Resumo: Foram analisadas seis espécies/citótipos de peixes do gênero Eigenmannia, Eigenmannia sp1, Eigenmannia sp2, E. cf. trilineata, Eigenmannia sp e dois citótipos de E. virescens de diferentes bacias hidrográficas brasileiras, com o uso de técnicas citogenéticas básicas (coloração com Giemsa, localização das RONs pela marcação com nitrato de Prata e bandamento C) e moleculares (hibridação fluorescente in situ com sondas de DNAr 18S e 5S, com sondas teloméricas (TTAGGG)n, com sondas para elementos retrotransponíveis Rex 1 e Rex 3 e também por microdissecção, amplificação e hibridação in situ fluorescente com sonda produzida a partir do cromossomo sexual Y de Eigenmannia sp2). As espécies/citótipos analisados apresentaram intensa variação em seus números diploides, de 2n=28 cromossomos em Eigenmannia sp1, 2n=31/32 em Eigenmannia sp2, 2n=34 em E. cf. trilineata, 2n=36 em Eigenmannia sp e 2n=38 em E. virescens, além da ocorrência de sistema sexual XX-XY no citótipo de E. virescens do rio Ribeirão Claro (chamado de E. virescens-XY) e ausência desse sistema no citótipo do rio Mogi-Guaçu (chamado de E. virescens), bem como a ocorrência de sistema múltiplo do tipo X1X1X2X2-X1X2Y em Eigenmannia sp2 do rio Araquá. O DNAr 5S está organizado em duas classes distintas e foi localizado em diferentes cromossomos entre estas espécies/citótipos, mas sempre em posição terminal dos cromossomos, com exceção apenas do par cromossômico 7 de Eigenmannia sp1, que possui DNAr 5S em posição intersticial. Ainda, sequências de DNAr 5S foram localizadas no par sexual XY do citótipo de E. virescens-XY, evidenciando uma nova característica dos cromossomos sexuais deste grupo. As RONs, identificadas pelo tratamento com nitrato de Prata e pela sonda de DNAr 18S, foram sempre localizadas em compartimentos cromossômicos distintos do DNAr 5S e, apesar de serem localizadas... (Resumo completo, clicar acesso eletrônico abaixo) / Abstract: Conventional (Giemsa, Ag-NOR, C-banding) and molecular (Fluorescent in situ hybridization with 18S and 5S rDNA probes, telomeric repeats (TTAGGG)n, Rex1 and Rex3 retrotransposable elements and microdissection, amplification and fluorescent in situ hybridization with probes produced from the Y sex chromosome of Eigenmannia sp2.) cytogenetic studies were carried out in six fish species/cytotypes of the genus Eigenmannia from different Brazilian hydrographic basins. The analyzed species/cytotypes presented an intense variation in diploid number, ranging from 2n=28 chromosomes in Eigenmannia sp1, 2n=31/32 in Eigenmannia sp2, 2n=34 in Eigenmannia cf. trilineata, 2n=36 in Eigenmannia sp to 2n=38 in E. virescens, besides the occurrence of a sex chromosome system XX-XY in the cytotypes of E. virescens from Ribeirão Claro river (named as E. virescens-XY) and absence of this sex chromosome system in the cytotypes of Mogi-Guaçu river (named E. virescens), as well as the occurrence of a multiple sex chromosome system X1X1X2X2-X1X2Y in Eigenmannia sp2 from Araquá river. The 5S rDNA is organized in two distinct classes and was located in different chromosomes between these species/cytotypes; on the other hand, the location in the terminal position of chromosomes was a conserved feature, with exception of chromosome pair 7 in Eigenmannia sp1, which had 5S rDNA sites in an interstitial position. Yet, 5S rDNA signals were detected on the XY sex chromosome of E. virescens-XY, showing some new characteristics of sex chromosomes in this group. The NORs, identified by silver nitrate staining and 18S rDNA probes, were always located in distinct chromosome compartments of 5S rDNA and besides located in different chromosomes in all analyzed samples, they remained conserved through the karyotypic differentiation process in this group. The analysis of constitutive heterochromatin... (Complete abstract click electronic access below) / Orientador: Fausto Foresti / Coorientador: José Carlos Pansonato Alves / Banca: Daniela Cristina Ferreira / Banca: Orlando Moreira Filho / Mestre

