Orientador: Eduardo Bagagli / Banca: Adriana Pardini Vicentini / Banca: Renata Castiglioni Pascon / Banca: Sandra de Moraes Gimenes Bosco / Banca: Marcelo Afonso Valim / Resumo: O fungo termodimórfico Paraccocidiodes brasiliensis, em sua fase leveduriforme, é o agente etiológico de uma das mais importantes micoses sistêmicas da América Latina, a paracoccidioidomicose. A doença pode ser fatal em sua forma aguda, além de gerar, na forma crônica, lesões principalmente de ordem dermatológica e pulmonar. O fato de P. brasiliensis ser considerado uma única entidade biológica vem sendo questionado pelos recentes achados de filogenia molecular. Atualmente acredita-se que P. brasiliensis seja um complexo de quatro espécies crípticas, S1, PS2, PS3 e P. lutzii, sendo esta última a mais distante filogeneticamente. É possível que o fato esteja interferindo em aspectos relacionados à doença, como, por exemplo, a positividade do diagnóstico sorológico. Além disso, tal especiação pode significar diferenças na biologia do fungo, em aspectos como sua morfologia, fisiologia e ocupação de nichos ecológicos.A primeira frente deste trabalho visou produzir e caracterizar antígenos a partir de cepas pertencentes às diferentes espécies de P. brasiliensis, e avaliar o desempenho das mesmas em testes de imunodifusão (ID) contra pacientes das diferentes regiões do Brasil. Melhores resultados foram obtidos com o antígeno produzido por filtrado de cultura de um isolado pertencente ao grupo PS3, o qual apresentou altas taxas do antígeno imunodominante, a glicoproteína gp43, detectável por SDS-PAGE, e apresentou boa positividade nas IDs quando cruzados com soros de pacientes da região de Botucatu, reagindo inclusive com alguns soros falso-negativos para o antígeno considerado padrão, produzido pela cepa B-339. Entretanto, este antígeno, bem como outros aqui avaliados, não foi capaz de apresentar desempenho satisfatório frente a soros de pacientes da Região Centro-Oeste, justamente os que apresentam maiores taxas de negatividade, provavelmente por serem... (Resumo completo, clicar acesso eletrônico abaixo) / Abstract: The thermo-dimorphic fungus Paraccocidiodes brasiliensis is the causative agent of paracoccidioidomycosis, one of the most important systemic mycosis in Latin America. The disease can be fatal in its acute form, besides causing important lesions especially in lungs and skin when occurs in its chronic form. The fact that P. brasiliensis is considered a single biological entity has been challenged by the recent findings in molecular phylogenetics. Currently, it has been observed that P. brasiliensis is a complex of four cryptic species, S1, PS2, PS3 and Pb01-like, which is the most distantly related, being proposed as new formal species, P. lutzii. It is possible that these facts are interfering with the host/pathogen interactions, as well as with the results of serological diagnosis. Furthermore, this speciation could reflect differences in the biology of the fungus, especially on their morphology, physiology and occupation of ecological niches.The first approach of this work was to produce and characterize antigens from strains belonging to different species of P. brasiliensis, and evaluate their performance in immunodiffusion tests (ID) against sera of pacients from different regions of Brazil. The better results were obtained with the antigen produced by culture filtrate of an isolate belonging to the PS3, AgEpm83, which showed high positivity rates in IDs, against sera of patients from Botucatu. This antigen, in addition, presented high levels of the glycoprotein gp43, the immunodominant component, detectable by SDS-PAGE. However, this antigen, as well as other here evaluated, was unable to provide satisfactory performance against the sera of patients from the Brazilian Midwest Region, probably because they are infected with P. lutzii isolates. The in silico analysis of exon2 of the gene that encodes gp43 indicated that this gene is under purifying selection both... (Complete abstract click electronic access below) / Mestre

