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Validação de teste rápido dual path plataform (dpp®) sífilis biomanguinhos em pacientes obstétricas internadas nas maternidades públicas e filantrópicas do RecifeROMAGUERA, Luciana Maria Delgado 22 February 2017 (has links)
Submitted by Alice Araujo (alice.caraujo@ufpe.br) on 2018-04-11T20:08:44Z
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Previous issue date: 2017-02-22 / CAPES / CNPQ / Testes não treponêmicos, como o “Veneral Disease Research Laboratory”(VDRL), podem apresentar muitos falso negativos e baixa reprodutibilidade. Em locais de recursos limitados também não permitem diagnóstico e tratamento precoces. Nestes, os testes rápidos (TRs) apresentaram maior número de gestantes diagnosticadas e tratadas e maior redução de sífilis congênita (quando utilizados na primeira consulta de pré-natal com simultâneo tratamento da gestante). Este estudo validou o TR DPP® Sífilis e comparou a sua performance com a do VDRL em pacientes obstétricas internadas em maternidades públicas e filantrópicas do Recife-PE, em relação a um padrão de referência (PR) da pesquisa para diagnóstico da sífilis. Metodologia: a seleção foi pelo VDRL realizado nas maternidades. Ingressaram todas as pacientes internadas com VDRL (+) e uma a duas internadas com VDRL (-) imediatamente após. Todas as participantes realizaram pela pesquisa o DPP e os testes do PR: imunoenzimático (ELISA) + hemaglutinação (TPHA) e absorção de anticorpos treponêmicos fluorescente (FTA-ABS) quando ELISA e TPHA discordantes. Resultados: Foram analisadas 1228 pacientes. O DPP® apresentou sensibilidade de 92,9% (IC 95% 90,2-95), especificidade de 99,2% (98,3-99,6), razão de verossimilhança (+) de 120 (86,6-166,5), (-) de 0,07 (0,07-0,08) e “odds ratio” de 1686 (699,4-4065). Os valores preditivos (+) e (-) corrigidos pela prevalência real de sífilis gestacional da população foram 73,9% (70,1-77,3) e 99,8% (99,8-99,9). Porém, a sensibilidade do TR foi significantemente inferior nas pacientes PR (+) / VDRL (-) (39%: 25,66-54,3) que nas com PR (+) / VDRL (+) < 1:8 (97,1%: 93,5-98,8) e ≥ 1:8 (99,1%: 96,7-99,7). Na comparação com o VDRL, O DPP® apresentou maior razão de verossimilhança (+) e “odds ratio” nas duas maternidades em que foi possível a comparação, melhor especificidade em todas e melhor sensibilidade e razão de verossimilhança (-) em cinco, no geral sem significância estatística. O VDRL apresentou maior variação de sensibilidade e especificidade nas maternidades, no geral com significância estatística. Foi observado queda na sensibilidade do TR nas pacientes PR (+) / VDRL (-) nas maternidades em que os cálculos foram possíveis, porém com pequena casuística impedindo extrapolações conclusivas. Conclusão: o DPP® Sífilis apresentou boa performance, porém com sensibilidade diretamente relacionada à prevalência de PR (+) /VDRL (+) (sífilis ativa). Portanto, a seleção nas maternidades pelo VDRL superestimou a real prevalência de sífilis da população estudada, superestimando também a sensibilidade do DPP®, ficando a real entre 39 e 92,9%. Em comparação com o VDRL, o DPP® apresentou melhor performance e menor variação de sensibilidade e especificidade, no geral sem significância estatística. A execução do VDRL pelas maternidades e do DPP® pela pesquisa pode ter superestimado a performance do TR. A baixa sensibilidade do TR em populações com baixa prevalência de sífilis ativa não inviabiliza (a princípio) o seu uso, uma vez que são indicados em áreas de recursos limitados, com grande prevalência de sífilis ativa. Os ganhos em diagnóstico e tratamento oportunos de gestantes e redução de sífilis congênita ocorrerão se uso compulsório do TR com tratamento da gestante na primeira consulta de pré-natal. / Non-treponemal tests (NTTs), like the Veneral Disease Research Laboratory (VDRL), can present many false (-) and low reproducibility. In limited