Resumo: Os chamados cromossomos supranumerários ou B, também denominados de cromossomos extras ou acessórios, são elementos genômicos adicionais e não homólogos aos do complemento A. Alguns estudiosos consideram que os cromossomos B poderiam ter sido originados dos cromossomos do complemento cariotípico e posteriormente seguido sua própria evolução, mas existem também outras hipóteses a respeito disso. A presença desse tipo de cromossomo tem sido descrita em animais e plantas e estes elementos estruturais extras constituem material genético de origem e função geralmente desconhecidas. As mudanças no complemento cariotípico relacionadas à presença dos cromossomos B e a sua distribuição têm sido descritas como participantes dos mecanismos evolutivos em vertebrados. Entre os peixes, principalmente da fauna Neotropical, a presença de cromossomos B apresenta-se de forma expressiva entre as espécies, sendo de grande interesse para estudos sobre sua estrutura, origem e função no processo de diversificação biológica. Estes cromossomos têm um comportamento diferencial, quando submetidos à coloração por bandamento C, geralmente se apresentando total ou parcialmente heterocromáticos e às vezes eucromáticos. Essas características podem ser uma forte evidência da sua provável origem e evolução independente. Portanto, sabendo-se que o entendimento sobre os cromossomos B depende de intensivas análises citogenéticas e moleculares, e com o intuito de entender a natureza dos processos envolvidos na evolução desses cromossomos, no presente trabalho foram analisados cinco populações de Moenkhausia sanctaefilomenae e as espécies Moenkhausia cosmops e Moenkhausia oligolepis pertencentes a diferentes bacias hidrográficas brasileiras. Foram utilizadas em exemplares de M. sanctaefilomenae, população do ribeirão Araquá, técnicas citogenéticas básicas... (Resumo completo, clicar acesso eletrônico abaixo) / Abstract: The so-called supernumerary or B chromosomes, also known as extra or accessory chromosomes, are additional genomic elements non-homologous to those from the standard or A complement. Some experts argue that B chromosome would have been derived from the standard karyotype that have undergone their own evolutionary history, bout other hypotheses have also been proposed. The occurrence of these chromosomes has been described in both animals and plants but the origin and function of such extra structural elements remains poorly understood. Karyotypical changes related to the presence of B chromosomes and their distribution have been reported as evolutionary mechanisms in vertebrates. Among fish, mainly neotropical ones, B chromosomes are expressively found in many species, justifying their great interest for studies about structure, origin and function during biological diversification processes. These chromosomes have a differential behavior when submitted to C-banding, being entirely or partially heterochromatic or else euchromatic. These features might be a reliable evidence of their probable independent origin and evolution. Therefore, the understanding about B chromosomes depends on intensive cytogenetic and molecular analyses, and in order to comprehend the nature of their evolutionary processes, five populations of Moenkhausia sanctaefilomenae and the species Moenkhausia cosmops and Moenkhausia oligolepis from different Brazilian hydrographic basins were analyzed in the present work. Basic cytogenetic (Giemsa staining, silver-stained NOR location and C-banding) and molecular (base-specific fluorochromes, 18S rDNA and 5S rDNA fluorescent in situ hybridization) techniques were applied on specimens of M. sanctaefilomenae from Araquá stream, to verify particularities related to heterochromatin distribution and B chromosomes, representing an interesting model for further molecular... (Complete abstract click electronic access below) / Orientador: Fausto Foresti / Coorientador: Adriane P. Wasko / Banca: Roberto Ferreira Artoni / Banca: Sanae kasahara / Banca: Débora Diniz Bezerra / Banca: Orlando Moreira Flho / Doutor

Resumo: Muitas espécies marinhas estão em risco de extinção devido à exploração excessiva e carência de manejo de nossos oceanos. Reduzir a intensidade do impacto das atividades antrópicas sobre o ambiente marinho é uma tarefa complexa, uma vez que grande parte da população mundial reside próximo às áreas costeiras, e por isso, freqüentemente depende dos recursos marinhos para sua subsistência e lazer. Essa dependência dos seres humanos em relação aos oceanos torna crucial o conhecimento dos ecossistemas marinhos para adequado manejo de seus recursos. Hoje em dia, a pesquisa nessa área é ainda bastante limitada, principalmente, devido às dificuldades de se trabalhar nos oceanos. Entretanto as análises de DNA estão contribuindo significativamente para o nosso conhecimento acerca da distribuição e saúde das populações de espécies marinhas criticamente ameaçadas. Dentre as espécies ameaçadas destaca-se o tubarão-martelo Sphyrna lewini cujas populações naturais estão atualmente em acelerada depleção devido à excessiva exploração pela pesca, principalmente para a comercialização de suas valorizadas nadadeiras nos mercados asiáticos. Esta espécie apresenta características relacionadas à sua disribuição e ao seu