Orientador: Jane Megid / Banca: Avelino Albas / Banca: José Paes de Almeida Nogueira Pinto / Banca: Luzia Helena Queiroz / Banca: Antonio Carlos Paes / Resumo: Bezerros nascidos de vacas revacinadas contra raiva no terço final de gestação foram vacinados aos dois, quatro e seis meses de idade e revacinados 30 dias após. Os títulos de anticorpos (Ac) foram mensurados nas mães e em seus descendentes 48 horas após o parto. Os bezerros foram separados em quatro lotes com dez animais, sendo representados por bezerros não vacinados, vacinados com dois meses, quatro meses e seis meses de idade. O título de Ac antirrábicos nos bezerros dos diferentes grupos foi avaliado mensalmente e 15 dias pós vacinação e revacinação até completarem 12 meses de vida. Todas as vacas apresentaram titulo de anticorpos antirrábicos soroneutralizantes (AcSN) superiores a 0,5UI/mL 48 horas após o parto. Anticorpos transferidos pelo colostro com títulos semelhantes ao materno foram observados em todos os bezerros estudados 48 horas após o nascimento. Títulos de AcSN superiores a 0,5UI/mL se mantiveram até o 5º mês nos bezerros vacinados aos dois meses sendo que nos demais lotes houve queda nos títulos a partir do 3º mês de vida apresentando um período de desproteção decorrente de queda de anticorpos colostrais superior ao grupo vacinado aos dois meses de idade. Nenhum dos grupos de bezerros estudados apresentou resposta sorológica satisfatória a primo vacinação, porém, todos apresentaram resposta adequada após a revacinação. O estudo demonstrou que é recomendável a vacinação antirrábica em bezerros aos dois meses de idade independentemente do estado vacinal materno seguida de revacinação 30 dias após, e ao completarem 12 meses de vida / Abstract: Calves born from cows revaccinated against rabies in the final third of pregnancy were vaccinated at two, four and six months of age and revaccinated 30 days later. Seraneutralizing antibody titers (AcSN) against rabies were measured in mothers and their calves 48 hours after delivery. The calves were separated into four groups of 10 animals, represented by non-vaccinated and vaccinated calves with two months, four months and six months of age. The AcSN titers was evaluated monthly and 15 days after vaccination and revaccination until 12 months of life in each group. All cows had AcSN greater than 0,5 UI/mL 48 hours after delivery. Antibodies trasnferred by colostrum with similar titers were observed in all calves studied 48 hours after birth. AcSN titers higher than 0,5UI/mL remained to the 5th month in calves vaccinated at two month of age in contrast to the others groups that presented decrease of AcSN begining at 3th month of age until 30 days after first vaccination representing a longer period of lack of protection comparatively to the group vaccinated at two month of age. Absence of satisfatory antibody response was observed in all groups after the first vaccination, however, all calves had an adequate response after revaccination. The study demonstrated that antirabies vaccination can be recommended in calves at two months of age regardless of vaccination status of mothers being mandatory the revaccination 30 days after and at 12 months of life / Doutor

Orientador: Luiz Cláudio Nogueira Mendes / Banca: Alexandre Secorun Borges / Banca: Roberto Soares de Castro / Resumo: A Secretaria de Defesa Agropecuária estabeleceu o controle e erradicação de Maedi-Visna no Brasil, que inclui o diagnóstico laboratorial e sacrifício dos animais positivos. Com o objetivo de se determinar a ocorrência de Maedi-Visna em ovinos na região de Araçatuba-SP, foram coletadas 444 amostras de sangue de ovinos com idade entre dois e 12 anos, de ambos os sexos e de diversas raças, em 20 propriedades desta região escolhidas aleatoriamente. Exame físico geral foi feito em todos animais, incluindo-se freqüência cardíaca (FC), freqüência respiratória (FR) e temperatura retal (TR), afim de diagnosticar sinais clínicos compatíveis com a doença. Utilizou-se o kit para diagnóstico de Maedi-Visna (IDGA - Imunodifusão em gel de ágar) em amostras de soro. Doze animais reagiram positivamente ao teste, em cinco rebanhos distintos. Não houve associação significante entre prevalência da doença e a raça acometida, o sexo dos animais, os tipos de criação e nem entre as variáveis FC, FR e TR. A prevalência da doença foi de 2,7% sendo que nenhum animal