Made available in DSpace on 2014-06-11T19:26:03Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2011-04-06Bitstream added on 2014-06-13T20:53:58Z : No. of bitstreams: 1 spenassatto_c_me_botib.pdf: 1377275 bytes, checksum: 6cf6a389dd380de975e39f9fc9268330 (MD5) / Fundação de Amparo à Pesquisa do Estado de São Paulo (FAPESP) / O Aedes aegypti, culicídeo de hábitos diurnos, é originário do continente africano e está globalmente distribuído pelos trópicos em associação com as populações humanas. É considerado de grande importância epidemiológica por ser o principal vetor dos quatro sorotipos do vírus da dengue e da febre amarela. Uma das primeiras detecções da presença do mosquito no Estado de São Paulo aconteceu na década de 80 na cidade de Santos. Atualmente não há disponível nenhuma vacina ou medicamento eficiente contra a dengue, assim o controle da doença está restrito ao controle do vetor. Uma das alternativas de controle e entendimento das relações vetor-patógeno-homem se baseiam no desenvolvimento de ferramentas moleculares que utilizam técnicas baseadas em PCR, as quais têm possibilitado o estudo genético das populações do Ae. aegypti. Em tais estudos, vários marcadores foram envolvidos, tais como os SNPs (Single Nucleotide Polymorphisms) e marcadores mitocondriais. Nós desenvolvemos ensaios utilizando metodologia TaqMan® para o estudo genético populacional de duas populações do mosquito Aedes aegypti de cidades portuárias do Estado de São Paulo, utilizando nove marcadores SNPs. Verificamos que esta metodologia é reprodutível, rápida, de baixo custo e eficiente para estudos em larga escala. Pela análise AMOVA encontramos uma baixa, mas significativa diferenciação genética entre as populações do estudo (FST = 0,0324; P < 0,01), e uma alta taxa de migrantes por geração (8,72 entre as populações 2007 e 5,39 entre as populações 2008), indicando fluxo gênico entre as populações. A análise implementada no software Structure 2.3.1, evidenciou a existência de três clusters baseados em semelhanças genotípicas, distribuídos em dois grupos, confirmando uma moderada estruturação populacional. Verificamos através da análise de fragmentos... / Aedes aegypti, is a diurnal mosquito, originated from the African continent and is globally distributed through the tropics in association with human populations. It is considered of great epidemiological importance for being the main vector of the four serotypes of Dengue and Yellow Fever. One of the first detections of the presence of the mosquito in the State of São Paulo happened in the 80's, in the city of Santos. Currently there is no available vaccine or effective medicine against dengue fever, and disease control is restricted to vector control. An alternative to control and understanding of vectorpathogen- man relationships are based on the development of molecular tools that use PCR-based techniques, which have enabled the genetic study of populations of Ae. aegypti. In such studies, several markers were involved, such as SNPs (Single Nucleotide Polymorphisms) and mitochondrial ones. We have developed assays using TaqMan® methodology for population genetic studies of two populations of Aedes aegypti from the port cities of São Paulo, using nine SNPs markers. We found that this methodology is reproducible, fast, inexpensive and efficient for large-scale studies. AMOVA analysis found a low but significant genetic differentiation between the studied populations (FST = 0.0324, P <0.01), and a high rate of migrants per generation (8.72 among populations in 2007 and 5.39 among populations in 2008), indicating gene flow between populations. The analysis implemented in software Structure 2.3.1, revealed the existence of three clusters based on genotypic similarities, divided into two groups, confirming a moderate population structure. We verified through the analysis of the mitochondrial gene fragments NADH dehydrogenase subunit 4 (ND4) a high genetic differentiation between the two study populations (FST = 0.18034, P <0.01), and a rate of migrants per generation considered high... (Complete abstract click electronic access below)

Resumo: O Aedes aegypti, culicídeo de hábitos diurnos, é originário do continente africano e está globalmente distribuído pelos trópicos em associação com as populações humanas. É considerado de grande importância epidemiológica por ser o principal vetor dos quatro sorotipos do vírus da dengue e da febre amarela. Uma das primeiras detecções da presença do mosquito no Estado de São Paulo aconteceu na década de 80 na cidade de Santos. Atualmente não há disponível nenhuma vacina ou medicamento eficiente contra a dengue, assim o controle da doença está restrito ao controle do vetor. Uma das alternativas de controle e entendimento das relações vetor-patógeno-homem se baseiam no desenvolvimento de ferramentas moleculares que utilizam técnicas baseadas em PCR, as quais têm possibilitado o estudo genético das populações do Ae. aegypti. Em tais estudos, vários marcadores foram envolvidos, tais