ciclo de vida que podem conduzir à estruturação em finaescala de suas populações. No presente trabalho foi verificada a existência de estruturação genética de S. lewini no Atlantico entre as populações do Brasil, Golfo do México e Mar do Caribe. Também foi detectada estruturação em fina escala ao longo da costa do Brasil, possivelmente em função do comportamento filopátrico de fêmeas dessa espécie e à existência de áreas de berçários costeiras. Os dados obtidos no presente trabalho evidenciam que as populações de tubarões-martelo do Atlantico Ocidental são geneticamente distintas, mesmo considerando-se curtas... (Resumo completo, clicar acesso eletrônico abaixo) / Abstract: The scalloped hammerhead shark Sphyrna lewini is a cosmopolitan species heavily exploited for fisheries and fin trade. Here we used mitochondrial DNA control region sequences to trace market-derived Sphyrna lewini fins back to their geographical region of origin. We showed that twenty-one percent of these fins were derived from the Western Atlantic, where this species is endangered. We also evaluated the population genetic structure and differentiation of S. lewini along Western Atlantic employing mtDNA and microsatellites. Our mtDNA results indicate strong population subdivision and four distinct genetic stocks along the studied area due to philopatric females with high fidelity to natal region. Contrarily, males facilitate gene flow dispersal and connection among areas as supported by low genetic differentiation verified in the 10 microsatellite loci analysis. We also report the occurrence of a rare cryptic scalloped hammerhead shark species lineage in the Southeastern Atlantic based on the analysis of nuclear (ITS2) and mitochondrial control region (CR) markers. Finally, we also developed a suite of species-specific primers sharks for global identification of sharpnose sharks (genus Rhizoprionodon). These species are morphologically very similar to one another and exhibit life-history characteristics (rapid growth, early maturity, annual reproduction) that suggests that they could be fished in a sustainable manner assuming an investment in monitoring, assessment and careful management. Here we successfully validated an approach that accurately distinguishes sharpnose sharks from a wide range of other sharks (52 species) and can therefore assist in the regulation of coastal shark fisheries around the world / Orientador: Cesar Martins / Coorientador: Otto Bismarck Fazzano Gadig / Banca: Paulo Eduardo Martins Ribolla / Banca: Andrey Leonado Fagundes Castro / Banca: Reinaldo Otávio Alvarenga Alves de Brito / Banca: Mercival Roberto Francisco / Doutor

Resumo: Bryconinae compreende um grupo de peixes com um grande número de espécies distribuídas em sistemas hidrográficos da América Central e da América do Sul. Análises cromossômicas baseadas em técnicas citogenéticas clássicas revelaram que todas as espécies estudadas até o momento apresentam cariótipos similares sem a presença de cromossomos sexuais heteromórficos. Visando ampliar os dados genéticos acerca das relações entre as espécies deste gênero e sobre a evolução cromossômica deste grupo, o objetivo do presente estudo foi isolar e caracterizar fragmentos de DNA associados a um determinado sexo e repetições de DNA satélite em Brycon cephalus e B. orbignyanus. Desta forma, uma análise de marcadores RAPD ("Random Amplified Polymorphic DNA") e uma dinâmica de digestão enzimática de DNA total foram realizadas. Sessenta e seis primers decâmeros foram utilizados em PCR revelando um fragmento de RAPD, composto por 535 pb, presente em fêmeas de B. cephalus. Dados de hibridização em membrana ("dot-blot") e de um marcador SCAR ("Sequence Characterized Amplified Region") desenvolvido confirmaram a especificidade deste fragmento a fêmeas desta espécie e revelaram sua ausência em duas outras espécies do gênero - B. orbignyanus e B. lundii.Digestões enzimáticas de DNA de B. cephalus e B. orbignyanus não evidenciaram diferenças entre machos e fêmeas. Por outro lado, as digestões realizadas com EcoRV, EcoRI, NotI, XbaI e XhoI em B. cephalus levaram à identificação de fragmentos de aproximadamente 250-300 pb em ambos os sexos que provavelmente correspondem a repetições de DNA satélite, denominadas de SatBc1, SatBc2, SatBc3, SatBc4 e SatBc5, respectivamente. A enzima HindIII permitiu a visualização de duas bandas de restrição com cerca de 650 e 850 pb (denominadas de SatBo1 e SatBo2) em machos e fêmeas de B. orbignyanus... (Resumo completo, clicar acesso eletrônico abaixo) / Abstract: Bryconinae stands for a fish group with several species that have been reported in South