Submitted by Franciele Moreira (francielemoreyra@gmail.com) on 2018-08-14T13:28:54Z No. of bitstreams: 2 Dissertação - Dienny Rodrigues de Souza - 2018.pdf: 2932501 bytes, checksum: b9f00bbcfe53fb6001ad592bd08bbc63 (MD5) license_rdf: 0 bytes, checksum: d41d8cd98f00b204e9800998ecf8427e (MD5) / Approved for entry into archive by Luciana Ferreira (lucgeral@gmail.com) on 2018-08-16T11:24:33Z (GMT) No. of bitstreams: 2 Dissertação - Dienny Rodrigues de Souza - 2018.pdf: 2932501 bytes, checksum: b9f00bbcfe53fb6001ad592bd08bbc63 (MD5) license_rdf: 0 bytes, checksum: d41d8cd98f00b204e9800998ecf8427e (MD5) / Made available in DSpace on 2018-08-16T11:24:33Z (GMT). No. of bitstreams: 2 Dissertação - Dienny Rodrigues de Souza - 2018.pdf: 2932501 bytes, checksum: b9f00bbcfe53fb6001ad592bd08bbc63 (MD5) license_rdf: 0 bytes, checksum: d41d8cd98f00b204e9800998ecf8427e (MD5) Previous issue date: 2018-07-02 / Conselho Nacional de Pesquisa e Desenvolvimento Científico e Tecnológico - CNPq / Leptospirosis is a zoonosis caused by pathogenic spirochetes belonging to the genus Leptospira. The disease may progress to acute renal failure (Weil's Syndrome) and severe pulmonary haemorrhagic syndrome (SPHS), with a mortality rate of > 50%. The highest incidence of the disease occurs among the poorer populations and is associated with the lack of basic sanitation that gets worse during periods of heavy rainfall and flooding. Rodents and dogs are the main sources of transmission of the disease. Therefore, the identification of infected animals is essential towards eliminating reservoir hosts such as dogs and rodents. Therefore, means allowing the identification of leptospira infection in dogs and rodents is essential to permit control actions, decreasing the infection rate in the environment and consequently helping to prevent disease in humans. The objective of this study was to develop prototypes of lateral flow immunochromatographic tests to aid in the diagnosis and control of leptospirosis. The design used in the prototypes was based on a lateral flow immunochromatographic test for direct detection of specific antibodies using a recombinant antigen, known as rLigBrep, attached to the nitrocellulose membrane test line. As an antigen/antibody binding marker, polyvalent antibodies were conjugated to 40 nm colloidal gold, murine anti-mouse immunoglobulin for the murine, anti-canine (Rockland) and anti-canine IgG (Jackson) for canine prototypes. The canine prototypes were tested with 10 positive samples and 10 negative samples previously confirmed by the MAT and ELISA for canine leptospirosis. The staining intensity was recorded on a scale of 0 to 3. Low concentrations of rLigBrep antigen resulted in weak staining intensity. The results of the murine prototype provided the basic specifications to developed the canine prototypes. In the first canine prototype using Rockland conjugate, 5/10 positive samples presented staining intensity of 1. In the canine prototype using Jackson conjugate, 9/10 positive samples presented staining intensity variation of 1 to 3. The results of negative samples 8/10 presented a tenuous staining intensity on the test line, indicating the necessity to reduce the concentration of antigen and/or conjugate on the test. The studied prototypes were not evaluated to determine sensibility and specificity as they didn’t present similar results obtained on ELISA and MAT. Therefore, it has not been defined if the rLigBrep protein can be utilized in the development of a rapid immunochromatography test for the diagnosis of canine leptospirosis and as a marker of infection in rodents. / A leptospirose é uma zoonose causada por espiroquetas patogênicas do gênero Leptospira. A doença pode progredir para falência renal aguda (Síndrome de Weil) e síndrome hemorrágica pulmonar severa (SPHS), com taxa de mortalidade > 50%. A maior incidência da doença ocorre em populações mais carentes, ligada a deficiências em saneamento básico agravando-se em períodos de chuvas constantes e enchentes. Os roedores e os cães são os principais transmissores da doença. Portanto, meios que permitam a identificação de infecção por lepstospira em cães e roedores é essencial para permitir ações de controle, diminuindo a taxa de infecção no meio ambiente e consequentemente auxiliando na prevenção da doença nos humanos. O objetivo desse estudo foi desenvolver protótipos de testes imunocromatograficos de fluxo lateral para auxiliar no diagnóstico e controle da leptospirose. O desenho utilizado nos protótipos se baseiam em um teste imunocromatográfico de fluxo lateral para detecção direta de anticorpos específicos, utilizando antígeno recombinante rLigBrep fixado na linha teste da membrana de nitrocelulose. Como marcador da ligação antígeno/anticorpo foram utilizado nanoparticulas deouro