positivo apresentou sinais clínicos compatível com Maedi Visna. / Abstract: The Agriculture Council established measures for control and erradication of Maedi-Visna in Brazil, by the diagnosis and sacrifice of positive animals. The goal of this study was to determine the occurrence of Maedi-Visna in sheep in Araçatuba region - SP. Blood samples were collected from 444 sheep, age range of 2-12 years old, of both sexes and of various breeds, in 20 farms, aleatorily chosen, in this region. Physical examination was performed in all animals, including heart rate, (HR) respiratory rate (RR) rate and rectal temperature (RT) to diagnose the clinical signs compatible with the disease. Agar gel immunodiffusion test (AGID) kit was used to diagnose Maedi-Visna (Biovetech, Pernambuco, Brasil) in serum samples. Twelve animals were positive on the test in 5 different herds. There was no significant interatction between disease prevalence and the breed affected, sex, types of breeding, and HR, RR, or RT. The prevalence of the disease was 2.7% and no animal considered positive for Maedi-Visna showed clinical signs compatible with Maedi-Visna. / Mestre

Orientador: Jane Megid / Banca: Marcio Garcia Ribeiro / Banca: Silvio Arruda Vasconcellos / Resumo: A brucelose canina causada pela Brucella canis (B. canis) é uma das principais causas infecciosas de desordens reprodutivas em cães. O presente trabalho teve como objetivo comparar as técnicas de Cultivo Microbiológico e Soroaglutinação Rápida em Cartão (SAR) com e sem o emprego de 2-Mercaptoetanol (2-ME) no diagnóstico da brucelose canina. Adicionalmente foram avaliados sangue, urina, swab vaginal, prepucial e sêmen como materiais a serem processados no diagnóstico microbiológico. Foram avaliados 236 cães quanto à infecção por B. canis, muitos com histórico de problemas reprodutivos, dos quais 24,2% resultaram positivos na SAR, 10,2% na SAR-2ME, 28% na hemocultura, 9,2% na urocultura, 2,1% na cultura de swab vaginal, 13,6% na cultura dos swabs prepuciais e 28,6% no cultivo de sêmen. Dos 71 animais positivos no cultivo microbiológico, 92,9% apresentaram-se positivos na hemocultura. Nos demais materiais foram obtidos percentuais menores. A sensibilidade relativa da SAR resultou em 66,2% e a especificidade relativa 93,9%. A SAR-2ME apresentou sensibilidade relativa de 29,5% com ligeiro aumento na especificidade relativa 98,2%. Quando associados SAR e hemocultura foram observados 97,6% e 93,9% de sensibilidade e especificidade, respectivamente. Os resultados sugerem a utilização associada da SAR à hemocultura sem realização em paralelo com 2-ME. / Abstract: Canine brucellosis caused by Brucella canis (B. canis) is one of the major infectious causes of reproductive disorders in dogs. The present study aimed to compare the performance of bacteriological methods and Rapid Slide Agglutination Test (RSAT) with or without 2-Mercaptoethanol (2-ME) in canine brucellosis diagnosis. Additionally, blood, urine, vaginal and prepucial swabs and semen were evaluated regarding their use in bacteriological diagnostic. Two hundred thirty six dogs, many of them showing reproductive problems, were submitted to investigation for diagnosis of B. canis infection. Among them, 24.2% were positive in RSAT, 10.2% 2ME-RSAT, 28% blood culture, 9.2% urine culture, 2.1% vaginal swab culture, 13.6% prepucial swab culture and 28.6% semen culture. Among the 71 positive dogs in bacteriological culture, 92.9% were positive in blood culture. The percentage of positivity was variable in others samples. The relative sensitivity of RSAT was 66.2% and the relative specificity was 93.9%. The 2ME-RSAT presented lower sensitivity 29.5% and greater specificity 98.2%. The use of blood culture and RSAT associated presented 97.6% e 93.9% of sensibility and specificity, respectively. These results suggest that RSAT should be used with blood cultures independently of the use of 2ME-RSAT. / Mestre

