação de novos antígenos ou genes específicos do câncer de próstata pode prover novos biomarcadores e também fornecer instrumentos para o desenvolvimento de novas modalidades de tratamento. A tecnologia de Phage Display é capaz de selecionar peptídeos com diversas finalidades, como mimetizar antígenos reconhecidos por anticorpos. Peptídeos selecionados por esta técnica são potenciais marcadores tumorais para o diagnóstico do câncer de próstata. Por meio desta metodologia pode ser possível identificar proteínas capazes de detectar a resposta imune contra o tumor mais precocemente do que os métodos tradicionais, predizer o estadio atual do tumor, além de permitir o desenvolvimento de tratamentos mais eficientes. Pela imunização de galos SPF (livre de patógenos específicos) com proteínas totais de tecidos tumorais da próstata, foram obtidas IgY policlonais específicas que foram utilizadas no biopanning contra uma biblioteca de peptídeos recombinantes randômicos. Os fagos selecionados foram caracterizados por seqüenciamento e subsequentemente testados por dot immunoblotting e ELISA para validar a especificidade dos mesmos. Selecionou-se peptídeos que mimetizam proteínas prostáticas, possivelmente proteínas envolvidas no processo de tumorigênese. Esses peptídeos foram testados quanto a sua possível utilização no diagnóstico da resposta imune associada a processos tumorais. Neste trabalho, também foi desenvolvido com sucesso um imunossensor para diagnóstico que tem como base de detecção um sistema de cromatografia líquida por exclusão em micro colunas cromatográficas com bacteriófagos filamentosos carreadores de antígeno(s) e/ou anticorpo(s), selecionados por phage display, acoplados microesferas de látex coloridas, ativadas com diferentes grupamentos químicos. A presença do fago é de grande importância no processo, pois favorece a formação dos complexos antígeno-anticorpo, peptídeo-proteína ou peptídeo-substrato, ampliando a detecção ótica durante a separação por cromatografia ou por microaglutinação em microscopia ótica. A nova tecnologia pode também ser usada para a detecção de biomoléculas ou substâncias químicas associados a doenças infecciosas, parasitárias e genéticas, com rapidez, precisão, sensibilidade e reprodutibilidade, utilizando-se pequenos volumes de amostras e reagentes, apresentando praticidade e baixos custos. / Doutor em Genética e Bioquímica