coloidal de 40 nm conjugados a anti-imunoglobulina murina polivalente para o protótipo murino, anticorpo policlonal anti-IgG F(c) canino da Rockland e anticorpo policlonal anti-IgG F(c) canino da Jackson para os protótipos caninos. Os protótipos caninos foram testados com 10 amostras positivas e 10 amostras negativas confirmadas em MAT e ELISA para leptospirose canina. A intensidade de coloração dos resultados foi registrada em escala entre 0 a 3. As especificações dos materiais e concentrações do protótipo murino serviram de base para o desenvolvimento do protótipo canino. No protótipo canino utilizando conjugado Rockland, 5/10 amostras positivas apresentaram intensidade de coloração 1. Com o protótipo canino, utilizando conjugado Jackson, nas 9/10 amostras positivas a intensidade de coloração variou de 1 a 3. Entre resultados das amostras negativas 8/10 apresentaram uma coloração tênue na linha teste, indicando a necessidade de reduzir a concentração de antígeno e/ou conjugado no teste. Os protótipos estudados não foram avaliados para determinar a sensibilidade e especificidade pois ainda não apresentaram resultados semelhantes aos obtidos em ELISA e MAT. Portanto, não foi definido se proteína rLigBrep pode ser utilizada no desenvolvimento de um teste imunocromatográfico rápido para diagnóstico de leptospirose canina e como marcador de infecção por leptospiras em roedores.

Made available in DSpace on 2016-08-12T19:15:37Z (GMT). No. of bitstreams: 1 AntoniaATS_DISSERT.pdf: 913546 bytes, checksum: d8262ad4e9d559fb8809834484072eae (MD5) Previous issue date: 2016-02-18 / Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior / The objective of this work was to study the tetrazolium test efficiency to verify the viability of okra seeds. The first experiment tested whether pre-conditioning and preparation methods. To overcome cutaneous hardness, we evaluated three methods to the best way of preconditioning: sulfuric acid (96%) for 1, 3 and 6 minutes; warm water (60 ° C) for 3, 6 and 10 minutes and ethyl alcohol ( 98%) for 30, 60 and 90 minutes. Four replications of 25 seeds were used, then the seeds were immersed in water at 25 ° C for 18 hours and then exposed to tetrazolium solution (with or without cut) at concentrations of 0.025 to 0.1% for 30, 60, 90 and 120 minutes in a germination chamber. The seeds were classified in four classes: discolored seed, poor coloring, satisfactory and excessive. The second experiment was carried out based on the results of the previous experiment. For this, four lots of okra seeds were subjected to preconditioning soaking in alcohol for 60 minutes followed by 18 hours of direct immersion in water at 25 ° C. Then, the seeds were cut longitudinally, immersed in 0.025 solutions; 0.050 and 0.075% for 60, 90 and 120 minutes and maintained in a growth chamber at 35 and 40° C. After this period, the seeds were classified with basis on the color (bright red pink or strong red carmine). At the same time, the germination test was installed, and the results were used as reference to the tetrazolium test. The experiment was conducted in a completely randomized design, in a factorial 3 x 3 + 1, three concentrations of the tetrazolium salt, three periods of immersion and the witness. The average of viable seeds tetrazolium test were compared by Tukey test at 5% significance level. The comparison between the means of the tetrazolium test and the germination test was taken by Dunnett test at 5% significance level. For preconditioning phase, it is recommended soaking seeds in alcohol for 60 minutes followed by 18 hours of immersion in distilled water at 25 ° C. The completion of the facilitated penetration of the cutting tetrazolium solution. For staining, we must use the concentration of 0.025% in 90 minutes time. The tetrazolium test is effective to estimate the viability of okra seeds in tetrazolium solution of 0.075% for 90 minutes / O objetivo desse trabalho foi estudar a eficiência do teste de tetrazólio para verificar a viabilidade de sementes de quiabo. No primeiro experimento, testaram-se métodos de pré-condicionamento e preparo. Para superar a dureza tegumentar, foram avaliados três métodos visando à melhor forma de pré-condicionamento: ácido sulfúrico (96%) por 1, 3 e 6 minutos; água quente (60 °C) por 3, 6 e 10 minutos e álcool etílico (98%) durante 30, 60 e 90 minutos, utilizando quatro repetições de 25 sementes. Posteriormente, as sementes foram imersas em água a 25 °C por 18 horas e, em seguida, expostas à solução de tetrazólio (com e sem corte) nas concentrações de 0,025 e 1% durante 30, 60, 90 e 120 minutos em câmara de germinação. As sementes foram classificadas em quatro classes: sementes descoloridas, coloração fraca, satisfatória e excessiva. O segundo experimento foi realizado com base nos resultados do