resources, it’s also unable to allow early diagnosis and treatment. In this places, the rapid tests (RTs) present the highest number of pregnant women diagnosed and treated and the greater reduction of congenital syphilis (when done at the first prenatal visit with simultaneous pregnant women treatment). This study validated the TR DPP® Sífilis and compared his performance with the VDRL in obstetric patients hospitalized in public and philanthropic maternity hospitals in Recife-PE, in relation to the reference standard (RS) of the research syphilis diagnosis. Methodology: the selection was done by VDRL performed in the maternity hospitals. All hospitalized patients with VDRL (+) and one to two hospitalized with VDRL (-) admitted immediately after were ingressed. All participants performed by the research the DPP and the tests from the RS: immunoenzymatic (ELISA) + haemagglutination (TPHA) and fluorescent treponemal antibody absorption (FTA-ABS) when TPHA and ELISA were discordants. Results: 1228 patients were analyzed. The DPP® showed sensitivity of 92.9% (95% CI 90.2-95), specificity of 99.2% (98.3-99.6), likelihood (+) ratio of 120 (86,6-166.5), likehood (-) ratio of 0.07 (0.07-0.08) and odds ratio of 1686 (699.4-4065). Predictive values (+) and (-) corrected by the real prevalence of gestational syphilis study population were 73.9% (70.1-77.3) and 99.8% (99.8-99.9). However, the sensitivity of RT was significantly lower in RS (+) / VDRL (-) patients (39%: 25.66-54.3) than RS (+) / VDRL (+) < 1:8 (97.1%: 93.5 -98.8) and ≥ 1:8 (99.1%: 96.7-99.7) patients. In the comparison with the VDRL, DPP ® showed a greater likelihood ratio (+) and odds ratio in the two maternity hospitals where the comparison was possible, better specificity in all of them and better sensitivity and likelihood (-) ratio in five of them, generally without statistical significance. The VDRL present greater sensitivity and specificity variation, generally with statistical significance. There was also a decrease in the sensitivity of RT in RS (+) / VDRL (-) patients in the maternity hospitals where the calculations were possible, but the small casuistry preventing conclusive extrapolations. Conclusion: The DPP ® Sifilis showed good performance, but sensitivity directly related to the prevalence of RS (+) with VDRL (+) (active syphilis). Therefore, the selection by VDRL overestimated the real syphilis prevalence of the study population, overestimating the sensitivity of 92.9% of the DPP®, being the real test sensitivity between 39 and 92.9%. Compared to VDRL, the RT showed better performance and lower sensitivity and specificity variation, generally without significance. The execution of VDRL by maternity hospitals and DPP® by research may have overestimated the RT performance. The low RT sensitivity in low prevalence of active syphilis populations doesn’t make the test unfeasible (at first), since it’s indicated in limited resources, with high prevalence of active syphilis. The gains in the timely diagnosis and treatment of pregnant women with reduction of congenital syphilis will occur if the RT is used compulsorily, with treatment during the first prenatal visit.
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Desenvolvimento de protótipos de testes imunocromatográficos para detecção de anticorpos específicos de leptospiras patogênicas em ratos e cães / Development of prototypes of immunochromatographic tests for the detection of antibodies specific for pathogenic leptospires in rats and dogsSouza, Dienny Rodrigues de 02 July 2018 (has links)
Submitted by Franciele Moreira (francielemoreyra@gmail.com) on 2018-08-14T13:28:54Z
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Previous issue date: 2018-07-02 / Conselho Nacional de Pesquisa e Desenvolvimento Científico e Tecnológico - CNPq / Leptospirosis is a zoonosis caused by pathogenic spirochetes belonging to the genus Leptospira.