Resumo: A leishmaniose visceral canina (LVC) é causada pelo protozoário Leishmania (L.) chagasi e a presença deste parasita na pele dos cães reforça a importância destes animais no ciclo de vida da L. (L..) chagasi e na infecção humana. O objetivo deste trabalho foi avaliar o teste imunoistoquímico (IMIQ) e a PCR (Reação em Cadeia da Polimerase) em tecidos cutâneos caninos para o diagnóstico da LVC e compará-los com os exames histoquímico (HE) e sorológicos (ELISA e RIFI). Dos 34 cães naturalmente infectados, classificados em assintomáticos, oligossintomáticos e polissintomáticos, foram colhidas amostras de pele sadia ou com lesão para a realização da IMIQ, HE e PCR. Não somente peles lesionadas (56,5%), mas também peles sadias (31,8%) encontravam-se positivas pela IMIQ, confirmadas posteriormente pela PCR em 97,8% das amostras. No grupo assintomático, 87,5% estavam negativos pelos testes sorológicos, mas positivos em 50% dos casos pela IMIQ e 100% pela PCR. Entre os oligossintomáticos, 100%, 85,7% e 28,6% encontravam-se positivos, respectivamente pela PCR, sorologia e IMIQ. 91,7% dos polissintomáticos eram soro positivos e tinham parasitas intactos na pele. A PCR apresentou maior positividade, detectando amastigotas na pele de 100% dos cães independente do quadro clínico, do resultado dos exames sorológicos e do teste HE. A eficiência de cada teste variou de acordo com a evolução da doença, demonstrando a necessidade da associação de técnicas, usando IMIQ para confirmação da sorologia e a PCR apenas nos casos ainda suspeitos após a IMIQ, podendo assim aumentar os níveis de positividade e contribuir para o controle desta zoonose. / Abstract: Canine visceral leishmaniasis (CVL) is caused by a protozoa of the specie Leishmania (L.) chagasi and the presence of parasite in the skin reinforces the importance of dogs in the L. (L.). chagasi life cycle and for human infection. The purpose of the present study was to evaluate the immunohistichemistry (IMHC) and PCR (Polymerase Chain Reaction) tests for CVL diagnosis and compared the results with serological tests such as the indirect fluorescence antibody test (IFAT), ELISA and a parasitalogical test (microscopic direct examination of the parasite stained with haematoxylin and eosin - HE). For this study, samples of healthy or lesion skin tissues were obtained from 34 CVL naturally infected dogs classified in three groups: asymptomatic, oligosymptomatic and polisymptomatic. Not only lesion (56.5%) but also healthy skins (31.8%) were positives by IMHC and confirmed by PCR in 97.8% of skin samples. In asymptomatic group, 87.5% dogs were negatives by serological tests, but positives by IMHC in 50% and by PCR in 100%. In oligosymptomatic group, 100%, 85.7% and 28.6% of dogs were positives, respectively by PCR, serological and IMHC tests. In addition, 91.7% of polisymptomatic dogs were serum positives and had intact parasites in the skin. PCR showed higher positivity, detecting amastigotes in skins of 100% dogs regardless their clinical status or the serological or IMHC or HE test results. The efficiency of each test varied in agreement with the evolution of the disease. IMHC may be used to confirm the results of the serology and PCR only in suspicious cases after IMHC. The association of techniques proposed in this study may increase the positivity and contributed to the control of this zoonoses. / Orientador: Wilma Aparecida Starke Buzetti / Coorientador: Caris Maroni Nunes / Banca: Caris Maroni Nunes / Banca: Mary Marcondes / Mestre

Orientador: Helio Langoni / Banca: Katia Denise Saraiva Bresciani / Banca: Simone Baldini Lucheis / Resumo: A toxoplasmose em ovinos é uma doença parasitária de grande importância médica veterinária, zootécnica e de saúde pública, uma vez que acarreta prejuízos na criação animal, gerado pelas perdas reprodutivas e econômicas, além de sua implicação na saúde humana, já que o consumo de carne e leite contaminados podem facilitar a transmissão zoonótica. Este estudo tem como propósito maior investigar a resposta imunológica das infecções naturais por Toxoplasma gondii em ovelhas, pela análise seqüencial de imunoglobulinas, objetivando a diferenciação entre os estágios agudo e crônico da doença, bem como a pesquisa do DNA do agente no leite pela técnica de PCR. Para realização do estudo utilizaram-se ovelhas em lactação, naturalmente infectadas por T. gondii, divididas em dois grupos: G1, com sorologia positiva, e G2, sorologicamente negativo, composto por 20 ovelhas cada um. A diferenciação dos