and Central America hydrographic systems. Chromosome analyses based on classical cytogenetic techniques have revealed that all species so far studied present similar karyotypes with no heteromorphic sex chromosomes. In order to improve genetic data on the species relationships and chromosome evolution, the purpose of the present study was to isolate and characterize sex-associated DNA fragments and satellite repeats in Brycon cephalus and B. orbignyanus. For this purpose, a random amplified polymorphic DNA (RAPD) assay and a genomic DNA restriction digestion analysis were performed. Sixty six decamer primers were used in PCR revealing a RAPD fragment, composed by 535 bp, present in females of B. cephalus. Data on dot-blot hybridization and on a designed SCAR (Sequence Characterized Amplified Region) marker confirmed its female-specificity in this species and revealed its absence in two other species of the genus - B. orbignyanus and B. lundii. Genomic DNA restriction digestions in B. cephalus and B. orbignyanus resulted in no differences between sexes of both species. However, EcoRV, EcoRI, NotI, XbaI and XhoI DNA digestions in B. cephalus led to the identification of fragments of approximately 250-300 bp in both sexes that probably correspond to satellite DNA repeats, denominated SatBc1, SatBc2, SatBc3, SatBc4 and SatBc5, respectively.The HindIII enzyme permitted the visualization of two restriction bands of around 650 and 850 bp (named as SatBo1 and SatBo2) in males and females of B. orbignyanus. Characterization of the SatBc1 fragment isolated from B. cephalus indicated that its monomeric unit is constituted by 255 bp and 52.9% AT rich. The obtained RAPD data can lead to the supposition that B. cephalus may present heteromorphic sex chromosomes that should be in an early phase... (Complete abstract click electronic access below) / Orientador: Adriane Pinto Wasko / Coorientador: Cesar Martins / Banca: Guaracy Tadeu Rocha / Banca: Lúcia Giuliano-Caetano / Mestre

Resumo: O Aedes aegypti, culicídeo de hábitos diurnos, é originário do continente africano e está globalmente distribuído pelos trópicos em associação com as populações humanas. É considerado de grande importância epidemiológica por ser o principal vetor dos quatro sorotipos do vírus da dengue e da febre amarela. Uma das primeiras detecções da presença do mosquito no Estado de São Paulo aconteceu na década de 80 na cidade de Santos. Atualmente não há disponível nenhuma vacina ou medicamento eficiente contra a dengue, assim o controle da doença está restrito ao controle do vetor. Uma das alternativas de controle e entendimento das relações vetor-patógeno-homem se baseiam no desenvolvimento de ferramentas moleculares que utilizam técnicas baseadas em PCR, as quais têm possibilitado o estudo genético das populações do Ae. aegypti. Em tais estudos, vários marcadores foram envolvidos, tais como os SNPs (Single Nucleotide Polymorphisms) e marcadores mitocondriais. Nós desenvolvemos ensaios utilizando metodologia TaqMan® para o estudo genético populacional de duas populações do mosquito Aedes aegypti de cidades portuárias do Estado de São Paulo, utilizando nove marcadores SNPs. Verificamos que esta metodologia é reprodutível, rápida, de baixo custo e eficiente para estudos em larga escala. Pela análise AMOVA encontramos uma baixa, mas significativa diferenciação genética entre as populações do estudo (FST = 0,0324; P < 0,01), e uma alta taxa de migrantes por geração (8,72 entre as populações 2007 e 5,39 entre as populações 2008), indicando fluxo gênico entre as populações. A análise implementada no software Structure 2.3.1, evidenciou a existência de três clusters baseados em semelhanças genotípicas, distribuídos em dois grupos, confirmando uma moderada estruturação populacional. Verificamos através da análise de fragmentos... (Resumo completo, clicar acesso eletrônico abaixo) / Abstract: Aedes aegypti, is a diurnal mosquito, originated from the African continent and is globally distributed through the tropics in association with human populations. It is considered of great epidemiological importance for being the main vector of the four serotypes of Dengue and Yellow Fever. One of the first detections of the presence of the mosquito in the State of São Paulo happened in the 80's, in the city of Santos. Currently there is no available vaccine or effective medicine against dengue fever, and disease control is restricted to vector control. An alternative to control and understanding of vectorpathogen- man relationships are based on the development of molecular tools that use PCR-based techniques, which have enabled the genetic