The disease may progress to acute renal failure (Weil's Syndrome) and severe pulmonary
haemorrhagic syndrome (SPHS), with a mortality rate of > 50%. The highest incidence of the
disease occurs among the poorer populations and is associated with the lack of basic sanitation that
gets worse during periods of heavy rainfall and flooding. Rodents and dogs are the main sources of
transmission of the disease. Therefore, the identification of infected animals is essential towards
eliminating reservoir hosts such as dogs and rodents. Therefore, means allowing the identification
of leptospira infection in dogs and rodents is essential to permit control actions, decreasing the
infection rate in the environment and consequently helping to prevent disease in humans. The
objective of this study was to develop prototypes of lateral flow immunochromatographic tests to
aid in the diagnosis and control of leptospirosis. The design used in the prototypes was based on a
lateral flow immunochromatographic test for direct detection of specific antibodies using a
recombinant antigen, known as rLigBrep, attached to the nitrocellulose membrane test line. As an
antigen/antibody binding marker, polyvalent antibodies were conjugated to 40 nm colloidal gold,
murine anti-mouse immunoglobulin for the murine, anti-canine (Rockland) and anti-canine IgG
(Jackson) for canine prototypes. The canine prototypes were tested with 10 positive samples and
10 negative samples previously confirmed by the MAT and ELISA for canine leptospirosis. The
staining intensity was recorded on a scale of 0 to 3. Low concentrations of rLigBrep antigen
resulted in weak staining intensity. The results of the murine prototype provided the basic
specifications to developed the canine prototypes. In the first canine prototype using Rockland
conjugate, 5/10 positive samples presented staining intensity of 1. In the canine prototype using
Jackson conjugate, 9/10 positive samples presented staining intensity variation of 1 to 3. The
results of negative samples 8/10 presented a tenuous staining intensity on the test line, indicating
the necessity to reduce the concentration of antigen and/or conjugate on the test. The studied
prototypes were not evaluated to determine sensibility and specificity as they didn’t present similar
results obtained on ELISA and MAT. Therefore, it has not been defined if the rLigBrep protein can
be utilized in the development of a rapid immunochromatography test for the diagnosis of canine
leptospirosis and as a marker of infection in rodents. / A leptospirose é uma zoonose causada por espiroquetas patogênicas do gênero Leptospira. A
doença pode progredir para falência renal aguda (Síndrome de Weil) e síndrome hemorrágica
pulmonar severa (SPHS), com taxa de mortalidade > 50%. A maior incidência da doença ocorre
em populações mais carentes, ligada a deficiências em saneamento básico agravando-se em
períodos de chuvas constantes e enchentes. Os roedores e os cães são os principais transmissores
da doença. Portanto, meios que permitam a identificação de infecção por lepstospira em cães e
roedores é essencial para permitir ações de controle, diminuindo a taxa de infecção no meio
ambiente e consequentemente auxiliando na prevenção da doença nos humanos. O objetivo desse
estudo foi desenvolver protótipos de testes imunocromatograficos de fluxo lateral para auxiliar no
diagnóstico e controle da leptospirose. O desenho utilizado nos protótipos se baseiam em um teste
imunocromatográfico de fluxo lateral para detecção direta de anticorpos específicos, utilizando
antígeno recombinante rLigBrep fixado na linha teste da membrana de nitrocelulose. Como
marcador da ligação antígeno/anticorpo foram utilizado nanoparticulas deouro coloidal de 40 nm
conjugados a anti-imunoglobulina murina polivalente para o protótipo murino, anticorpo policlonal
anti-IgG F(c) canino da Rockland e anticorpo policlonal anti-IgG F(c) canino da Jackson para os
protótipos caninos. Os protótipos caninos foram testados com 10 amostras positivas e 10 amostras
negativas confirmadas em MAT e ELISA para leptospirose canina. A intensidade de coloração dos
resultados foi registrada em escala entre 0 a 3. As especificações dos materiais e concentrações do
protótipo murino serviram de base para o desenvolvimento do protótipo canino. No protótipo
canino utilizando conjugado Rockland, 5/10 amostras positivas apresentaram intensidade de
coloração 1. Com o protótipo canino, utilizando conjugado Jackson, nas 9/10 amostras positivas a
intensidade de coloração variou de 1 a 3. Entre resultados das amostras negativas 8/10
apresentaram uma coloração tênue na linha teste, indicando a necessidade de reduzir a
concentração de antígeno e/ou conjugado no teste. Os protótipos estudados não foram avaliados
para determinar a sensibilidade e especificidade pois ainda não apresentaram resultados
semelhantes aos obtidos em ELISA e MAT. Portanto, não foi definido se proteína rLigBrep pode
ser utilizada no desenvolvimento de um teste imunocromatográfico rápido para diagnóstico de
leptospirose canina e como marcador de infecção por leptospiras em roedores.