estágios da infecção toxoplásmica, agudo ou crônico foi realizada pela técnica de aglutinação direta modificada (MAT) com antígeno fixado com formalina (MAT-AF) e metanol (MAT-AM) e pela Reação de Imunofluorescência Indireta para pesquisa de imunoglobulinas IgM e IgG. Os resultados sorológicos evidenciaram que as ovelhas demonstravam perfil sorológico de cronicidade da infecção. A detecção do parasito no leite foi realizada pela reação em cadeia pela polimerase (PCR), detectando-se o DNA do T. gondii em sete amostras de leite, provenientes de cinco ovelhas soropositivas, sendo que em duas ovelhas o DNA foi detectado no leite por duas vezes. A identidade molecular dos produtos amplificados foi confirmada pelo sequenciamento., obtendo-se de 97 a 100% de identidade com T. gondii, constituindo-se em resultado relevante quanto aos aspectos de saúde pública. / Abstract: Toxoplasmosis is a major parasitary disease in sheep, due its importance in veterinary medicine and animal science and in public health, causing reproductive and economic losses to the herd, and also the prejudice to human health for the consumption of contaminated meat and milk, which can facilitate the zoonotic transmission. This study aims to investigate the immune response of natural infections by Toxoplasma gondii in sheep by sequence analysis of immunoglobulins, aiming to compare the acute and chronic stages of disease as well as DNA research agent in milk by the technique PCR. To accomplish the goal of this study, naturally infected by T. gondii lactating ewes were used, divided in two groups: G1, serologically positive, and G2, serologically negative, each group were composed by 20 ewes. The differentiation between the acute and chronic stages of the illness was made by the modified direct agglutination test (MAT) with antigens fixed with formaline (MAT-AF) and methanol (MAT-AM) and by the indirect fluorescent antibody test searching for IgM and IgG immunoglobulins. The serological results showed that the sheep showed serological profile of chronic infection. The detection of the parasite in milk was performed by polymerase chain reaction (PCR), detecting the DNA of T. gondii in seven milk samples from five seropositive sheep, and in two sheep DNA was detected in milk twice. The molecular identity of the amplified products was confirmed by sequencing, getting up for 97 to 100% identity with T. gondii, constituting an important result regarding the public health aspects / Mestre

Orientador: Mary Marcondes / Banca: Paulo César Ciarlini / Banca: Raimundo Souza Lopes / Resumo: A leishmaniose visceral é uma zoonose causada por um protozoário do gênero Leishmania, cujo agente etiológico no Brasil é a Leishmania chagasi. O primeiro caso canino autóctone no Estado de São Paulo, Brasil, foi identificado em 1998 no município de Araçatuba. Desde então a doença vem se espalhando por todo o Estado. O objetivo do presente estudo foi determinar a freqüência de ocorrência de anticorpos anti-Leishmania chagasi em amostras de soro de 584 cães de São José do Rio Preto, São Paulo, área não endêmica para a doença e que dista 160 Km de Araçatuba. Asoroprevalência foi de 0,86% por ELISA e 0,17% por imunocromatografia. Areação de imunofluorescência indireta foi utilizada em 138 amostras eidentificou 1,45% de soropositividade. O ELISA identificou cinco cães positivos,a RIFI dois e um cão foi identificado pela imunocromatografia. Um dos cãespositivo pela RIFI havia sido vacinado para leishmaniose visceral. Dois cãesque foram considerados positivos pelo ELISA indireto foram testados por PCRpara detecção da presença de Leishmania chagasi, mas os resultados foram negativos, não confirmando a doença. Somente um cão foi soropositivo em todos os métodos. Ele apresentava sinais clínicos inespecíficos e foi adquirido pelo proprietário em uma área endêmica para a doença. O diagnóstico não pôde ser confirmado por exame parasitológico direto ou PCR porque o cão morreu antes dos resultados dos exames sorológicos. Os resultados obtidos na população do presente estudo permitem concluir que São José do Rio Preto deve ser, ainda, área não endêmica para leishmaniose visceral canina. / Abstract: Visceral leishmaniasis is a zoonosis caused by a