experimento anterior. Para isso, quatro lotes de sementes de quiabo foram submetidos ao pré-condicionamento de imersão em álcool por 60 minutos seguido de 18 horas de embebição direta em água a 25 ºC. Em seguida, as sementes foram seccionadas longitudinalmente, imersas em soluções de 0,025; 0,050 e 0,075% por 60, 90 e 120 minutos e mantidas em câmara de germinação, a 35 e 40 °C. Após esse período, as sementes foram classificadas com base na coloração (vermelho brilhante rosa ou vermelho carmim forte). Paralelamente, foi instalado o teste de germinação, cujos resultados foram empregados como referência para o teste de tetrazólio. O experimento foi conduzido em delineamento inteiramente casualisado, em esquema fatorial 3 x 3 + 1, sendo três concentrações do sal de tetrazólio, três períodos de imersão e a testemunha. As médias de sementes viáveis do teste de tetrazólio foram comparadas pelo teste Tukey a 5% de significância. Já a comparação entre as médias do teste de tetrazólio e o teste de germinação foi feita pelo teste de Dunnett a 5% de significância. Para a fase de pré-condicionamento, recomenda-se a imersão das sementes em álcool por 60 minutos, seguida de 18 horas de embebição em água destilada a 25 ºC. A realização do corte facilitou a penetração da solução de tetrazólio. O teste de tetrazólio é eficiente para estimar a viabilidade em sementes de quiabo, na concentração de 0,075% sob temperatura de 35°C por 90 minutos

Made available in DSpace on 2016-08-12T19:18:54Z (GMT). No. of bitstreams: 1 AntoniaATS_DISSERT.pdf: 913546 bytes, checksum: d8262ad4e9d559fb8809834484072eae (MD5) Previous issue date: 2016-02-18 / Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior / The objective of this work was to study the tetrazolium test efficiency to verify the viability of okra seeds. The first experiment tested whether pre-conditioning and preparation methods. To overcome cutaneous hardness, we evaluated three methods to the best way of preconditioning: sulfuric acid (96%) for 1, 3 and 6 minutes; warm water (60 ° C) for 3, 6 and 10 minutes and ethyl alcohol ( 98%) for 30, 60 and 90 minutes. Four replications of 25 seeds were used, then the seeds were immersed in water at 25 ° C for 18 hours and then exposed to tetrazolium solution (with or without cut) at concentrations of 0.025 to 0.1% for 30, 60, 90 and 120 minutes in a germination chamber. The seeds were classified in four classes: discolored seed, poor coloring, satisfactory and excessive. The second experiment was carried out based on the results of the previous experiment. For this, four lots of okra seeds were subjected to preconditioning soaking in alcohol for 60 minutes followed by 18 hours of direct immersion in water at 25 ° C. Then, the seeds were cut longitudinally, immersed in 0.025 solutions; 0.050 and 0.075% for 60, 90 and 120 minutes and maintained in a growth chamber at 35 and 40° C. After this period, the seeds were classified with basis on the color (bright red pink or strong red carmine). At the same time, the germination test was installed, and the results were used as reference to the tetrazolium test. The experiment was conducted in a completely randomized design, in a factorial 3 x 3 + 1, three concentrations of the tetrazolium salt, three periods of immersion and the witness. The average of viable seeds tetrazolium test were compared by Tukey test at 5% significance level. The comparison between the means of the tetrazolium test and the germination test was taken by Dunnett test at 5% significance level. For preconditioning phase, it is recommended soaking seeds in alcohol for 60 minutes followed by 18 hours of immersion in distilled water at 25 ° C. The completion of the facilitated penetration of the cutting tetrazolium solution. For staining, we must use the concentration of 0.025% in 90 minutes time. The tetrazolium test is effective to estimate the viability of okra seeds in tetrazolium solution of 0.075% for 90 minutes / O objetivo desse trabalho foi estudar a eficiência do teste de tetrazólio para verificar a viabilidade de sementes de quiabo. No primeiro experimento, testaram-se métodos de pré-condicionamento e preparo. Para superar a dureza tegumentar, foram avaliados três métodos visando à melhor forma de pré-condicionamento: ácido sulfúrico (96%) por 1, 3 e 6 minutos; água quente (60 °C) por 3, 6 e 10 minutos e álcool etílico (98%) durante 30, 60 e 90 minutos, utilizando quatro repetições de 25 sementes. Posteriormente, as sementes foram imersas em água a 25 °C por 18 horas e, em seguida, expostas à solução de tetrazólio (com e sem corte) nas concentrações de 0,025 e 1% durante 30, 60, 90 e 120 minutos em câmara de germinação. As sementes foram classificadas em quatro classes: sementes descoloridas, coloração fraca, satisfatória e excessiva. O segundo