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Teste de tetrazólio para avaliação da qualidade de sementes de quiabo / Tetrazolium test methodology for assessment of okra seeds qualitySouza, Antonia Adailha Torres 18 February 2016 (has links)
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Previous issue date: 2016-02-18 / Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior / The objective of this work was to study the tetrazolium test efficiency to verify the viability of okra seeds. The first experiment tested whether pre-conditioning and preparation methods. To overcome cutaneous hardness, we evaluated three methods to the best way of preconditioning: sulfuric acid (96%) for 1, 3 and 6 minutes; warm water (60 ° C) for 3, 6 and 10 minutes and ethyl alcohol ( 98%) for 30, 60 and 90 minutes. Four replications of 25 seeds were used, then the seeds were immersed in water at 25 ° C for 18 hours and then exposed to tetrazolium solution (with or without cut) at concentrations of 0.025 to 0.1% for 30, 60, 90 and 120 minutes in a germination chamber. The seeds were classified in four classes: discolored seed, poor coloring, satisfactory and excessive. The second experiment was carried out based on the results of the previous experiment. For this, four lots of okra seeds were subjected to preconditioning soaking in alcohol for 60 minutes followed by 18 hours of direct immersion in water at 25 ° C. Then, the seeds were cut longitudinally, immersed in 0.025 solutions; 0.050 and 0.075% for 60, 90 and 120 minutes and maintained in a growth chamber at 35 and 40° C. After this period, the seeds were classified with basis on the color (bright red pink or strong red carmine). At the same time, the germination test was installed, and the results were used as reference to the tetrazolium test. The experiment was conducted in a completely randomized design, in a factorial 3 x 3 + 1, three concentrations of the tetrazolium salt, three periods of immersion and the witness. The average of viable seeds tetrazolium test were compared by Tukey test at 5% significance level. The comparison between the means of the tetrazolium test and the germination test was taken by Dunnett test at 5% significance level. For preconditioning phase, it is recommended soaking seeds in alcohol for 60 minutes followed by 18 hours of immersion in distilled water at 25 ° C. The completion of the facilitated penetration of the cutting tetrazolium solution. For staining, we must use the concentration of 0.025% in 90 minutes time. The tetrazolium test is effective to estimate the viability of okra seeds in tetrazolium solution of 0.075% for 90 minutes / O objetivo desse trabalho foi estudar a eficiência do teste de tetrazólio para verificar a viabilidade de sementes de quiabo. No primeiro experimento, testaram-se métodos de pré-condicionamento e preparo. Para superar a dureza tegumentar, foram avaliados três métodos visando à melhor forma de pré-condicionamento: ácido sulfúrico (96%) por 1, 3 e 6 minutos; água quente (60 °C) por 3, 6 e 10 minutos e álcool etílico (98%) durante 30, 60 e 90 minutos, utilizando quatro repetições de 25 sementes. Posteriormente, as sementes foram imersas em água a 25 °C por 18 horas e, em seguida, expostas à solução de tetrazólio (com e sem corte) nas concentrações de 0,025 e 1% durante 30, 60, 90 e 120 minutos em câmara de germinação. As sementes foram classificadas em quatro classes: sementes descoloridas, coloração fraca, satisfatória e excessiva. O segundo experimento foi realizado com base nos resultados do experimento anterior. Para isso, quatro lotes de sementes de quiabo foram submetidos ao pré-condicionamento de imersão em álcool por 60 minutos seguido de 18 horas de embebição direta em água a 25 ºC. Em seguida, as sementes foram seccionadas longitudinalmente, imersas em soluções de 0,025; 0,050 e 0,075% por 60, 90 e 120 minutos e mantidas em câmara de germinação, a 35 e 40 °C. Após esse período, as sementes foram classificadas com base na coloração (vermelho brilhante rosa ou vermelho carmim forte). Paralelamente, foi instalado o teste de germinação, cujos resultados foram empregados como referência para o teste de tetrazólio. O experimento foi conduzido em delineamento inteiramente casualisado, em esquema fatorial 3 x 3 + 1, sendo três concentrações do sal de tetrazólio, três períodos de imersão e a testemunha. As médias de sementes viáveis do teste de tetrazólio foram comparadas pelo teste Tukey a 5% de significância. Já a comparação entre as médias do teste de tetrazólio e o teste de germinação foi feita pelo teste de Dunnett a 5% de significância. Para a fase de pré-condicionamento, recomenda-se a imersão das sementes em álcool por 60 minutos, seguida de 18 horas de embebição em água destilada a 25 ºC. A realização do corte facilitou a penetração da solução de tetrazólio. O teste de tetrazólio é eficiente para estimar a viabilidade em sementes de quiabo, na concentração de 0,075% sob temperatura de 35°C por 90 minutos