protozoa of the genus Leishmania, whose etiological agent in Brazil is Leishmania chagasi. The first canine autochthonous case of the disease in the São Paulo State, Brazil, was identified in 1998 in Araçatuba. Since then, the disease has spread to great part of the State. The aim of the present study was to determine the frequency of occurrence of anti-Leishmania chagasi antibodies in serum samples of 584 dogs from São José do Rio Preto, São Paulo, a non endemic area for the disease, 160km far from Araçatuba. Seroprevalence was 0,86% by ELISA and 0,17% by imunochromatography. IFAT, used to test 138 samples, identified 1,45% of seropositivity. ELISA identified five positive dogs, IFAT two, and immunochromatography one. One of the dogs that were considered positive by IFAT has been vaccinated for visceral leishmaniasis. Two dogs that were considered positive by indirect ELISA were tested by PCR for the presence of leishmania chagasi, but the results were negative, not confirming the disease. Only one dog was seropositive by all methods. He presented inespecific clinical signs and was acquired by his owner in an endemic area for the disease. The diagnoses could not be confirmed by direct parasitological test or PCR, because the dog has died before serologic results. The population results achieved in this study allow us to conclude that São José do Rio Preto city still must be a canine visceral leishmaniasis non-endemic area. / Mestre

Orientador: Karin Werther / Banca: Rosangela Zacarias Machado / Banca: Deise Aparecida de Oliveira Silva / Resumo: O presente trabalho objetivou estudar a susceptibilidade do carcará (Caracara plancus) frente à infecção experimental pela amostra ME49 de Toxoplasma gondii pela observação da sintomatologia clínica, análise dos parâmetros hematológicos, estudo da cinética de anticorpos IgG anti-T. gondii, e constatação da presença do parasito nos diversos tecidos utilizando a imunoistoquímica, imunofluorescência direta em tecidos, bioensaio em camundongos e PCR. Sete carcarás soronegativos para anticorpos anti-T. gondii foram separados em dois grupos: G1 (grupo infectado - 5 aves) e G2 (grupo controle - 2 aves). As aves do grupo G1 foram alimentadas durante três dias consecutivos com roedores Calomys callosus previamente infectados com T. gondii e as aves do grupo G2 foram alimentadas com roedores não infectados. As aves infectadas não apresentaram sintomas clínicos de toxoplasmose, tampouco alterações nos parâmetros hematológicos. Todas as aves infectadas soroconverteram. A soroconversão das aves experimentalmente infectadas ocorreu a partir do sétimo dia pós-infecção, os picos iniciais na produção de anticorpos IgG anti-T. gondii ocorreram entre 15 e 30 dias pós-infecção sendo que em seguida houve uma tendência de queda dos títulos de anticorpos. No momento da necropsia não foram encontradas lesões sugestivas da infecção por T. gondii. Não foi observado no exame histopatológico a presença do parasito nos diversos tecidos amostrados das aves infectadas, entretanto em uma das aves do grupo não infectado e sorologicamente negativa para anticorpos anti-T. gondii, foi encontrado um cisto tecidual na musculatura. Pelas técnicas de imunoistoquímica e imunofluorescência direta em tecidos o parasito foi encontrado em pequeno número em diversos tecidos, porém tanto nas aves do grupo infectado quanto nas aves do grupo controle. Utilizando o bioensaio em camundongos... (Resumo completo, clicar acesso eletrônico abaixo) / Abstract: The present study aimed to evaluate the susceptibility of crested caracara (Caracara plancus) to experimental infection with ME49 strain of Toxoplasma gondii, through clinical symptoms, hematological parameter analysis, kinetics of specific IgG antibodies to T. gondii, and parasite detection by immunohistochemistry, direct immunofluorescence, bioassay, and PCR. Seven crested caracara, seronegative to T. gondii antibodies, were separated into two groups: G1 (infected group - 5 birds), and G2 (control group - 2 birds). G1 birds were fed during three successive days with Calomys callosus previously infected with T. gondii, and G2 birds were fed with non-infected rodents. The infected birds did not present clinical symptoms, nor