study of populations of Ae. aegypti. In such studies, several markers were involved, such as SNPs (Single Nucleotide Polymorphisms) and mitochondrial ones. We have developed assays using TaqMan® methodology for population genetic studies of two populations of Aedes aegypti from the port cities of São Paulo, using nine SNPs markers. We found that this methodology is reproducible, fast, inexpensive and efficient for large-scale studies. AMOVA analysis found a low but significant genetic differentiation between the studied populations (FST = 0.0324, P <0.01), and a high rate of migrants per generation (8.72 among populations in 2007 and 5.39 among populations in 2008), indicating gene flow between populations. The analysis implemented in software Structure 2.3.1, revealed the existence of three clusters based on genotypic similarities, divided into two groups, confirming a moderate population structure. We verified through the analysis of the mitochondrial gene fragments NADH dehydrogenase subunit 4 (ND4) a high genetic differentiation between the two study populations (FST = 0.18034, P <0.01), and a rate of migrants per generation considered high... (Complete abstract click electronic access below) / Orientador: Paulo Eduardo Martins Ribolla / Coorientador: Karina dos Santos Paduan / Mestre

Orientador: Paulo Eduardo Martins Ribolla / Banca: Guilherme Loureiro Werneck / Banca: Elisa Cupolillo / Banca: Hiro Goto / Banca: Celso Luis Marino / Resumo: A leishmaniose é uma doença parasitária causada por protozoários do gênero Leishmania, e transmitida através da picada de fêmeas de mosquitos da família Plebotomidae. As formas clínicas da leishmaniose são particularmente variadas tendo como forma mais grave a leishmaniose visceral (LV) ou calazar. No Brasil a LV é causada pelo protozoário L.infantum chagasi e transmitida pelo flebotomíneo Lutzomyia longipalpis, os principais reservatórios que participam do ciclo zoonótico são canídeos selvagens e cães domésticos. O fato de as leishmanioses, de uma maneira geral, apresentarem um amplo espectro no que diz respeito à sintomatologia da doença, aliado a grande diversidade das espécies de hospedeiros infectados, sugere a presença de variantes genéticas do parasita. No caso da leishmaniose visceral, por exemplo, variantes genotípicas de L.infantum chagasi interagindo com diferentes espécies de hospedeiros podem ter papel fundamental na dinâmica de transmissão e virulência de possíveis epidemias. O presente estudo teve como meta identificar possíveis variantes genotípicas de L. infantum chagasi presentes na área endêmica de Teresina no Estado do Piauí, e comparar com os genótipos encontrados em Campo Grande no Estado de Mato Grosso do Sul e Bauru no Estado de São Paulo, visto que a história natural da doença nessas regiões é muito mais recente do que no Estado do Piauí. O estudo utilizou marcadores microssatélites já descritos na literatura, seqüenciamento de regiões gênicas codificantes e não-codificantes e também a técnica de PCR-RFLP do DNA do cinetoplasto (kDNA) do parasita, para a obtenção de perfis genéticos que possibilitem relacionar as diferenças genotípicas com as diferentes origens geográficas dos parasitas isolados como um primeiro passo para a eleição e aplicação de um marcador molecular robusto para o estudo populacional... (Resumo completo, clicar acesso eletrônico abaixo) / Abstract: Leishmaniasis is a parasitary disease caused by Leishmania protozoans and transmitted by female Phebotomidae sandflies. Clinical manifestations are particularly diverse, being visceral leishmaniasis (VL) the most severe form. In Brazil VL is caused by Leishmania infantum chagasi and transmitted by Lutzomyia longipalpis sandfly; the main zoonotic reservoirs are dogs and wild canids. Due to a broad range of disease manifestations and great variety of host species infected, Leishmania parasites are thought to possess great genotypic variability. This is of major significance in epidemiological features and in disease transmission. The aim of this study is to identify different genotypic strains of L. infantum chagasi in endemic areas of Teresina, Piauí State; Campo Grande, Mato Grosso do Sul State and Bauru, São Paulo State, and after that, select an appropriate molecular marker in order to study population genetics of L. infantum chagasi in Brazil. Microsatellites markers, sequencing of DNA coding and non-coding regions and PCR-RFLP of kinetoplast DNA (kDNA) were used in order to compare genetic profiles in parasites from different geographical origins. Among all this techniques, kDNA PCRRFLP has shown greater performance, and was able to detect a clear distinction in Teresina isolates when compared to Campo Grande and Bauru isolates / Doutor