como os SNPs (Single Nucleotide Polymorphisms) e marcadores mitocondriais. Nós desenvolvemos ensaios utilizando metodologia TaqMan® para o estudo genético populacional de duas populações do mosquito Aedes aegypti de cidades portuárias do Estado de São Paulo, utilizando nove marcadores SNPs. Verificamos que esta metodologia é reprodutível, rápida, de baixo custo e eficiente para estudos em larga escala. Pela análise AMOVA encontramos uma baixa, mas significativa diferenciação genética entre as populações do estudo (FST = 0,0324; P < 0,01), e uma alta taxa de migrantes por geração (8,72 entre as populações 2007 e 5,39 entre as populações 2008), indicando fluxo gênico entre as populações. A análise implementada no software Structure 2.3.1, evidenciou a existência de três clusters baseados em semelhanças genotípicas, distribuídos em dois grupos, confirmando uma moderada estruturação populacional. Verificamos através da análise de fragmentos... (Resumo completo, clicar acesso eletrônico abaixo) / Abstract: Aedes aegypti, is a diurnal mosquito, originated from the African continent and is globally distributed through the tropics in association with human populations. It is considered of great epidemiological importance for being the main vector of the four serotypes of Dengue and Yellow Fever. One of the first detections of the presence of the mosquito in the State of São Paulo happened in the 80's, in the city of Santos. Currently there is no available vaccine or effective medicine against dengue fever, and disease control is restricted to vector control. An alternative to control and understanding of vectorpathogen- man relationships are based on the development of molecular tools that use PCR-based techniques, which have enabled the genetic study of populations of Ae. aegypti. In such studies, several markers were involved, such as SNPs (Single Nucleotide Polymorphisms) and mitochondrial ones. We have developed assays using TaqMan® methodology for population genetic studies of two populations of Aedes aegypti from the port cities of São Paulo, using nine SNPs markers. We found that this methodology is reproducible, fast, inexpensive and efficient for large-scale studies. AMOVA analysis found a low but significant genetic differentiation between the studied populations (FST = 0.0324, P <0.01), and a high rate of migrants per generation (8.72 among populations in 2007 and 5.39 among populations in 2008), indicating gene flow between populations. The analysis implemented in software Structure 2.3.1, revealed the existence of three clusters based on genotypic similarities, divided into two groups, confirming a moderate population structure. We verified through the analysis of the mitochondrial gene fragments NADH dehydrogenase subunit 4 (ND4) a high genetic differentiation between the two study populations (FST = 0.18034, P <0.01), and a rate of migrants per generation considered high... (Complete abstract click electronic access below) / Orientador: Paulo Eduardo Martins Ribolla / Coorientador: Karina dos Santos Paduan / Mestre

Made available in DSpace on 2014-06-11T19:32:14Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2008-08-21Bitstream added on 2014-06-13T20:43:00Z : No. of bitstreams: 1 paduan_ks_dr_botib.pdf: 813357 bytes, checksum: f3c9241a583eb2b4877a44aae97a66eb (MD5) / Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior (CAPES) / Aedes aegypti é o principal vetor dos vírus dengue e representa cada vez mais um problema de saúde pública. O uso de inseticidas de origem orgânica ou inorgânica é uma das metodologias mais adotadas como parte do controle de vetores, entretanto, processos de resistência têm sido detectados freqüentemente. O desenvolvimento de ferramentas moleculares tem facilitado o entendimento das relações entre o vetor, patógeno e o homem. Os marcadores genéticos mais utilizados em estudos de genética de populações geralmente representam um trabalho laboratorial intenso e, em alguns casos, são limitados pela quantidade de DNA genômico extraído por indivíduo. Recentemente, a tecnologia disponível, permitiu o desenvolvimento dos marcadores SNPs (Single Nucleotide Polymorphisms) que correspondem a diferenças de um único nucleotídeo na seqüência de DNA. Assim, o presente trabalho objetivou desenvolver marcadores SNPs localizados em genes nucleares, do mosquito Ae. aegypti, para aplicação na genotipagem de populações deste vetor no Brasil. Para tanto, foram investigada seqüencias em dezoito genes nucleares de dezesseis populações do Ae. aegypti, e nove destes genes foram selecionados para a presença de SNPs. Os oito marcadores mais polimórficos foram utilizados na caracterização de três populações do mosquito anteriormente analisadas utilizando-se as técnicas de RAPD (Random Amplified Polymorphic DNA) e seqüenciamento de genes mitocondriais. Os resultados obtidos com os SNPs mostraram um alto grau de polimorfismo intra e inter populacional, mais significativo quando comparado com os estudos realizados anteriormente, além