significant changes in hematological parameters. All infected birds had antibody titers to T. gondii. IgG antibodies to T. gondii were first detected at 7 dpi, with production peaks between 15 and 30 dpi, which were followed by a sharp decrease in detectable antibodies. No gross lesions sugestive of T. gondii infection were observed. By histopatological examination, it was not possible to observe the presence of the parasite in the infected birds' organs, however, in one bird of the control group, a T. gondii tissue cyst was visualized in muscle. By immunohistochemistry and direct immunofluorescence, the parasite was found in small number in different organs, although in animals from both groups. The presence of T. gondii was confirmed in heart samples of two bioassayed birds, both from the infected group. In this study, the experimentally infected crested caracaras did not show clinical symptoms, alteration on hematological parameters and the parasite was found in small numbers in the organs of the birds, for these reasons the crested caracara were resistant to T. gondii infection. / Mestre

Orientador: Hélio Langoni / Banca: Heitor Franco de Andrade Júnior / Banca: Antonio Carlos Paes / Resumo: O Toxoplasma gondii é um protozoário parasita de grande importância no contexto de produção animal e saúde pública, envolvendo alterações fetais e abortos na espécie humana e em animais, sendo ainda importante patógeno oportunista em pacientes imunocomprometidos. A técnica de aglutinação direta modificada (MAT) destaca-se por independer da origem dos anticorpos e permitir diferenciar os estágios da infecção toxoplásmica. Assim, padronizou-se a técnica de sedimentação espontânea, verificando-se que com 60 minutos, a parte líquida da suspensão apresentava predominantemente taquizoítos e raras células pequenas. O antígeno inativado pelo metanol (AM) permitiu a exposição de antígenos de fase aguda somente, enquanto que a formalina (AF) expõe tanto os de fase aguda como crônica. Testou-se o antígeno para três grupos experimentais: G1, ratas infectadas com 104 bradizoítos da cepa BTU10, genótipo I, via oral; G2, ratas infectadas com 104 bradizoítos da cepa BTU10, via oral, e imunodeprimidas com corticóide; G3, grupo controle. A comparação das MATs permitiu a diferenciação dos anticorpos IgG de fase aguda, dos de fase crônica. Gradativamente foi obtida a maturação dos anticorpos, sendo observada pela avidez das mesmas no teste de ELISA. Os anticorpos do grupo experimental se comportaram semelhantemente para as provas sorológicas, até a 13ª semana. A reagudização no G2 foi detectada na bioprova da musculatura antes que no cérebro. Com isso, verificou-se que a MAT-AM e a MAT-AF permitem a diferenciação dos estágios agudo e crônico, e ainda a caracterização da reagudização da infecção em pacientes imunocomprometidos. / Abstract: Toxoplasma gondii is a parasite protozoan with great importance to animal production and public health, involving foetal alterations and abortions in human and animal species, being an important opportunistic pathogen in immunocompromised patients. Modified agglutination test (MAT) has great importance to independ of the origin of antibody, and to allow differentiating the periods of the Toxoplasma infection. Thus, the protocol of spontaneous sedimentation we standardized, verifying that with 60 minutes, the liquid part of the suspension showed predominantly the presence of tachyzoites and rare small cells. The antigen inactivated with methanol (AM) allowed the exposition of antigens of acute phase only, while formalin (AF) as much the acute as chronic phase. Antigen was tested to three experimental groups: G1, rats infected with 104 bradyzoites of BTU10 strain, genotype I, orally; G2, rats infected with 104 bradyzoites of BTU10 strain, orally, and immunodepressed with corticoid; G3, control group. The comparation of MATs allows the differentiation of IgG from acute phase of the ones from chronic phase. A gradual maturation of immunoglobulins was gotten, being observed through the avidity of the same ones, and surveyed for ELISA. The antibodies of the experimental groups showed similar profile for all serological tests, until the 13th week. Reacutization of the infection in G2 was detected earlier in bioassay of musculature than brain. Thus, we verified that MAT-AM and MAT-AF allow the differentiation of the acute and chronic stages, and still the characterization of the reacutization of the infection in immunocompromised patients. / Mestre