experimento foi realizado com base nos resultados do experimento anterior. Para isso, quatro lotes de sementes de quiabo foram submetidos ao pré-condicionamento de imersão em álcool por 60 minutos seguido de 18 horas de embebição direta em água a 25 ºC. Em seguida, as sementes foram seccionadas longitudinalmente, imersas em soluções de 0,025; 0,050 e 0,075% por 60, 90 e 120 minutos e mantidas em câmara de germinação, a 35 e 40 °C. Após esse período, as sementes foram classificadas com base na coloração (vermelho brilhante rosa ou vermelho carmim forte). Paralelamente, foi instalado o teste de germinação, cujos resultados foram empregados como referência para o teste de tetrazólio. O experimento foi conduzido em delineamento inteiramente casualisado, em esquema fatorial 3 x 3 + 1, sendo três concentrações do sal de tetrazólio, três períodos de imersão e a testemunha. As médias de sementes viáveis do teste de tetrazólio foram comparadas pelo teste Tukey a 5% de significância. Já a comparação entre as médias do teste de tetrazólio e o teste de germinação foi feita pelo teste de Dunnett a 5% de significância. Para a fase de pré-condicionamento, recomenda-se a imersão das sementes em álcool por 60 minutos, seguida de 18 horas de embebição em água destilada a 25 ºC. A realização do corte facilitou a penetração da solução de tetrazólio. O teste de tetrazólio é eficiente para estimar a viabilidade em sementes de quiabo, na concentração de 0,075% sob temperatura de 35°C por 90 minutos

En France, plus de la moitié des personnes infectées par le VHB ignore leur statut. Le programme " Optiscreen B " visait à évaluer l'intérêt des algorithmes de décision et des tests rapides pour optimiser le dépistage et la prévention de l'hépatite B. Les principaux résultats étaient : La mise en évidence d'occasions manquées de dépistage, principalement liées à une sous-estimation du risque d'exposition lié au pays de naissance.L'application des recommandations de dépistage du CDC pourrait largement diminuer la part des personnes infectées ignorant leur statut mais au prix de très nombreux dépistages.16% des personnes dépistées ont une indication à un traitement antiviral dans les mois suivant le dépistage.100% des personnes ayant des AcHBc isolés avaient une charge virale indétectable.Les TROD AgHBs ont une sensibilité comprise entre 90.5 et 96.5% et une spécificité supérieure à 99%.Le test AcHBs QuickProfileTM a une très bonne spécificité (97.8%) mais une faible sensibilité (58.3%).L'utilité en pratique des TROD VHB pour améliorer la prise en charge des personnes dépistées n'a pas été établie en population générale non ciblée, ceci en partie du fait d'une faible prévalence d'infection et de la sensibilité insuffisante des TROD AcHBs.L'utilisation de TROD AgHBs couplés aux TROD VIH et VHC semble fortement améliorer la cascade de dépistage des personnes migrantes en situation de précarité sociale, à fort risque viral.Les pratiques vaccinales post-dépistage apparaissent extrêmement faibles et le plus souvent liées à l'inertie globale du système.Suite à ce travail, l'analyse médico-économique des différentes stratégies de dépistage est à réaliser. / In France, more than half of those infected with HBV are unaware of their status. The Optiscreen B program aimed to evaluate the interest of testing recommendations and rapid tests (RT) and in optimizing screening, linkage-to-care, and prevention of hepatitis B. The main results were : Identification of missed opportunities for screening, mainly caused by underestimating country of birth as an important risk factor. Implementing screening recommendations from the CDC could significantly reduce the proportion of infected individuals unaware of their status, but with the disadvantage of many tests. 16% of persons testing HBsAg-positive after screening have an indication for antiviral treatment. 100% with isolated anti-HBcAb had undetectable HBV viral load. HBsAg RTs have sensitivities between 90.5 and 96.5% and specificities greater than 99%. The anti-HBsAb QuickProfileTM has very good specificity (97.8%) but low sensitivity (58.3%). The effectiveness of HBV RT in improving linkage-to-care was not established among persons eligible for HBV-screening. This was due in part to low infection prevalence and insufficient sensitivity of the anti-HBsAb RT. Nevertheless, combined use of HBsAg, HIV, and HCV RT seems to greatly improve the cascade of care among migrants in socially precarious situations and at high-risk of infection. HBV-vaccination after HBV screening does not occur often, mainly because of insufficient physician-patient motivation. Increased vaccination coverage might be achieved by emphasizing its need at the organizational level. Following this work, cost-benefit analysis of different screening strategies is greatly needed.