Orientador: Catalina Romero Lopes / Banca: Edson Seizo Mori / Banca: Rogério Abdallah Curi / Resumo: O Arachis Pintoi é uma leguminosa forrageira de alta qualidade, apresentando valores de 18 a 25% de proteína bruta, 60 a 67% de digestibilidade "in vitro" da matéria seca e 60 a 72% de digestibilidade da energia bruta, além de apresentar grande aceitabilidade pelos animais. O valor nutritivo do A. Pintoi é mais alto quando comparado com gramíneas e leguminosas tropicais. No sistema de produção animal em pasto a utilização de leguminosa forrageira deve ser valorizada pela qualidade de produção e pelo alto valor nutritivo que é oferecido à dieta e também pelo aporte de nitrogênio atmosférico incorporado aos ecossistemas das pastagens. O uso de leguminosas em pastagens, no Brasil, ainda é muito limitado, seja porque o portfólio de cultivares é pequeno, ou porque o preço da semente ou do material vegetativo é elevado. Neste trabalho foram avaliados quatro genótipos de A. Pintoi (G1, G2, G3 e G4) oriundos de pré-seleção de um híbrido natural da espécie, utilizando o marcador molecular microssatélite visando à seleção de plantas homozigotas para, a partir delas, seguir o processo de melhoramento em cada genótipo para obtenção de linhagens puras. Foram utilizados nesta avaliação 14 locos de microssatélites dos quais, dez mostraram-se polimórficos e quatro monomórficos. O número de alelos observado variou de 1 a 11 por loco, com um total de 85 alelos e média de 8,5 por loco. A heterozigose observada variou de 0,3377 no loco AP183CV a 0,8701 no loco AP190CV com média de 0,6403. As plantas de maior homozigose foram selecionadas para dar continuidade ao processo de melhoramento e após avaliação agronômica poderão ser lançadas como potenciais cultivares de A. Pintoi. Considerando-se somente as plantas com homozigose superior a 70%, foi possível selecionar cinco plantas do genótipo G1 ...(Resumo completo, clicar acesso eletrônico abaixo) / Abstract: Not available. / Mestre

Resumo: A cafeína é um alcalóide do grupo das metilxantinas. Em café, sua síntese depende da ação de três enzimas: Metilxanthosina sintase (MS), Teobromina sintase (TS) e Cafeina sintase (CS). A crença de que o consumo de cafeína pode trazer problemas à saúde como também a sensibilidade aos efeitos da cafeína, em alguns consumidores, determinou um crescimento do mercado dos cafés descafeinados em pelo menos 10%. O processo de descafeinização hoje é baseado no uso de solventes, que acarreta em significante perda de compostos essenciais ao sabor e qualidade de bebida. Recentemente, foram descobertas três plantas de Coffea arabica naturalmente descafeinadas no banco de germoplasma do Instituto Agronômico de Campinas (IAC). Estas plantas foram nomeadas AC. Análises bioquímicas nas folhas de AC1 mostraram que esta planta acumula teobromina, percussor da cafeína, não sendo detectada atividade da cafeína sintase. Maluf em 2009 descreveu, a existência de transcritos extras em todas as fases de desenvolvimento de frutos de AC1. Estes transcritos também estão presentes nos estágios verde-cana e cereja de frutos do cultivar mundo novo. Esses resultados obtidos sugerem que o transcrito extra está relacionado ao mecanismo de não produção de cafeína em frutos maduros. Tais resultados representam a possibilidade do desenvolvimento de um cultivar naturalmente descafeinado, e estratégias de melhoramento vêm sendo utilizadas para a transferência desta característica para outros cultivares. O presente trabalho caracterizou as plantas com baixos teores de cafeína através de análises genéticas e moleculares. Através da analise da regulação da expressão do gene caffeine sinthase (CCS), em folhas de café com teores normais e baixos de cafeína. As quantificação dos níveis de expressão, analisados via PCR quantitativo em tempo real revelaram baixa expressão do gene em folhas... (Resumo completo, clicar acesso eletrônico abaixo) / Abstract: Caffeine is an alkaloid from the methilxanthine group. In coffee the synthesis of caffeine is carried out by three enzymes, methylxanthosine synthase (MS), theobromine synthase (TS) and caffeine synthase (CS). Due to the belief that the caffeine could cause health problems and also to consumers sensitivity to caffeine, the consumption of decaffeinated coffee increased in about 10%. The decaffeination process is based on the use of solvents, this process results in a loss of essentials compounds of flavor and cup quality. Recently, three coffee plants with extremely low levels of caffeine were identified in the IAC