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Teste de tetrazólio para avaliação da qualidade de sementes de quiabo / Tetrazolium test methodology for assessment of okra seeds qualitySouza, Antonia Adailha Torres 18 February 2016 (has links)
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Previous issue date: 2016-02-18 / Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior / The objective of this work was to study the tetrazolium test efficiency to verify the viability of okra seeds. The first experiment tested whether pre-conditioning and preparation methods. To overcome cutaneous hardness, we evaluated three methods to the best way of preconditioning: sulfuric acid (96%) for 1, 3 and 6 minutes; warm water (60 ° C) for 3, 6 and 10 minutes and ethyl alcohol ( 98%) for 30, 60 and 90 minutes. Four replications of 25 seeds were used, then the seeds were immersed in water at 25 ° C for 18 hours and then exposed to tetrazolium solution (with or without cut) at concentrations of 0.025 to 0.1% for 30, 60, 90 and 120 minutes in a germination chamber. The seeds were classified in four classes: discolored seed, poor coloring, satisfactory and excessive. The second experiment was carried out based on the results of the previous experiment. For this, four lots of okra seeds were subjected to preconditioning soaking in alcohol for 60 minutes followed by 18 hours of direct immersion in water at 25 ° C. Then, the seeds were cut longitudinally, immersed in 0.025 solutions; 0.050 and 0.075% for 60, 90 and 120 minutes and maintained in a growth chamber at 35 and 40° C. After this period, the seeds were classified with basis on the color (bright red pink or strong red carmine). At the same time, the germination test was installed, and the results were used as reference to the tetrazolium test. The experiment was conducted in a completely randomized design, in a factorial 3 x 3 + 1, three concentrations of the tetrazolium salt, three periods of immersion and the witness. The average of viable seeds tetrazolium test were compared by Tukey test at 5% significance level. The comparison between the means of the tetrazolium test and the germination test was taken by Dunnett test at 5% significance level. For preconditioning phase, it is recommended soaking seeds in alcohol for 60 minutes followed by 18 hours of immersion in distilled water at 25 ° C. The completion of the facilitated penetration of the cutting tetrazolium solution. For staining, we must use the concentration of 0.025% in 90 minutes time. The tetrazolium test is effective to estimate the viability of okra seeds in tetrazolium solution of 0.075% for 90 minutes / O objetivo desse trabalho foi estudar a eficiência do teste de tetrazólio para verificar a viabilidade de sementes de quiabo. No primeiro experimento, testaram-se métodos de pré-condicionamento e preparo. Para superar a dureza tegumentar, foram avaliados três métodos visando à melhor forma de pré-condicionamento: ácido sulfúrico (96%) por 1, 3 e 6 minutos; água quente (60 °C) por 3, 6 e 10 minutos e álcool etílico (98%) durante 30, 60 e 90 minutos, utilizando quatro repetições de 25 sementes. Posteriormente, as sementes foram imersas em água a 25 °C por 18 horas e, em seguida, expostas à solução de tetrazólio (com e sem corte) nas concentrações de 0,025 e 1% durante 30, 60, 90 e 120 minutos em câmara de germinação. As sementes foram classificadas em quatro classes: sementes descoloridas, coloração fraca, satisfatória e excessiva. O segundo experimento foi realizado com base nos resultados do experimento anterior. Para isso, quatro lotes de sementes de quiabo foram submetidos ao pré-condicionamento de imersão em álcool por 60 minutos seguido de 18 horas de embebição direta em água a 25 ºC. Em seguida, as sementes foram seccionadas longitudinalmente, imersas em soluções de 0,025; 0,050 e 0,075% por 60, 90 e 120 minutos e mantidas em câmara de germinação, a 35 e 40 °C. Após esse período, as sementes foram classificadas com base na coloração (vermelho brilhante rosa ou vermelho carmim forte). Paralelamente, foi instalado o teste de germinação, cujos resultados foram empregados como referência para o teste de tetrazólio. O experimento foi conduzido em delineamento inteiramente casualisado, em esquema fatorial 3 x 3 + 1, sendo três concentrações do sal de tetrazólio, três períodos de imersão e a testemunha. As médias de sementes viáveis do teste de tetrazólio foram comparadas pelo teste Tukey a 5% de significância. Já a comparação entre as médias do teste de tetrazólio e o teste de germinação foi feita pelo teste de Dunnett a 5% de significância. Para a fase de pré-condicionamento, recomenda-se a imersão das sementes em álcool por 60 minutos, seguida de 18 horas de embebição em água destilada a 25 ºC. A realização do corte facilitou a penetração da solução de tetrazólio. O teste de tetrazólio é eficiente para estimar a viabilidade em sementes de quiabo, na concentração de 0,075% sob temperatura de 35°C por 90 minutos