da presença de duas diferentes linhagens genéticas entre as populações geográficas estudadas. / Aedes aegypti is the primary vector of dengue fever virus and it represents a major problem of Public Health. The use of insecticides of organic or inorganic origin is one of the more accepted methodologies as part of this control, however, resistance processes have been detected constantly. The development of molecular tools has made possible the understanding of the relationships among vector, pathogen and man. The genetic markers more used in studies of genetics populations usually represent an intense laboratorial work and in some cases they are limited for the amount of genomic DNA extracted by individual. Recently, the available technology, allowed the development of the markers SNPs (Single Nucleotide Polymorphism) that correspond to differences of a single nucleotide in the sequence of DNA. Thus, this work aims to develop of SNPs markers in nuclear genes of the Ae. aegypti for application in genotyping of populations of this vector in Brazil. For so much, were investigated sequences in eighteen nuclear genes of sixteen populations of Ae. aegypti, and nine of this genes were selected to presence of the SNPs. Eight more polymorphic markers were used in the characterization of three populations of the mosquito previously analyzed using the techniques of RAPD (Random Amplified Polymorphic DNA) and sequencing of mitochondrial genes. Results obtained with the SNPs showed a high degree of polymorphic intra and interpopulations, more significantly when compared with the prior studies, besides the presence of two different genetic lineages distributed among the studied geographical populations.

Orientador: Paulo Eduardo Martins Ribolla / Banca: Fernando Araújo Monteiro / Banca: Jayme Augsto de Souza Neto / Banca: Mara Anice Mured Allum / Banca: Renata Schama / Resumo: Aedes aegypti é considerado o principal vetor de arboviroses que acomentem os seres humanos. Até o momento a única medida disponível para erradicação da dengue, é o controle do vetor, Ae. aegypti. O conhecimento aprofundado sobre a estruturação genética e dinâmica populacional dessa espécie em diferentes ambientes é crucial, uma vez que populações geneticamente diferentes podem apresentar diferenças quanto à capacidade e competência vetorial. O Brasil possui regiões com diferentes características climáticas e geográficas, assim o conhecimento detalhado sobre populações de mosquitos que colonizam diferentes habitats, é pertinente. Este trabalho avaliou a estrutura populacional de mosquitos Ae. aegypti provenientes de cinco cidades do Brasil (i.e., Belo Horizonte, Botucatu, Campo Grande, Maringá e Rondonópolis) utilizando marcadores microssatélites. Ainda, empregouse esses marcadores para investigar a dinâmica de oviposição e consequente dispersão de mosquitos Ae. aegypti em Botucatu. Em macro-análises populacionais, utilizando DAPC, observamos agrupamento entre indivíduos de mesma localidade e estruturação populacional para mosquitos de Belo Horizonte. Análises de micro-estruturação populacional identificaram seis sub-populações de mosquitos Ae. aegypti entre as seis sub-regiões de Belo Horizonte, ainda foram sugeridas estruturação populacional intermediária para mosquitos das sub-regiões de Campo Grande e falta de estruturação genética entre mosquitos das subregiões de Botucatu. Com esses resultados acreditamos que estruturação genética ocorra em correlação com o tamanho da cidade - localidades maiores parecem proporcionar estruturação genética para populações de mosquitos Ae. aegypti. Análises de PCA em ovitrampas da cidade de Botucatu apontaram organização populacional de Ae. aegypti em famílias. Análises de Pedigree e coeficiente de inbreeding, indicaram que de 30 mosquitos... / Abstract: Aedes aegypti is considered the main vector of arboviruses affecting humans. Nowadays, the only feasible measure to eradicate the dengue fever depends exclusively of vector control. The deep knowledge about the structure and dynamics of Ae. aegypti population in distinct environments is critical, since genetically different populations may present differences related to vector competence and capacity. Brazil has regions with different climatic and geographic characteristics, therefore, detailed knowledge about mosquito population that colonizes different habitats is extremely important. The present study evaluated the population structure of Ae. aegypti mosquitoes in five different Brazilian cities (i.e., Belo Horizonte, Botucatu, Campo Grande, Maringá and Rondonópolis) using a microsatellite markers. Those markers were also used to evaluate the oviposition dynamic and the consequences of Ae. aegypti mosquitoes dispersion, of the city of Botucatu. Population macro-analysis, using DAPC evidenced, genetic clusters among individuals of the same locality, and population structure in mosquitoes of Belo Horizonte. Population microstructure analysis identified six sub-populations of Ae. aegypti mosquitoes