Coffea Germoplasm Collection, among non-cultivated C. arabica accessions. They are named AC's. Bioquimistry assays in AC1 leaves show teobromine accumulation, caffeine precursor, no activity of caffeine synthase was detected. Maluf in 2009 described the existence of extra transcript in all development of AC1 fruit. Those transcripts are also present on latter development stages, yellowish-green and cherry. The Author suggest that this extra transcript is related to non-synthesis of caffeine in mature fruits of cultivar MN and during the development of AC1 fruits. These results represent the possibility of the development of low-caffeine cultivars and coffee breeding programs are been used due to transfer this characteristic to others cultivars. In this work, the naturally caffeine free plants have been caracterizated by molecular and genetics assays. Throught the characterization of the regulation of caffeine synthase gene expression. The quantification of expression by qRT PCR show low expression in leaves of ACs plants comparing the expression of MN and ET4, same cultivar of AC. Expression assays show that abramulosa mutant has low expression comparing to MN cultivar but seperflorens mutant showed a normal expression... (Complete abstract click electronic access below) / Orientador: Ivan de Godoy Maia / Coorientador: Mirian Perez Maluf / Banca: Celso Luis Marino / Banca: Oliveiro Guerreiro Filho / Mestre

Orientador: Eduardo Bagagli / Banca: Adriana Pardini Vicentini / Banca: Renata Castiglioni Pascon / Banca: Sandra de Moraes Gimenes Bosco / Banca: Marcelo Afonso Valim / Resumo: O fungo termodimórfico Paraccocidiodes brasiliensis, em sua fase leveduriforme, é o agente etiológico de uma das mais importantes micoses sistêmicas da América Latina, a paracoccidioidomicose. A doença pode ser fatal em sua forma aguda, além de gerar, na forma crônica, lesões principalmente de ordem dermatológica e pulmonar. O fato de P. brasiliensis ser considerado uma única entidade biológica vem sendo questionado pelos recentes achados de filogenia molecular. Atualmente acredita-se que P. brasiliensis seja um complexo de quatro espécies crípticas, S1, PS2, PS3 e P. lutzii, sendo esta última a mais distante filogeneticamente. É possível que o fato esteja interferindo em aspectos relacionados à doença, como, por exemplo, a positividade do diagnóstico sorológico. Além disso, tal especiação pode significar diferenças na biologia do fungo, em aspectos como sua morfologia, fisiologia e ocupação de nichos ecológicos.A primeira frente deste trabalho visou produzir e caracterizar antígenos a partir de cepas pertencentes às diferentes espécies de P. brasiliensis, e avaliar o desempenho das mesmas em testes de imunodifusão (ID) contra pacientes das diferentes regiões do Brasil. Melhores resultados foram obtidos com o antígeno produzido por filtrado de cultura de um isolado pertencente ao grupo PS3, o qual apresentou altas taxas do antígeno imunodominante, a glicoproteína gp43, detectável por SDS-PAGE, e apresentou boa positividade nas IDs quando cruzados com soros de pacientes da região de Botucatu, reagindo inclusive com alguns soros falso-negativos para o antígeno considerado padrão, produzido pela cepa B-339. Entretanto, este antígeno, bem como outros aqui avaliados, não foi capaz de apresentar desempenho satisfatório frente a soros de pacientes da Região Centro-Oeste, justamente os que apresentam maiores taxas de negatividade, provavelmente por serem... (Resumo completo, clicar acesso eletrônico abaixo) / Abstract: The thermo-dimorphic fungus Paraccocidiodes brasiliensis is the causative agent of paracoccidioidomycosis, one of the most important systemic mycosis in Latin America. The disease can be fatal in its acute form, besides causing important lesions especially in lungs and skin when occurs in its chronic form. The fact that P. brasiliensis is considered a single biological entity has been challenged by the recent findings in molecular phylogenetics. Currently, it has been observed that P. brasiliensis is a complex of four cryptic species, S1, PS2, PS3 and Pb01-like, which is the most distantly related, being proposed as new formal species, P. lutzii. It is possible that these facts are interfering with the host/pathogen interactions, as well as with the results of serological diagnosis. Furthermore, this speciation could reflect differences in the biology of the fungus, especially on their morphology, physiology and occupation of ecological niches.The first approach of this work was to produce and characterize antigens from strains belonging to different species of P. brasiliensis, and evaluate their