Orientador: Rosangela Zacarias Machado / Banca: José Maurício Barbanti Duarte / Banca: Natalino Hajime Yoshinari / Resumo: O presente trabalho teve por objetivo pesquisar no sangue de cervos-do-pantanal (B. dichotomus), a presença de DNA de agentes rickettsiais, tais como Ehrlichia chaffeensis, E. ewingiii, E. canis, Anaplasma phagocytophilum, A. marginale e Neorickettsia risticii, pela Reação em Cadeia pela Polimerase (PCR), além de estudar a prevalência de anticorpos anti-E. chaffeensis e anti-A. phagocytophilum utilizando-se a Reação de Imunofluorescência Indireta (RIFI). Os 143 animais utilizados foram capturados durante o desenvolvimento do Projeto Cervo-do-Pantanal (1998 a 2002) na área de inundação da Usina Hidrelétrica de Porto Primavera, no Rio Paraná, e divididos em quatro sub-populações de acordo com o local e momento da captura, em áreas denominadas MS01, MS02 (Mato Grosso do Sul, antes e após a inundação, respectivamente), PX (Rio do Peixe, depois da primeira cota de inundação) e AGUA (Rio Aguapeí, depois da inundação). Na avaliação sorológica, as freqüências de animais positivos para anticorpos anti-E. chaffeensis e anti-A. phagocytophilum foram de 76,76% e 20,20% em MS01, 88,88% e 22,22% em PX, 88,88% e 5,55% em MS02, e 94,12% e 5,88% em AGUA, respectivamente. Na pesquisa de DNA, dos 143 animais testados, 61 (42,65%) foram positivos para E. chaffeensis, sendo 38 (38,38%) de MS01, 4 (44,44%) de PX, 12 de MS02 (66,66%) e 7 (41,18%) de AGUA. Amostras positivas enviadas para seqüenciamento revelaram 100% de similaridade com amostras de Ehrlichia chaffeensis da Argentina e dos Estados Unidos (números de acesso no Genbank EU826516.2 e AF416764.1, respectivamente). Já para o genogrupo de A. phagocytophilum, 70 cervos (48,95%) foram considerados positivos. Destes, 51 (51,51%) são provenientes de MS01, 12 (66,66%) de MS02 e 7 (41,18%) de AGUA. Animais provenientes de PX foram todos negativos. Amostras positivas enviadas para seqüenciamento... (Resumo completo, clicar acesso eletrônico abaixo) / Abstract: The present work had as objective to research in the blood of marsh deer (B. dichotomus), the presence of rickettsial agents DNA such as Ehrlichia chaffeensis, E. ewingii, E. canis, Anaplasma phagocytophilum, A. marginale e Neorickettsia risticii, by the Polimerase Chain Reaction (PCR), as well as studying the prevalence of anti-E. chaffeensis and anti-A. phagocytophilum antibodies using Indirect Imunofluorescence Reaction (IFA). The 143 animals that were used were captured during the development of the Marsh Deer Project (1998 to 2002) in the flood area of the Porto Primavera Hydroelectric Power Station, in Parana River, and divided in four sub-populations according to the local and moment of the capture, in areas denominated MS01, MS02 (Mato Grosso do Sul, before and after flood respectively), PX (Peixe's River, after the first flood quota) and AGUA (Aguapeí River, after flood). In the serological avaliation, the frequency of positive animals for anti-E. chaffeensis and anti-A. phagocytophilum antibodies were 76,76% and 20,20% in MS01, 88,88% and 22,22% in PX, 88,88% and 5,55% in MS02, and 94,12% and 5,88% in AGUA, respectively. In the DNA research, from the 143 tested animals, 61 (42,65%) were positive for E. chaffeensis, 38 (38,38%) from MS01, 4 (44,44%) from PX, 12 from MS02 (66,66% and 7 (41,18%) from AGUA. Positive samples send to sequency demonstrate 100% of similarity with samples of Ehrlichia chaffeensis from Argentina and United States (numbers of access in Genbank EU826516.2 and AF416764.1, respectively). For the A. phagocytophilum genogroup, 70 deers (48,95%) were considered positive. Of these, 51 (51,51%) come from MS01, 12 (66,66%) from MS02 and 7 (41,18%) from AGUA. The animals that come from PX were all negative. Positive samples send to sequencing demonstrated 99% of similarity with a sample of Anaplasma... (Complete abstract click electronic access below) / Mestre