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Desenvolvimento de metodologia high-throughput para estudo populacional do mosquito Aedes aegypti e comparação de dados de genes mitocondriais /

Spenassatto, Carine. January 2011 (has links)
Resumo: O Aedes aegypti, culicídeo de hábitos diurnos, é originário do continente africano e está globalmente distribuído pelos trópicos em associação com as populações humanas. É considerado de grande importância epidemiológica por ser o principal vetor dos quatro sorotipos do vírus da dengue e da febre amarela. Uma das primeiras detecções da presença do mosquito no Estado de São Paulo aconteceu na década de 80 na cidade de Santos. Atualmente não há disponível nenhuma vacina ou medicamento eficiente contra a dengue, assim o controle da doença está restrito ao controle do vetor. Uma das alternativas de controle e entendimento das relações vetor-patógeno-homem se baseiam no desenvolvimento de ferramentas moleculares que utilizam técnicas baseadas em PCR, as quais têm possibilitado o estudo genético das populações do Ae. aegypti. Em tais estudos, vários marcadores foram envolvidos, tais como os SNPs (Single Nucleotide Polymorphisms) e marcadores mitocondriais. Nós desenvolvemos ensaios utilizando metodologia TaqMan® para o estudo genético populacional de duas populações do mosquito Aedes aegypti de cidades portuárias do Estado de São Paulo, utilizando nove marcadores SNPs. Verificamos que esta metodologia é reprodutível, rápida, de baixo custo e eficiente para estudos em larga escala. Pela análise AMOVA encontramos uma baixa, mas significativa diferenciação genética entre as populações do estudo (FST = 0,0324; P < 0,01), e uma alta taxa de migrantes por geração (8,72 entre as populações 2007 e 5,39 entre as populações 2008), indicando fluxo gênico entre as populações. A análise implementada no software Structure 2.3.1, evidenciou a existência de três clusters baseados em semelhanças genotípicas, distribuídos em dois grupos, confirmando uma moderada estruturação populacional. Verificamos através da análise de fragmentos... (Resumo completo, clicar acesso eletrônico abaixo) / Abstract: Aedes aegypti, is a diurnal mosquito, originated from the African continent and is globally distributed through the tropics in association with human populations. It is considered of great epidemiological importance for being the main vector of the four serotypes of Dengue and Yellow Fever. One of the first detections of the presence of the mosquito in the State of São Paulo happened in the 80's, in the city of Santos. Currently there is no available vaccine or effective medicine against dengue fever, and disease control is restricted to vector control. An alternative to control and understanding of vectorpathogen- man relationships are based on the development of molecular tools that use PCR-based techniques, which have enabled the genetic study of populations of Ae. aegypti. In such studies, several markers were involved, such as SNPs (Single Nucleotide Polymorphisms) and mitochondrial ones. We have developed assays using TaqMan® methodology for population genetic studies of two populations of Aedes aegypti from the port cities of São Paulo, using nine SNPs markers. We found that this methodology is reproducible, fast, inexpensive and efficient for large-scale studies. AMOVA analysis found a low but significant genetic differentiation between the studied populations (FST = 0.0324, P <0.01), and a high rate of migrants per generation (8.72 among populations in 2007 and 5.39 among populations in 2008), indicating gene flow between populations. The analysis implemented in software Structure 2.3.1, revealed the existence of three clusters based on genotypic similarities, divided into two groups, confirming a moderate population structure. We verified through the analysis of the mitochondrial gene fragments NADH dehydrogenase subunit 4 (ND4) a high genetic differentiation between the two study populations (FST = 0.18034, P <0.01), and a rate of migrants per generation considered high... (Complete abstract click electronic access below) / Orientador: Paulo Eduardo Martins Ribolla / Coorientador: Karina dos Santos Paduan / Mestre
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Distância e padrões de dispersão contemporânea de pólen e sistema de reprodução em pequeno fragmento isolado de Copaifera Langsdorfii Desf. (Leguminosae - Caesalpinoideae) /

Manoel, Ricardo de Oliveira. January 2011 (has links)
Orientador: Alexandre Magno Sebbenn / Banca: Mario Luiz Teixeira de Moraes / Banca: Ananda Virgínia de Aguiar / Resumo: O fluxo e padrões de dispersão de pólen foram investigados em um pequeno fragmento florestal isolado da espécie arbórea neotropical, polinizada por insetos da Copaifera langsdorffii, por meio da análise de paternidade e oito locos microssatélites, também foi investigado a coancestria e o tamanho efetivo populacional dentro de progênies para a conservação e recuperação ambiental. Sementes de polinização aberta (20 a 25 sementes) foram coletadas de 15 árvores matrizes de um fragmento, onde todos os indivíduos adultos foram previamente mapeados, medidos e genotipados para oito locos microssatélites. Vinte sementes foram coletadas da árvore vizinha mais próxima (1,2 km) do fragmento. Os níveis de diversidade genética foram significativamente maiores nos adultos do que nas progênies. Níveis significativos de endogamia foram detectados em progênies (F = 0,226), o que foi atribuído principalmente ao cruzamento entre parentes. A partir da análise de paternidade, baixos níveis de autofecundação (s = 8%) e imigração de pólen (m = 8%) foram observados no fragmento florestal, mas níveis muito altos foram detectados na árvore isolada (s = 20%; m = 75%), indicando que o fragmento e a árvore não estão reprodutivamente isolados e são conectados por dispersão de pólen a longas distancias (máximo detectado 1,420 m). Dentro do fragmento, o padrão de dispersão de pólen foi o vizinho próximo, com cerca de 49% do pólen se dispersando até 50 m. O tamanho efetivo populacional da árvore-matriz foi baixa, indicando a necessidade de se coletar muitas sementes de árvores (mínimo de 76 árvores) para fins de conservação. Em termos gerais, os resultados mostraram que o fragmento e a árvore isolada pela fragmentação florestal não estão reprodutivamente isoladas, embora o isolamento espacial parecesse aumentar a taxa de autofecundação e cruzamentos correlacionados / Abstract: Pollen flow, dispersal and patterns were investigated in a small and isolated forest fragment of the neotropical, insect pollinated tree Copaifera langsdorffii, using paternity analysis and eight microsatellite loci, we also investigated the coancestry and effective population size of progeny array for conservation and environmental restoration purpose. Open-pollinated seeds (20 to 25 seeds) were collected from 15 seed trees of forest fragment, where all adults trees were previously mapped, measured and genotyped by eight microsatellite loci. Twenty seeds were also collected from the neighbour tree (1.2 km) of the forest fragment. Levels of genetic diversity were significantly higher in adults than offspring. Significant levels of inbreeding were detected in offspring (F=0.226), which was attributed mainly to the mating among relatives. From paternity analysis, low levels of selfing (s=8%) and pollen immigration (m=8%) were observed in the forest fragment, but very high levels were detected in the isolated tree (s=20%; m=75%), indicating that the forest fragment and the tree are not reproductive isolated and are connected by long pollen dispersal (maximum detected 1,420 m). Within the forest fragment, the pattern of pollen dispersal was the near neighbor with about 49% of the pollen being dispersed until 50 m. The effective population size of the progeny array was low, indicating the necessity to collect seeds from many seed trees (minimum of 76 trees) for conservation purposes. In general terms, the results showed that the fragment and the tree isolated by forest fragment are not brooked the genetic connectivity, although the spatial isolation seems increase selfing rate and correlated mating / Mestre

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