among six sub-regions of Belo Horizonte. In addition, the microstructure analysis suggested intermediate population structure in the sub-regions of Campo Grande, and lack of genetic structure among mosquitoes from the sub-regions of Botucatu. Therefore, these results indicate that genetic organization occurs in correlation with city size - where large towns seem to provide genetic structure to the populations of Ae. aegypti. PCA analysis of ovitraps obtained in Botucatu indicated population organization of Ae. aegypti mosquitoes in families. Pedigree analysis and inbreeding coefficient indicated that only for out of 30 mosquitoes analyzed in the same ovitrap, keep restricted familial relationships. These results suggest that Ae. aegypti... / Doutor

Made available in DSpace on 2016-09-27T13:40:04Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2015-05-12. Added 1 bitstream(s) on 2016-09-27T13:45:15Z : No. of bitstreams: 1 000869614.pdf: 7034100 bytes, checksum: 68b8ee31f062952cc1cfe255a55cc99e (MD5) / Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior (CAPES) / Fundação de Amparo à Pesquisa do Estado de São Paulo (FAPESP) / Aedes aegypti é considerado o principal vetor de arboviroses que acomentem os seres humanos. Até o momento a única medida disponível para erradicação da dengue, é o controle do vetor, Ae. aegypti. O conhecimento aprofundado sobre a estruturação genética e dinâmica populacional dessa espécie em diferentes ambientes é crucial, uma vez que populações geneticamente diferentes podem apresentar diferenças quanto à capacidade e competência vetorial. O Brasil possui regiões com diferentes características climáticas e geográficas, assim o conhecimento detalhado sobre populações de mosquitos que colonizam diferentes habitats, é pertinente. Este trabalho avaliou a estrutura populacional de mosquitos Ae. aegypti provenientes de cinco cidades do Brasil (i.e., Belo Horizonte, Botucatu, Campo Grande, Maringá e Rondonópolis) utilizando marcadores microssatélites. Ainda, empregouse esses marcadores para investigar a dinâmica de oviposição e consequente dispersão de mosquitos Ae. aegypti em Botucatu. Em macro-análises populacionais, utilizando DAPC, observamos agrupamento entre indivíduos de mesma localidade e estruturação populacional para mosquitos de Belo Horizonte. Análises de micro-estruturação populacional identificaram seis sub-populações de mosquitos Ae. aegypti entre as seis sub-regiões de Belo Horizonte, ainda foram sugeridas estruturação populacional intermediária para mosquitos das sub-regiões de Campo Grande e falta de estruturação genética entre mosquitos das subregiões de Botucatu. Com esses resultados acreditamos que estruturação genética ocorra em correlação com o tamanho da cidade - localidades maiores parecem proporcionar estruturação genética para populações de mosquitos Ae. aegypti. Análises de PCA em ovitrampas da cidade de Botucatu apontaram organização populacional de Ae. aegypti em famílias. Análises de Pedigree e coeficiente de inbreeding, indicaram que de 30 mosquitos... / Aedes aegypti is considered the main vector of arboviruses affecting humans. Nowadays, the only feasible measure to eradicate the dengue fever depends exclusively of vector control. The deep knowledge about the structure and dynamics of Ae. aegypti population in distinct environments is critical, since genetically different populations may present differences related to vector competence and capacity. Brazil has regions with different climatic and geographic characteristics, therefore, detailed knowledge about mosquito population that colonizes different habitats is extremely important. The present study evaluated the population structure of Ae. aegypti mosquitoes in five different Brazilian cities (i.e., Belo Horizonte, Botucatu, Campo Grande, Maringá and Rondonópolis) using a microsatellite markers. Those markers were also used to evaluate the oviposition dynamic and the consequences of Ae. aegypti mosquitoes dispersion, of the city of Botucatu. Population macro-analysis, using DAPC evidenced, genetic clusters among individuals of the same locality, and population structure in mosquitoes of Belo Horizonte. Population microstructure analysis identified six sub-populations of Ae. aegypti mosquitoes among six sub-regions of Belo Horizonte. In addition, the microstructure analysis suggested intermediate population structure in the sub-regions of Campo Grande, and lack of genetic structure among mosquitoes from the sub-regions of Botucatu. Therefore, these results indicate that genetic organization occurs in correlation with city size - where large towns seem to provide genetic structure to the populations of Ae. aegypti. PCA analysis of ovitraps obtained in Botucatu indicated population organization of Ae. aegypti mosquitoes in families. Pedigree analysis and inbreeding coefficient indicated that only for out of 30 mosquitoes analyzed in the same ovitrap, keep restricted familial relationships. These results suggest that Ae. aegypti...