performance in immunodiffusion tests (ID) against sera of pacients from different regions of Brazil. The better results were obtained with the antigen produced by culture filtrate of an isolate belonging to the PS3, AgEpm83, which showed high positivity rates in IDs, against sera of patients from Botucatu. This antigen, in addition, presented high levels of the glycoprotein gp43, the immunodominant component, detectable by SDS-PAGE. However, this antigen, as well as other here evaluated, was unable to provide satisfactory performance against the sera of patients from the Brazilian Midwest Region, probably because they are infected with P. lutzii isolates. The in silico analysis of exon2 of the gene that encodes gp43 indicated that this gene is under purifying selection both... (Complete abstract click electronic access below) / Mestre

Orientador: Fernanda da Cruz Landim-Alvarenga / Banca: Sony Dimas Bicudo / Banca: José Antonio Visintin / Resumo: O primeiro sucesso na clonagem de eqüídeos através do uso de transferência nuclear foi relatado em maio de 2003 após o nascimento de uma mula clonada a partir de células fetais. Acredita-se que a utilização de células diplóides em fase do ciclo celular G0 ou G1 facilite a coordenação entre o ciclo celular e a reprogramação nuclear após a transferência de núcleo. Sendo assim, este experimento objetivou estudar o comportamento de fibroblastos de eqüinos adultos em cultura, analisando o estado do ciclo celular e a viabilidade das células em cultivo pré- e pós-descongelação. Fragmentos de pele de 6 eqüinos adultos, sendo 3 machos e 3 fêmeas, foram divididos em pedaços de aproximadamente 1mm3 e acondicionados (10 fragmentos/garrafa) no fundo de duas garrafas de cultivo (25cm2) umedecidas com 1mL SFB. As garrafas foram inclinadas para a posição vertical e adicionado 5ml de meio DMEM alta glicose + 10% SFB, 100UI/mL Penicilina / 100æg/mL Estreptomicina e 3,0æg/mL Anfotericina B. Após 30 minutos em estufa com 5% CO2 em ar, as garrafas foram dispostas em posição horizontal, para que o meio de cultivo entrasse em contato com os fragmentos teciduais. Todas as garrafas permaneceram por sete dias em estufa com 5% CO2 em ar até o início do crescimento celular. Com 70% de confluência, foi realizada a tripsinização e a primeira passagem. O mesmo procedimento foi repetido para a segunda passagem. Para os grupos de privação de soro (0,5% de SFB) foram produzidas garrafas de cultivo em duplicata para a análise da viabilidade e do ciclo celular nos períodos de 24, 48, 72, 96, 120, 144 e 168 horas de cultivo. Para os grupos de confluência foram produzidas duas garrafas de cultivo para a análise da viabilidade e do ciclo celular no período em que o tapete celular atingisse a confluência...(Resumo completo, clicar acesso eletrônico abaixo) / Abstract: The first success in equine cloning, using nuclear transfer, was reported in May of the 2003 after the birth of a cloned mule obtained from fetal cells. Nowadays there is an agreement, in the literature, that diploid cells in phase G0 or G1 of the cell cycle facilitate coordination between the cell cycle and the nuclear reprogramming after the nuclear transfer. This experiment aimed to study the behavior of equine fibroblasts in culture though the analysis of the cellular cycle and the viability of cells pre- and post-freezing. Skin fragments were obtained from 6 adult horses (3 females and 3 males) and divided in pieces of about 1 mm3. For culture, the bottoms of two culture bottles were moistened with 1 mL of FCS, 10 fragments of skin were deposited, and 5 ml of DMEM high glucose + 10% FCS, 100 IU/mL penicillin, 100 g/mL streptomycin and 3 g/ml amphotericin B were added with the bottles raised vertically. After 30 min incubation in 5% CO2 in air, the bottles were moved to a horizontal position allowing the culture media to make contact with the tissue fragments. All bottles were cultured for 7 days in 5% CO2 in air until the beginning of confluence. The complete culture media was replaced weekly and, at 70% of confluence, trypsinization (ATV Vernese, Adolfo Lutz Institute) and the first passage were performed. Two passages were performed before freezing. For the second passage, the culture and trypsinization were repeated. For cells subjected to serum starvation (0.5% FCS), culture bottles were produced in duplicate for viability and cellular cycle analysis at 24, 48, 72, 96, 120, 144 and 168 hours of culture. For the confluence groups bottles were produced for the analysis of viability and cellular cycle at the moment cells achieved confluence...(Complete abstract, click electronic address below) / Mestre