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Detecção de sífilis adquirida em comunidades de difícil acesso da região Amazônia: desafio a ser superado com a utilização dostestes rápidos / Detecção de sífilis adquirida em comunidades de difícil acesso da região Amazônia: desafio a ser superado com a utilização dos testes rápidosBenzaken, Adele Schwartz January 2009 (has links)
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Previous issue date: 2009 / As infecções de transmissão sexual, em especial a sífilis, são um dos problemasde saúde mais comuns e ainda se desconhece sua real magnitude, inclusive no Brasil. Algumas explicações podem ser descritas pela insuficiência de recursos humanos e materiais necessários ao seu diagnóstico em zonas de difícil acesso, em diversos países. Nessas circunstancias, exames de diagnóstico denominados testes rápidos têm um papel importante para a identificação da doença, e, na tentativa de demonstrar sua aplicabilidade e seu papel na gestão de políticas públicas este trabalho atuou em quatro frentes de pesquisa: Primeira - validação das características operacionais, de quatro diferentes testes rápidos treponêmicos em clínica especializada em Doenças Sexualmente Transmissíveis (DST), em Manaus, comparado-os com o FTA-Abs como padrão ouro e a avaliação da aceitabilidade dos testes junto aos profissionais e clientela testada. Segundo- Validação multicêntrica com outros três países participantes do estudo. Terceira Estudos dirigidos a subgrupos de pessoas que habitualmente não acedem, de maneira espontânea, os serviços regulares de saúde. E, por fim Estudos junto a populações de diferentes prevalências para a sífilis. Onde somadas as quatro etapas comprovou-se as principais virtudes desta nova geração de testes, rapidez e facilidade na execução e interpretação; aceitabilidade pelos pacientes e profissionais de saúde; favorecimento da decisão do tratamento imediato; dispensar energia elétrica ou profissional especializado. As evidências levantadas por estas investigações enfatizam o papel que os testes rápidos jogarão nos próximos anos, para o controle da sífilis. / Sexually Transmitted Infections, particularly syphilis, are one of the most common health problems worldwide and its real magnitude is still unknown, including in Brazil. The lack of skilled human resources and basic laboratory infrastructure in areas of difficult access in many parts of the world contribute to explain it. Under these circumstances rapid tests represent a promising and valuable alternative to traditional
syphilis diagnostic. To demonstrate the test's applicability and its role for public policy,
this thesis explored four different research fronts: First- the validation of the performance characteristics and the operability of different syphilis rapid tests were carried out in a Sexually Transmitted Infection clinic in Manaus, Brazil. Four treponemical syphilis rapid tests were compared against the “gold standard” FTA-Abs.
This portion of the research also includes a study on the acceptability of the rapid tests
by the health professionals, as well as patients. Second- Validation of syphilis rapid tests with three other countries participating in a multicentric study. Third- Studies on the use and acceptability of the tests for target groups which do not have regular or easy access to health services and are also difficult to reach locations. Lastly, the rapid tests were tested in target groups with different Syphilis prevalence. These different phases of the research proved the virtues of this new generation of tests: speed and ease of use and interpretation of results, patient and health professional acceptability, the test increases the likelihood of immediate treatment, and it does not require electric power
or specialized professionals. The results obtained emphasize and evidence the importance of the role that rapid tests have in the diagnosis and control of syphilis.
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