Orientador: Paulo Eduardo Marins Ribolla / Banca: Sérgio Luiz Bessa Luz / Banca: Maria Anice Mured Sallum / Banca: Sérgio Russo Matioli / Banca: Denise Selivon Schepmaker / Resumo: Aedes aegypti é o principal vetor dos vírus dengue e representa cada vez mais um problema de saúde pública. O uso de inseticidas de origem orgânica ou inorgânica é uma das metodologias mais adotadas como parte do controle de vetores, entretanto, processos de resistência têm sido detectados freqüentemente. O desenvolvimento de ferramentas moleculares tem facilitado o entendimento das relações entre o vetor, patógeno e o homem. Os marcadores genéticos mais utilizados em estudos de genética de populações geralmente representam um trabalho laboratorial intenso e, em alguns casos, são limitados pela quantidade de DNA genômico extraído por indivíduo. Recentemente, a tecnologia disponível, permitiu o desenvolvimento dos marcadores SNPs (Single Nucleotide Polymorphisms) que correspondem a diferenças de um único nucleotídeo na seqüência de DNA. Assim, o presente trabalho objetivou desenvolver marcadores SNPs localizados em genes nucleares, do mosquito Ae. aegypti, para aplicação na genotipagem de populações deste vetor no Brasil. Para tanto, foram investigada seqüencias em dezoito genes nucleares de dezesseis populações do Ae. aegypti, e nove destes genes foram selecionados para a presença de SNPs. Os oito marcadores mais polimórficos foram utilizados na caracterização de três populações do mosquito anteriormente analisadas utilizando-se as técnicas de RAPD (Random Amplified Polymorphic DNA) e seqüenciamento de genes mitocondriais. Os resultados obtidos com os SNPs mostraram um alto grau de polimorfismo intra e inter populacional, mais significativo quando comparado com os estudos realizados anteriormente, além da presença de duas diferentes linhagens genéticas entre as populações geográficas estudadas. / Abstract: Aedes aegypti is the primary vector of dengue fever virus and it represents a major problem of Public Health. The use of insecticides of organic or inorganic origin is one of the more accepted methodologies as part of this control, however, resistance processes have been detected constantly. The development of molecular tools has made possible the understanding of the relationships among vector, pathogen and man. The genetic markers more used in studies of genetics populations usually represent an intense laboratorial work and in some cases they are limited for the amount of genomic DNA extracted by individual. Recently, the available technology, allowed the development of the markers SNPs (Single Nucleotide Polymorphism) that correspond to differences of a single nucleotide in the sequence of DNA. Thus, this work aims to develop of SNPs markers in nuclear genes of the Ae. aegypti for application in genotyping of populations of this vector in Brazil. For so much, were investigated sequences in eighteen nuclear genes of sixteen populations of Ae. aegypti, and nine of this genes were selected to presence of the SNPs. Eight more polymorphic markers were used in the characterization of three populations of the mosquito previously analyzed using the techniques of RAPD (Random Amplified Polymorphic DNA) and sequencing of mitochondrial genes. Results obtained with the SNPs showed a high degree of polymorphic intra and interpopulations, more significantly when compared with the prior studies, besides the presence of two different genetic lineages distributed among the studied geographical populations. / Doutor